當(dāng)歸藤的研究進(jìn)展及其質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測分析

1.廣西壯族自治區(qū)玉林市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，廣西 玉林 537000；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001；3.右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西 百色 533000

當(dāng)歸藤又名小花酸藤子、篩其蔃、土當(dāng)歸、保婦蔃等，為紫金?？菩』ㄋ崽僮覧mbeliaparvifloraWall.ex A.DC.的根與老莖[1]。分布于廣西、湖南、云南等地，全年均可采。其味苦、澀，性溫。當(dāng)歸藤不僅在《中華本草》和《全國中草藥匯編》中有所記載，還正式收載于《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1990年版和《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》第一卷。當(dāng)歸藤為壯藥四十藤之一[4]，在民間常用當(dāng)歸藤作當(dāng)歸入藥，配伍治療不孕癥、月經(jīng)不調(diào)等，故廣西少數(shù)民族地區(qū)流傳有“誰人懂得篩箕蔃(當(dāng)歸藤)，不愁不生養(yǎng)”之說[5]?！吨腥A本草》歸納當(dāng)歸藤(小花酸藤子)的功用為補(bǔ)血、活血、強(qiáng)壯腰膝，主治血虛諸證、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、產(chǎn)后虛弱、腰腿酸痛、跌打骨折[1]；據(jù)《全國中草藥匯編》記載，該藥補(bǔ)血、調(diào)經(jīng)、強(qiáng)腰膝，主治貧血、閉經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、白帶、腰腿痛[5]；《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中記載，該藥補(bǔ)血調(diào)經(jīng)、強(qiáng)腰膝，用于貧血、閉經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)、白帶、腰腿痛[2]。《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中記載，其具有通谷道水道、補(bǔ)血益精、祛濕毒的功效，可用于治療血虛(勒內(nèi))，閉經(jīng)(京瑟)，胃痛(心頭痛)，帶下(隆白呆)，風(fēng)濕骨痛(發(fā)旺)，跌打損傷(林得叮相)等病癥[3]。隨著研究的不斷擴(kuò)大和深入，當(dāng)歸藤的化學(xué)成分和藥理活性也日益受到重視。近20年來，對當(dāng)歸藤的生藥學(xué)特征、化學(xué)成分、質(zhì)量評價(jià)、藥理毒理、制劑和臨床用途等方面的研究均有相關(guān)報(bào)道。文章通過系統(tǒng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，擬從生藥學(xué)特征、化學(xué)成分、質(zhì)量評價(jià)、藥理毒理、制劑和臨床應(yīng)用等方面對當(dāng)歸藤的國內(nèi)研究概況與進(jìn)展進(jìn)行綜述。并在此基礎(chǔ)上依照質(zhì)量標(biāo)志物(Q-marker)的核心概念，從化學(xué)成分與傳統(tǒng)藥性、傳統(tǒng)功效、臨床新用途相關(guān)性、可測成分等幾個(gè)方面對當(dāng)歸藤質(zhì)量標(biāo)志物進(jìn)行預(yù)測分析，以期為當(dāng)歸藤科學(xué)合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供有益參考。

1 生藥學(xué)特征

1.1 原植物形態(tài) 當(dāng)歸藤為藤本或攀援灌木，長3～6 m；老莖具皮孔，小莖略具腺點(diǎn)或星狀毛，密被銹色長柔毛，葉柄長約 1 mm，被長柔毛，近頂端具疏腺點(diǎn)[1]。

1.2 藥材性狀 當(dāng)歸藤的根呈類圓形或圓柱形，質(zhì)硬，側(cè)根較少，木質(zhì)部(棕黃色)與射線(白色)相間排列，表皮(紅棕色)易脫落，皮層內(nèi)面有縱紋且密集。莖呈圓柱形，質(zhì)硬，斷面纖維性，表皮(灰褐色)具星狀點(diǎn)狀皮孔、白色點(diǎn)狀皮孔或腺點(diǎn)，密被銹色柔毛和縱紋，髓部(紅褐色)明顯[6]。

1.3 組織結(jié)構(gòu) 盧森華等[6]、蔡毅等[7]采用石蠟切片法對當(dāng)歸藤根、莖橫切面進(jìn)行顯微鑒別研究，并報(bào)道了當(dāng)歸藤根、莖橫切面顯微特征，如圖1～2、表1～2所示。

表1 當(dāng)歸藤根橫切面顯微特征[6-7]

表2 當(dāng)歸藤莖橫切面顯微特征[6-7]

1.4 粉末特征 盧森華等[6]、蔡毅等[7]對當(dāng)歸藤粉末進(jìn)行顯微鑒別研究，并報(bào)道了當(dāng)歸藤粉末顯微特征，如圖3、表3所示。

表3 當(dāng)歸藤藥材粉末顯微特征[6-7]

2 化學(xué)成分研究

當(dāng)歸藤的化學(xué)成分復(fù)雜，結(jié)構(gòu)多樣。目前，從當(dāng)歸藤分離得到的化合物包括黃酮類、萜類、甾體類、有機(jī)酸類、鞣質(zhì)類等。盧森華等[8]用化學(xué)反應(yīng)鑒別方法，對當(dāng)歸藤的乙醇提取液、水提取液、石油醚提取液進(jìn)行定性鑒別，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸藤中可能含有黃酮類、三萜類、甾體類、有機(jī)酸類、糖類、苷類、鞣質(zhì)、皂苷、酚類、揮發(fā)油及油脂等化學(xué)成分。陳家源等[9]從該藥材根莖的乙醇提取物中分離得到4個(gè)結(jié)晶，其中3個(gè)鑒定為α-菠甾醇、正三十烷酸及正三十烷酸乙酯，另一個(gè)結(jié)晶初步分析為具側(cè)鏈的羥基苯醌類成分。目前對當(dāng)歸藤揮發(fā)油的研究主要是對其根部、莖部和葉中揮發(fā)油的研究，盧森華等[10]對當(dāng)歸藤不同部位中揮發(fā)油成分進(jìn)行研究，采用水蒸氣蒸餾法分別提取當(dāng)歸藤根、莖、葉的揮發(fā)油成分，通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對這3個(gè)部位揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行對比研究，當(dāng)歸藤根、莖、葉揮發(fā)油中均含有棕櫚酸、肉豆蔻酸、2-正戊基呋喃和亞油酸，莖中含量最高為棕櫚酸，根中含量最高為亞油酸。闕祖亮等[11]對當(dāng)歸藤的化學(xué)成分研究，用系統(tǒng)溶劑分離法萃取得到不同極性的提取部位，然后用硅膠柱層析法對石油醚部位進(jìn)行分離純化得到4個(gè)化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定其中兩個(gè)是維生素E和豆甾醇。楊瑞云等[12]對當(dāng)歸藤化學(xué)成分的研究中，也分離得到了大量黃酮類化合物，如圖4、圖5所示。

3 質(zhì)量評價(jià)研究

3.1 化學(xué)成分提取工藝 楊瑞云等[12]對當(dāng)歸藤中總黃酮提取工藝進(jìn)行研究，采用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，考察了提取時(shí)間、乙醇濃度、提取次數(shù)和液料比對當(dāng)歸藤中總黃酮提取率的影響。結(jié)果表明，最佳提取工藝為60%乙醇，液料比12∶1，提取3次，每次 3 h，此工藝條件下當(dāng)歸藤中總黃酮的提取率為0.28%。劉靜等[13]采用紫外分光光度法，利用正交實(shí)驗(yàn)，考察了提取時(shí)間、溶劑濃度、液料比和提取次數(shù)對當(dāng)歸藤中總皂苷提取量的影響。結(jié)果表明，當(dāng)歸藤中總皂苷的最佳提取工藝為60%乙醇、液料比 8∶1、提取4次、每次 2 h。管海波等[14]采用紫外分光光度法研究不同環(huán)境條件對當(dāng)歸藤紅色素穩(wěn)定性的影響，結(jié)果表明，當(dāng)歸藤紅色素在 440 nm處有最大吸收峰，酸性條件下較穩(wěn)定，見光不穩(wěn)定，葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、苯甲酸鈉對該色素?zé)o明顯影響，金屬離子對其影響較大。

3.2 化學(xué)成分含量測定方法 在近年來已報(bào)道的研究中，測定當(dāng)歸藤藥材指標(biāo)性的成分主要為兒茶素。建立測定含量的方法多數(shù)包括高效液相色譜法和紫外-可見分光光度法。盧森華等[15]建立了當(dāng)歸藤中兒茶素的含量高效液相色譜法，色譜柱為C18柱，檢測波長為 280 nm，流動(dòng)相為甲醇-0.5%冰乙酸溶液(15∶85)，兒茶素平均回收率為 98.26%。管海波等[16]利用紫外分光光度法測定了當(dāng)歸藤中兒茶素含量，當(dāng)歸藤樣品中兒茶素平均含量為2.88%。賀年[17]也探討用紫外分光光度法測定當(dāng)歸藤中兒茶素含量的應(yīng)用效果。

4 藥理研究

當(dāng)歸藤具有補(bǔ)血、活血、益精壯陽、強(qiáng)腰膝的功效。常用于治療血虛諸癥、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、產(chǎn)后虛弱、腰腿酸痛、跌打骨折等癥[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，當(dāng)歸藤具有多種藥理活性:如抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血、抗氧化等，無明顯毒性，臨床常用量安全可行。但目前對當(dāng)歸藤還局限于一般的藥理活性研究中，尚無深入的作用機(jī)制方面的研究。

4.1 抗炎、鎮(zhèn)痛及抗凝血作用 魏中璇等[18]采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、醋酸扭體法、熱板法、腹腔毛細(xì)血管通透性及抗凝血試驗(yàn)其有效部位的作用進(jìn)行研究，分別篩選出當(dāng)歸藤的抗炎、鎮(zhèn)痛及抗凝血的有效部位。結(jié)果表明，當(dāng)歸藤醇提物正丁醇部位各劑量均有明顯的抗炎作用，當(dāng)歸藤醇提物石油醚部位中劑量有良好的鎮(zhèn)痛作用，且其抗凝血效果最好。

4.2 抗氧化作用 龐丹清等[19]通過 DPPH 和 ABTS 自由基考察當(dāng)歸藤多糖的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的抗氧化活性。管海波等[16]在對當(dāng)歸藤化學(xué)成分的研究過程中，分離得到大量的兒茶素，兒茶素藥理作用廣泛，近幾年對兒茶素的藥理活性的研究越來越多，研究顯示兒茶素有多樣的生物活性，對多種疾病的預(yù)防與治療都有使用價(jià)值，已經(jīng)有大量的臨床實(shí)驗(yàn)證明，兒茶素具有細(xì)胞調(diào)節(jié)作用以及抗氧化功能。此外兒茶素與其他抗癌藥聯(lián)合使用具有增效作用，作為抗癌輔助治療具有廣闊的前景。此外，管海波等[14]對當(dāng)歸藤紅色素進(jìn)行穩(wěn)定性研究，也發(fā)現(xiàn)該藥材具有一定的抗氧化作用。

4.3 毒副作用 盧森華等[20]對當(dāng)歸藤進(jìn)行急性毒性研究，評價(jià)當(dāng)歸藤日常用藥的安全性，結(jié)果顯示當(dāng)歸藤醇提取物和水提取物的毒性都很小(MTD > 90g/kg)，未測得灌胃給藥小鼠半數(shù)致死量LD50，最大耐受量倍數(shù)相當(dāng)成人用量的150倍。表明當(dāng)歸藤無明顯毒性，臨床用藥劑量安全。

5 制劑及臨床應(yīng)用

當(dāng)歸藤是廣西壯族和瑤族民間常用草藥，唐漢慶等[21]在探討壯醫(yī)藥理論中“公藥”“母藥”配伍規(guī)律及應(yīng)用時(shí)發(fā)現(xiàn)，白花蛇舌草和當(dāng)歸藤均有消腫散結(jié)作用，兩者相伍可用于癰瘍腫痛的治療。范麗麗等[22]在探討瑤醫(yī)盈虧平衡理論在廣西少數(shù)民族地區(qū)藥膳中的應(yīng)用時(shí)以瑤藥一身保暖養(yǎng)生湯為例，該方組成包括牛大力、當(dāng)歸藤各10g，功效為清補(bǔ)滋陰、補(bǔ)肝益腎、補(bǔ)氣活血、強(qiáng)身健體，適用于氣血虛少的婦女及中老年人。當(dāng)歸藤也是生產(chǎn)成藥的原料藥，是廣西特色中成藥桂龍藥膏的主要原藥材之一，用于慢性腰腿痛，風(fēng)濕骨痛，氣血虧虛引起的貧血、尿頻、心悸等癥。

6 質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測分析

Q-marker是劉昌孝院士[23]近年來提出的新概念，中藥Q-marker是存在于中藥材和中藥產(chǎn)品中固有的或加工過程中形成的、與中藥的功能屬性密切相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)，作為反映中藥安全性和有效性的標(biāo)志性物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量控制[24]。因此，通過以上文獻(xiàn)綜述，基于中藥Q-marker的核心概念，對當(dāng)歸藤的Q-marker進(jìn)行預(yù)測分析，有利于建立當(dāng)歸藤藥材科學(xué)的質(zhì)量控制方法。

6.1 基于植物親緣學(xué)及化學(xué)成分特有性證據(jù)的Q-marker預(yù)測分析 中藥化學(xué)成分復(fù)雜，一種中藥含有多種化學(xué)成分，而不同藥材可能含有相同的化學(xué)成分。為此，應(yīng)該在明確中藥的化學(xué)物質(zhì)組的前提下，通過化學(xué)成分的生源途徑及特有性分析，選擇具有代表性、特異性的化學(xué)成分，進(jìn)一步聚焦鎖定質(zhì)量控制指標(biāo)，可以提高質(zhì)量控制的針對性和指向性[25]。因此，從植物親緣學(xué)入手探討當(dāng)歸藤的化學(xué)成分，對于正確選擇Q-marker，提高當(dāng)歸藤質(zhì)量控制的針對性和特征性具有重要意義。

當(dāng)歸藤來源于紫金?？扑崽僮訉?Embelia)植物，酸藤子屬植物至今已發(fā)現(xiàn)140余種，分布于太平洋諸島、亞洲南部及非洲等熱帶及亞熱帶地區(qū)，我國分布有20種，從東南至西南各省區(qū)均有[26]。酸藤子屬植物的化學(xué)成分比較豐富，根皮、莖葉和果實(shí)中大多含有苯醌類、苯酚類、黃酮類、三萜類、苯丙素類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分[26]。其中苯醌類成分認(rèn)為是酸藤子屬植物的主要有效成分，是酸藤子屬植物的重要化學(xué)標(biāo)志物。迄今為止，從該屬植物中已分離得到約20個(gè)苯醌類化合物，其苯醌類化合物大多以2-羥基-1，4-苯醌為母核，且不同部位均有分布，蒽貝素作為一種藥理活性顯著的物質(zhì)，是該屬植物研究最早的化合物[27]。陳家源等[9]從當(dāng)歸藤的根莖中分離得到了帶側(cè)鏈的苯醌類化合物。通過對酸藤子屬化學(xué)成分分布差異性和特有性分析，苯醌類成分可作為當(dāng)歸藤Q(mào)-marker篩選的重要參考。

6.2 基于傳統(tǒng)功效的相關(guān)性Q-marker預(yù)測分析 傳統(tǒng)功效(功能主治)是對中藥有效性的概括，也是臨床用藥的依據(jù)[28]。當(dāng)歸藤具有補(bǔ)血、活血、益精壯陽、強(qiáng)腰膝的功效，常用于治療血虛諸癥、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、產(chǎn)后虛弱、腰腿酸痛、跌打骨折等癥[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，當(dāng)歸藤中多糖具有體外抗氧化活性[19]，兒茶素及其類似化合物具有抗氧化、保護(hù)心血管、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)保護(hù)、調(diào)節(jié)糖脂代謝等藥理作用[29]。維生素E抗氧化作用維持生育功能、維持免疫功能等作用[30]；亞油酸具有降低血脂、軟化血管、降低血壓、促進(jìn)微循環(huán)的作用，具有防治動(dòng)脈粥樣硬化及心血管疾病的保健效果[31]。這幾類化合物與當(dāng)歸藤的傳統(tǒng)功效相對應(yīng)，是當(dāng)歸藤傳統(tǒng)功效(功能主治)的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，也是當(dāng)歸藤Q(mào)-marker篩選主要途徑和重要依據(jù)。

6.3 基于傳統(tǒng)藥性的相關(guān)性Q-marker預(yù)測分析 中藥的性味歸經(jīng)是中藥的基本屬性，也是臨證治法、遣藥組方的重要依據(jù)，也應(yīng)作為質(zhì)量標(biāo)志物確定的依據(jù)之一[28]。當(dāng)歸藤味其味苦、澀，性溫。根據(jù)中藥藥性理論，“苦、澀”的物質(zhì)基礎(chǔ)首先應(yīng)具有苦、澀味的味覺特征，同時(shí)，還應(yīng)具有“苦、澀”的功能屬性。歸納總結(jié)《中國藥典》2015 年版苦味藥與歸經(jīng)的關(guān)系，可以看出苦味藥主要?dú)w肝、肺、胃經(jīng)，其化學(xué)成分大多包括生物堿、揮發(fā)油、苷類、醌類、黃酮類及苦味素等[32]。根據(jù)以上分析，當(dāng)歸藤中的苷類、醌類、黃酮類成分應(yīng)是其“性味”的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，應(yīng)將其作為當(dāng)歸藤Q(mào)-marker選擇的重要參考依據(jù)。

6.4 基于藥效學(xué)的相關(guān)性Q-marker預(yù)測分析 藥效學(xué)研究表明，當(dāng)歸藤具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血、抗氧化等多種藥理活性[16-19]。當(dāng)歸藤中的苷類、醌類、黃酮類成分是當(dāng)歸藤治療治療血虛諸癥、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、產(chǎn)后虛弱、腰腿酸痛、跌打骨折等癥的物質(zhì)基礎(chǔ)，應(yīng)將苷類、醌類、黃酮類作為當(dāng)歸藤Q(mào)-marker篩選的重要參考。

6.5 基于化學(xué)成分的可測性Q-marker預(yù)測分析 化學(xué)成分的可測性也是質(zhì)量標(biāo)志物確定的重要依據(jù)[28]。目前中藥化學(xué)成分主要通過色譜來進(jìn)行分析測定，當(dāng)歸藤質(zhì)量標(biāo)志物須能在色譜上進(jìn)行定性鑒別和定量測定，便于建立質(zhì)量評價(jià)方法，制定科學(xué)性和可行性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[33]。根據(jù)以上分析，苷類、醌類、黃酮類成分是當(dāng)歸藤質(zhì)量標(biāo)志物的重要選擇。其中，黃酮類等成分易采用色譜方法進(jìn)行測定，操作方便，前處理簡單。在近年來已報(bào)道的研究中，測定當(dāng)歸藤藥材指標(biāo)性的成分主要為兒茶素。建立測定含量的方法包括高效液相色譜法和紫外-可見分光光度法。應(yīng)聚焦當(dāng)歸藤中既有專屬性又有活性，同時(shí)易于通過色譜進(jìn)行測定的成分，將其作為當(dāng)歸藤Q(mào)-marker。

7 結(jié)語與展望

當(dāng)歸藤作為一種應(yīng)用比較廣泛的民族藥，具有一定的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)，有著廣泛的應(yīng)用前景和開發(fā)利用價(jià)值。在長期的臨床應(yīng)用中積累了一定的經(jīng)驗(yàn)，配伍治療腰腿酸痛、不孕癥、月經(jīng)不調(diào)等。因此，如何建立科學(xué)、合理的質(zhì)量評價(jià)方法，對當(dāng)歸藤的質(zhì)量進(jìn)行全面準(zhǔn)確地評價(jià)并指導(dǎo)當(dāng)歸藤資源的合理利用，對于當(dāng)歸藤產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。文章在對當(dāng)歸藤化學(xué)成分和現(xiàn)代藥理作用研究現(xiàn)狀進(jìn)行總結(jié)的基礎(chǔ)上，以中藥Q-marker的理論為指導(dǎo)，根據(jù)當(dāng)歸藤化學(xué)成分和功效、性味相關(guān)證據(jù)，并結(jié)合酸藤子屬植物苯醌類成分生源途徑分析，對當(dāng)歸藤Q(mào)-marker的篩選和確定進(jìn)行了系統(tǒng)性的文獻(xiàn)分析和論證。

隨著國內(nèi)對當(dāng)歸藤的應(yīng)用越來越廣泛，但在目前的研究報(bào)道中，對當(dāng)歸藤的研究比較零散，缺乏系統(tǒng)性研究，當(dāng)歸藤的化學(xué)成分以及藥理作用方面的研究還不透徹和全面，如何更好地開發(fā)和利用廣西民族藥當(dāng)歸藤藥材資源，為其臨床應(yīng)用提供充分的藥學(xué)依據(jù)，還有待在系統(tǒng)的藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)和藥物分析等方面進(jìn)行進(jìn)一步的深入研究[34]。后期，本課題組將基于當(dāng)歸藤Q(mào)-marker的預(yù)測分析對其質(zhì)量進(jìn)行深入研究，篩選并確定當(dāng)歸藤的質(zhì)量標(biāo)志物，建立質(zhì)量分析和評價(jià)方法，以便于建立當(dāng)歸藤質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系[35]。