阿爾泰金蓮花浸膏粉對(duì)PM 2.5致大鼠急性肺損傷的保護(hù)作用

陳文龍，由淑萍，趙 軍，張 杰，劉 濤，*

（1.新疆醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院基礎(chǔ)護(hù)理教研室，新疆 烏魯木齊830011；3.新疆藥物研究所維吾爾藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830011；4.新疆醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊830011）

隨著我國(guó)工業(yè)及經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，細(xì)顆粒物（PM2.5）引起的居民健康問(wèn)題得到了廣泛關(guān)注。PM2.5是指空氣動(dòng)力學(xué)直徑≤2.5μm的顆粒物，可被吸入人體肺部進(jìn)入血液循環(huán)，導(dǎo)致心血管、呼吸系統(tǒng)疾病發(fā)病率及病死率增加[1-2]。據(jù)研究顯示[3]，PM2.5對(duì)呼吸系統(tǒng)的損害主要集中在早期炎性損傷階段，即急性肺損傷（acute lung injury，ALI），它是由呼吸系統(tǒng)急性炎癥所致的臨床常見(jiàn)的急性重癥綜合征[4]。金蓮花又名旱金蓮，是毛莨科金蓮花屬草本植物，其中金蓮花屬中的阿爾泰金蓮花是新疆哈薩克醫(yī)學(xué)特色藥材，具有清熱解毒、止血止咳等功效[5-6]，據(jù)相關(guān)研究[7-8]證實(shí)其主要活性物質(zhì)為黃酮類(lèi)化合物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒等活性。本研究采用PM2.5誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷模型，觀察阿爾泰金蓮花浸膏粉（Trollius altaicus extract powder，TAEP）對(duì)肺損傷模型大鼠血清生化指標(biāo)、細(xì)胞因子以及肺病理組織學(xué)的影響，探究金蓮花防治呼吸系統(tǒng)炎癥的藥效價(jià)值，為推進(jìn)中藥現(xiàn)代化及研發(fā)防治PM2.5所致急性肺損傷的藥物或保健食品提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

阿爾泰金蓮花于2016年8月在新疆阿勒泰地區(qū)采集，由新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所何江副研究員鑒定為毛莨科金蓮花屬阿爾泰金蓮花。經(jīng)回流提取法，料∶液比為1∶20，70%乙醇于100℃回流提取兩次，每次1 h，過(guò)濾后，合并濾液濃縮得到TAEP，出膏率33.9%（每克浸膏粉相當(dāng)于2.95 g阿爾泰金蓮花）[9-10]。經(jīng)高速逆流色譜分離純化TAEP，發(fā)現(xiàn)其主要活性成分為黃酮類(lèi)化合物，使用前需用0.5%羧甲基纖維素（carboxymethylcellulose，CMC）-鈉溶解配制成設(shè)定劑量受試物溶液。生理鹽水、1%戊巴比妥鈉和4%多聚甲醛（廣州賽國(guó)生物科技有限公司），地塞米松磷酸鈉注射液（河南潤(rùn)弘制藥股份有限公司），LDH試劑盒、NO試劑盒、GSH試劑盒、SOD試劑盒、MDA試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；TNF-αELISA試劑盒、IL-6 ELISA試劑盒、IL-1βELISA試劑盒均購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司。

微電腦大流量采樣器KB-1000型（青島金仕達(dá)電子科技有限公司），恒溫水浴鍋HH-501型（常州萬(wàn)合儀器制造有限公司），離心機(jī)TDL-40C型（上海安亭科學(xué)儀器廠），全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀BC-5000 Vet型（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司），全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國(guó)BIORAD公司），紫外分光光度計(jì)（日本島津儀器公司）。

1.2 PM2.5采集與制備

2017年11月—2018年3月，于新疆烏魯木齊市某教學(xué)樓樓頂及某區(qū)疾病預(yù)防控制中心樓頂采樣，架設(shè)采樣儀器后，將捕獲膜毛面向上置于切割器中固定，再將采樣膜毛面向上固定在切割器下方的孔板中，流量設(shè)定為100 L/min，每采樣105 min，間隔15 min，每片膜放置24 h，含塵面對(duì)折后密封袋封裝放置于-80℃低溫冰箱保存，雨雪天停止采樣。采集結(jié)束后將濾膜剪為1 cm×2 cm大小，置于雙蒸水中，超聲震蕩（40 Hz）40 min×3次，6層無(wú)菌紗布過(guò)濾，濾液經(jīng)4 000 r/min離心10 min，收集底部沉淀置于玻璃平皿中，封口膜封口后扎細(xì)密小孔，-80℃低溫冰箱過(guò)夜冷凍后真空干燥24 h，取得呈黑灰色的絮狀PM2.5，保存于-20℃冰箱待用。使用時(shí)將干燥后的PM2.5粉末溶于蒸餾水，經(jīng)玻璃棒攪拌后使用旋渦混勻器混勻，在使用前用超聲清洗機(jī)超聲震蕩混勻，并略微加熱，配制成相應(yīng)懸液。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)方法

SPF級(jí)SD大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（新）2016-0003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（新）2016-0002。飼養(yǎng)環(huán)境：溫度22～24℃，濕度30%～50%，12 h/12 h晝夜交替。

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型組，TAEP 125、250、500 mg/kg劑量組，地塞米松（2 mg/kg）陽(yáng)性對(duì)照組，每組10只。正常對(duì)照組和模型組給予相同體積的蒸餾水，其他各組按設(shè)定劑量灌胃給予受試物，連續(xù)給藥30 d，陽(yáng)性對(duì)照組在造模前1 h灌胃給予2 mg/kg地塞米松。第30天灌胃后2 h，除正常對(duì)照組滴注相同體積的生理鹽水外，其余各組均采用預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的氣管滴注法向大鼠氣管內(nèi)緩慢注入PM2.5溶液14 mg/kg，造成大鼠急性肺損傷，造模3 h后，經(jīng)大鼠腹主動(dòng)脈取血，取1 mL全血于全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)及計(jì)數(shù)，其余血樣于4℃、1 500 r/min離心15 min，分離上清液，待測(cè)；將5 mL PBS緩慢注入大鼠左肺分3次（2 mL、1.5 mL、1.5 mL）進(jìn)行肺泡灌洗，20～25 min內(nèi)完成，混合3次灌洗液使用離心機(jī)于4℃，1 500 r/min離心15 min，收集上清液，分裝后保存于-80℃超低溫冰箱中待測(cè)；取大鼠右肺上葉用甲醛固定，做病理組織學(xué)檢查，取右肺下葉，用濾紙擦干表面水分后稱質(zhì)量，錫箔紙包裹后于恒溫鼓風(fēng)干燥箱80℃干燥48 h，剝離錫箔紙后稱其干質(zhì)量，計(jì)算肺大鼠右肺下葉濕質(zhì)量（W）/大鼠右肺下葉干質(zhì)量（D）比值。

為了明確TAEP對(duì)PM2.5致急性肺損傷大鼠肺組織病理分級(jí)，我們根據(jù)Roderick等[11]于1997建立的病理學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，將肺損傷狀況分為0～Ⅳ級(jí)（分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)如表1所示）。

表1 ALI病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

每劑量組選取8張病理切片，每片鏡下分別截取2張200倍及400倍彩圖照片，基于肺泡上皮細(xì)胞損傷程度，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度，以及肺泡壁增厚程度等病理指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分過(guò)程中嚴(yán)格采用雙盲法進(jìn)行病理分級(jí)。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 血清生化指標(biāo)檢測(cè) 使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)大鼠血清LDH、NO、GSH、SOD、MDA含量，用相應(yīng)ELLSA試劑盒檢測(cè)大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β含量，檢測(cè)環(huán)節(jié)及操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4.2 BALF生化指標(biāo)檢測(cè) 使用相應(yīng)ELLSA試劑盒檢測(cè)大鼠肺泡灌洗液（bronohoalveolar lavage fluid，BALF）中TNF-α、IL-6、IL-1β含量，檢測(cè)環(huán)節(jié)及操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4.4 組織病理學(xué)觀察 取右肺上葉用4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片（厚度4～6μm）后HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察其病理變化。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以xˉ±s表示，采用單因素方差分析，LSD進(jìn)行組間比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，等級(jí)資料采用多組獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠白細(xì)胞（WBC）、淋巴細(xì)胞（LYM）、中性粒細(xì)胞（NEUT）計(jì)數(shù)均升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）；與模型組比較，TAEP各劑量組及地塞米松陽(yáng)性對(duì)照均能顯著降低ALI大鼠WBC及NEUT計(jì)數(shù)（P均＜0.05），TAEP 500 mg/kg組及陽(yáng)性對(duì)照組可降低ALI大鼠LYM計(jì)數(shù)（P均＜0.05）；與 125 mg/kg組比較，TAEP 250、500 mg/kg組WBC計(jì)數(shù)降低（P均＜0.05），500 mg/kg組LYM及NEUT計(jì)數(shù)降低（P均＜0.05），組間呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系（r=0.36，P=0.02）；TAEP 500 mg/kg組抑制炎癥細(xì)胞效果接近于地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組（P均＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)的影響（×109/L，n=10，±s）

表2 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)的影響（×109/L，n=10，±s）

與正常對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與TAEP 125 mg/kg 組比較，#P＜0.05.

分組正常對(duì)照組模型組TAEP組劑量/（mg/kg）--地塞米松組125 250 500 2白細(xì)胞計(jì)數(shù)3.41±0.37 7.62±0.79△△6.73±0.38△△*5.51±0.08△△*#4.91±0.79△△**#4.35±0.23△△**淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)0.87±0.11 2.86±0.67△△2.64±0.14△△2.42±0.69△△1.86±0.14△△*#1.49±0.22△△*中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)1.75±0.51 4.33±0.32△△3.45±0.34△△*3.16±0.25△△*2.77±0.41△△**#2.20±0.57△△**

2.2 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠血清及BALF中細(xì)胞因子的影響

見(jiàn)表3。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）；與模型組比較，TAEP各劑量組及地塞米松組干預(yù)可降低大鼠血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α含量（P均＜0.05或0.01）；與125 mg/kg組比較，250 mg/kg組血清和BALF中IL-1β含量降低（P均＜0.05）；與250 mg/kg組比較，500 mg/kg組血清和BALF 中IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低（P均＜0.05），組間呈一定劑量效應(yīng)關(guān)系（r=0.52，P=0.04）；TAEP 500 mg/kg組血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α含量與地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組接近，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。

表3 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠血清及BALF中細(xì)胞因子的影響（pg/mL，n=10s）

表3 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠血清及BALF中細(xì)胞因子的影響（pg/mL，n=10s）

與正常對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與125 mg/kg TAEP組比較，#P＜0.05；與250 mg/kg TAEP組比較，##P＜0.05.

分組正常對(duì)照組模型組TAEP組劑量（mg/kg）血清BALF--地塞米松組125 250 500 2 IL-1β 62.19±7.89 85.31±4.11△△83.34±6.345△△77.47±5.14△△*#72.33±3.87△△**##68.43±4.61△**IL-6 676.98±8.56 864.33±3.83△△812.49±3.41△△*788.92±3.55△△*747.57±5.54△△**##729.36±7.18△△**TNF-α 53.98±6.19 96.55±4.35△△87.34±2.77△△*81.46±6.24△△*74.67±8.20△△**##66.38±7.43△△**IL-1β 36.54±3.82 66.57±4.63△△64.22±3.76△△56.81±6.28△△*#52.17±2.19△△**##42.33±5.46△**IL-6 347.92±7.13 463.31±4.33△△421.37±7.18△△*403.61±3.27△△*378.71±6.06△**##360.07±4.81△**TNF-α 27.34±7.68 63.28±6.34△△56.63±3.59△△*53.78±4.36△△*47.17±6.22△△**##42.62±4.10△△**

2.3 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠血清中LDH、SOD、GSH活性及MDA、NO含量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中SOD、GSH含量降低，LDH、MDA、NO含量升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。與模型組比較，TAEP各劑量組及地塞米松組干預(yù)能夠升高大鼠血清SOD、GSH含量，降低LDH、MDA、NO含量（P均＜0.05或0.01）；TAEP 125、250、500 mg/kg組SOD、GSH含量隨著受試物濃度升高而上升，LDH、MDA、NO含量隨著受試物濃度升高而下降，500 mg/kg組與125 mg/kg組比較，各指標(biāo)差異顯著（P均＜0.05）；TAEP 500 mg/kg組抗氧化效果與地塞米松組比較接近，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見(jiàn)表4。

表4 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠血清中LDH、SOD、GSH活性及MDA、NO含量的影響（n=10，

表4 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠血清中LDH、SOD、GSH活性及MDA、NO含量的影響（n=10，

與正常對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與125 mg/kg TAEP組比較，#P＜0.05.

NO濃度/（μmol/L）43.17±6.34 102.34±3.66△△87.72±5.35△△*82.12±4.53△△*76.24±1.37△△*#52.18±1.59△**分組正常對(duì)照組模型組TAEP組劑量/（mg/kg）--地塞米松組125 250 500 2 LDH濃度/（U/L）207.13±7.27 343.11±4.88△△317.81±6.35△△*283.94±6.25△△*228.39±7.46△**#176.78±3.86△**SOD濃度/（U/mL）111.35±2.23 89.59±4.43△125.71±1.85△*130.52±2.48△*133.87±3.64△*#154.22±6.31△**GSH濃度/（μmol/L）3.37±1.14 1.39±0.48△△4.21±1.33△**5.01±1.67△△**5.84±0.32△△**#10.66±3.37△△**MDA濃度/（nmol/mL）37.69±7.42 115.82±3.74△△89.07±4.33△△*82.36±4.04△△*76.15±3.87△△*#57.18±2.31△△**

2.4 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠肺組織W/D的影響

與正常對(duì)照比較，模型組大鼠W/D升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）；與模型組比較，TAEP各劑量組及地塞米松組干預(yù)能夠降低ALI大鼠肺W/D（P均＜0.05）；TAEP 125、250、500 mg/kg組W/D隨TAEP劑量升高呈降低趨勢(shì)，125 mg/kg組與500 mg/kg組間差異顯著（P＜0.05）；TAEP 500 mg/kg 組W/D與地塞米松組接近（P均＞0.05），見(jiàn)表5。

2.5 病理組織學(xué)觀察

正常對(duì)照組動(dòng)物肺臟肺泡排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯水腫和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，支氣管及細(xì)支氣管均結(jié)構(gòu)完整（圖1A）；與正常對(duì)照組相比，模型組動(dòng)物肺臟可見(jiàn)肺泡間隔增寬，肺臟炎細(xì)胞浸潤(rùn)及新鮮出血（圖1B）。與模型組相比，TAEP 125 mg/kg組動(dòng)物肺臟可見(jiàn)肺泡間隔增寬，支氣管周?chē)准?xì)胞浸潤(rùn)（圖1C）；TAEP 250 mg/kg組動(dòng)物肺臟可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡及各級(jí)支氣管均結(jié)構(gòu)完整（圖1D）；TAEP 500 mg/kg組動(dòng)物肺臟可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡及各級(jí)支氣管均結(jié)構(gòu)完整（圖1E）；地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組動(dòng)物肺臟肺泡及各級(jí)支氣管均結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1F）。綜上所述，各組之間比較結(jié)果顯示，TAEP 500 mg/kg組與地塞米松組動(dòng)物肺臟組織病理學(xué)觀察結(jié)果更為相近。

2.6 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠肺組織病理分級(jí)的非參數(shù)檢驗(yàn)

見(jiàn)表5。非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果顯示總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠肺組織病理分級(jí)各組間分布不同。與對(duì)照組比較，模型組秩均值顯著升高（P均＜0.01）；與模型組比較，TAEP各劑量組秩均值均明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05或P均＜0.01）；TAEP 125、250、500 mg/kg組秩均值逐漸下降，與125 mg/kg組比較，250和500 mg/kg組秩均值顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），TAEP各劑量組與地塞米松組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。

圖1 大鼠急性肺損傷病理組織學(xué)觀察（HE，×40）

表5 TAEP對(duì)PM2.5致ALI大鼠肺組織病理分級(jí)的非參數(shù)檢驗(yàn)和對(duì)肺組織W/D的影響（n=8）

3 討論

近些年，空氣污染已成為影響人類(lèi)健康的重要因素之一，PM2.5由于粒徑小，比表面積大等特性，易于進(jìn)入血液循環(huán)，造成呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)疾病[12]，目前認(rèn)為PM2.5對(duì)呼吸系統(tǒng)損傷的主要機(jī)制為以下幾方面[13]：自由基過(guò)氧化損傷；細(xì)胞鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)；巨噬細(xì)胞的損傷。由于PM2.5的來(lái)源受工業(yè)粉塵、化學(xué)燃料燃燒、風(fēng)沙揚(yáng)塵等影響，不同地區(qū)PM2.5組分差異性較大，因而采用公認(rèn)的PM2.5采集方法十分必要[14]。本研究中的采樣儀器是用于環(huán)境檢測(cè)部門(mén)采集大氣中總懸浮顆粒物及PM樣品的必備儀器，符合WHO及美國(guó)國(guó)家EPA標(biāo)準(zhǔn)，符合我國(guó)環(huán)保局及企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)條例[15]。儀器中加裝了QG-1000型PM切割器，通過(guò)捕獲膜篩選出符合標(biāo)準(zhǔn)的PM2.5顆粒，采樣時(shí)間則固定在冬季供暖期。由于本研究建立的是大鼠ALI模型，通過(guò)前期急性毒性實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)采用大鼠氣管滴注技術(shù)將PM2.5粉末配置成14 mg/kg劑量的混懸液造模效果最佳。

ALI是由各種內(nèi)外致病因素所導(dǎo)致的急性、進(jìn)行性的肺部炎癥反應(yīng)綜合征，可造成肺泡上皮及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，伴彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，其發(fā)展至嚴(yán)重階段為急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）[16]。目前對(duì) ALI/ARDS尚無(wú)特效療法，大多研究集中于藥物治療和機(jī)械通氣[17]。我國(guó)擁有豐富的民族中藥資源，阿爾泰金蓮花作為新疆民族特色藥材，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗病毒等作用，研究其對(duì)PM2.5致ALI預(yù)防保護(hù)作用，具有十分重要的研究?jī)r(jià)值及現(xiàn)實(shí)意義。糖皮質(zhì)激素具有較強(qiáng)的抗炎作用，臨床普遍應(yīng)用治療ALI/ARDS，其中地塞米松使用最廣泛，療效顯著，其藥理作用[18]為：抑制炎癥細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞在炎癥部位的集聚，并抑制吞噬作用、溶酶體酶的釋放以及炎癥化學(xué)中介物的合成和釋放來(lái)達(dá)到抗炎效果，因此，本研究以地塞米松作為陽(yáng)性對(duì)照組用藥，以便更好的反映TAEP對(duì)ALI的預(yù)防保護(hù)作用[19]。

PM2.5致ALI發(fā)生的實(shí)質(zhì)是失控的炎癥反映，WBC、LYM及NEUT計(jì)數(shù)升高是炎癥反應(yīng)最重要的特征[17]。本研究中，模型組大鼠WBC、LYM、NEUT計(jì)數(shù)明顯高于正常對(duì)照組，說(shuō)明PM2.5暴露可刺激機(jī)體產(chǎn)生炎癥因子，發(fā)生炎癥反應(yīng)；隨著TAEP劑量的增加，125、250、500 mg/kg組WBC、LYM、NEUT計(jì)數(shù)呈現(xiàn)降低的趨勢(shì)，且均低于模型組，說(shuō)明TAEP能夠有效降低炎癥因子的損害，從而緩解細(xì)胞損傷。病理結(jié)果顯示：低、中、高TAEP劑量組隨TAEP劑量增加肺泡形態(tài)結(jié)構(gòu)破壞降低，水腫及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減少，也可說(shuō)明TAEP對(duì)ALI發(fā)生的炎癥反應(yīng)具有防治效果。

IL-1β、IL-6、TNF-α是公認(rèn)的促炎細(xì)胞因子[20]。TNF-α是炎癥反應(yīng)過(guò)程中出現(xiàn)最早、最重要的炎性介質(zhì)，它能夠激活NF-κB傳導(dǎo)通路，促使IL-1β、IL-6等多種炎性介質(zhì)釋放[21]，其中IL-1β可通過(guò)誘導(dǎo)前列腺素和組胺的合成造成炎癥損傷[22]，而IL-6能夠活化B細(xì)胞，加重炎癥反應(yīng)發(fā)生及趨化因子表達(dá)[23-24]，進(jìn)而形成級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，進(jìn)一步造成組織細(xì)胞損傷。本研究中，模型組血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均高于正常對(duì)照組，提示PM2.5進(jìn)入大鼠呼吸道后，會(huì)產(chǎn)生炎癥刺激作用，促使機(jī)體釋放炎癥介質(zhì)和趨化因子，從而對(duì)大鼠肺部造成損傷；TAEP各劑量組血清和BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均低于模型組，隨TAEP劑量增高，呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，且肺部病理結(jié)果顯示肺臟結(jié)構(gòu)明顯改善，提示TAEP可通過(guò)免疫調(diào)節(jié)作用，降低PM2.5造模大鼠體內(nèi)IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，進(jìn)而起到對(duì)肺部組織細(xì)胞的保護(hù)作用。本研究中，血清組IL-1β、IL-6、TNF-α水平要高于BALF組，這可能與ALI發(fā)生急性炎癥反應(yīng)及自身免疫反應(yīng)相關(guān)，具體有待更進(jìn)一步研究，血清中各指標(biāo)可反映ALI病情嚴(yán)重程度，而B(niǎo)ALF各指標(biāo)可作為早期診斷ALI的方式。

正常情況下，機(jī)體氧化/抗氧化系統(tǒng)處于平衡狀態(tài)，給大鼠滴注PM2.5混懸液后，由于PM2.5成分中包含大量重金屬元素[25]，可使機(jī)體產(chǎn)生過(guò)量自由基，當(dāng)機(jī)體清除自由基能力無(wú)法代償時(shí)，會(huì)產(chǎn)生氧化性損傷，由此肺泡上皮及血管內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生MDA、LDH及NO，同時(shí)抗氧化系統(tǒng)發(fā)揮清除作用，會(huì)產(chǎn)生大量抗氧化酶SOD、GSH等，當(dāng)機(jī)體無(wú)法清除過(guò)多活性氧時(shí)，會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而進(jìn)一步造成機(jī)體損傷[26-27]。已有研究[28-29]發(fā)現(xiàn)TAEP能夠抑制超氧陰離子、羥自由基及二苯代苦味酸?；拢―PPH）自由基，從而起到抗氧化作用。本研究中，與模型組比較，TAEP各劑量組SOD、GSH水平上升，MDA、LDH、NO水平下降，說(shuō)明TAEP可減輕PM2.5對(duì)機(jī)體造成的氧化應(yīng)激損傷，提示可能與TAEP自由基清除能力提升，降低脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)；另一方面，也意味著尋找降低ALI氧化應(yīng)激損傷的方法是治療和預(yù)防ALI的一個(gè)重要潛在方向。

W/D是反映組織水腫程度的指標(biāo)，比值越高說(shuō)明水腫程度越嚴(yán)重。有研究[30]認(rèn)為，肺間質(zhì)及肺泡水腫及炎癥滲出增多是濕重增加的主要原因，這與本實(shí)驗(yàn)病理結(jié)果顯示相同。本研究中，TAEP 125、250、500 mg/kg組W/D值均低于模型組，說(shuō)明TAEP可有效緩解ALI時(shí)的肺水腫。

TAEP具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用，但對(duì)其具體作用機(jī)制尚不明確[31-32]。方明月等[33]發(fā)現(xiàn)TAEP通過(guò)影響TLR3、4、7等信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮抗炎、抗病毒的作用，且同時(shí)涉及到多成分、多靶點(diǎn)、多通路協(xié)同作用；楊國(guó)棟等[34]發(fā)現(xiàn)TAEP對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞具有抑制作用，可能與NF-κB及caspase-9通路有關(guān)。

綜上，TAEP對(duì)于PM2.5誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷有一定的保護(hù)作用，通過(guò)自身免疫調(diào)節(jié)，提升自由基清除能力，以及緩解組織細(xì)胞的水腫來(lái)降低PM2.5對(duì)機(jī)體的損傷，但具體影響機(jī)制還有待更進(jìn)一步研究。