日立7600-210檢測系統(tǒng)對血糖檢測的性能驗(yàn)證

常 凡，侯永彬，黃利君，刁奇志

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 402160)

空腹血糖(GLU)是診斷糖尿病、低血糖及監(jiān)測糖尿病療效的重要指標(biāo)，因此，測量結(jié)果是否精準(zhǔn)對于臨床的診療至關(guān)重要。根據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》[1]和《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則》的要求[2]，臨床實(shí)驗(yàn)室在檢測系統(tǒng)用于測量之前必須對檢測系統(tǒng)的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證或確認(rèn)，擬證實(shí)其能夠滿足預(yù)期用途。目前，許多實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行性能驗(yàn)證時(shí)，僅對檢測系統(tǒng)的不精密度、不正確度、線性范圍進(jìn)行了驗(yàn)證，對于試劑與校準(zhǔn)品為同一品牌，與設(shè)備品牌不一致的檢測系統(tǒng)(“ABB”模式)及測量低值具有臨床意義的項(xiàng)目，這往往是不夠的，建議增加檢出限、分析干擾及臨床可報(bào)告范圍的建立或驗(yàn)證。本文以本科實(shí)驗(yàn)室檢測系統(tǒng)測量血糖為例，對以上性能指標(biāo)進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 儀器：日立7600-210全自動(dòng)生化分析儀。試劑：校準(zhǔn)品由四川邁克生物科技有限公司提供(批號：0717031)，高、低濃度質(zhì)控品由RANDOX公司提供(批號：高濃度913UE、低濃度1180UN)。本科不同血糖濃度患者血液標(biāo)本。

1.2方法

1.2.1按試劑說明書提供的校準(zhǔn)周期進(jìn)行校準(zhǔn)，每分析批均檢測室內(nèi)質(zhì)控，質(zhì)控在控時(shí)，數(shù)據(jù)有效，否則，重新檢測。

1.2.2精密度驗(yàn)證 根據(jù)CLSI EP15-A3文件[3]，選取2份不同濃度的標(biāo)本，每天重復(fù)檢測4次，連續(xù)檢測5 d，收集檢測結(jié)果，計(jì)算批內(nèi)精密度和日間精密度。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)精密度<1/4 CLIA′88允許總誤差(TEa)、日間精密度<1/3 CLIA′88 TEa。

1.2.3正確度驗(yàn)證 以一個(gè)完整周期的原衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評的合格率(2017年3、6、9月)作為評價(jià)依據(jù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：室間質(zhì)評合格率≥80%，正確度可以接受。

1.2.4可報(bào)告范圍驗(yàn)證

1.2.4.1線性范圍 收集小于或等于廠商聲明線性范圍中下限濃度的標(biāo)本(L)及大于或等于上限濃度的標(biāo)本(H)，將H和L樣品按:5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H配制混合，形成系列梯度濃度樣品。每個(gè)濃度水平重復(fù)測定2次,計(jì)算測定均值。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：以X表示各樣品的理論濃度值，以Y表示各樣品的實(shí)測值，得出散點(diǎn)圖。若所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)呈明顯直線趨勢，用直線回歸對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得直線回歸方程Y=bX+a，對截距a與0進(jìn)行差異性檢驗(yàn)：t=|a-0|/s,s為截距a的標(biāo)準(zhǔn)差。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：r2>0.95，斜率b在1.00±0.03范圍內(nèi)，t

1.2.4.2臨床可報(bào)告范圍 選取接近項(xiàng)目測量范圍上限的標(biāo)本做1∶2、1∶4、1∶5、1∶8、1∶10、1∶19稀釋得到系列濃度標(biāo)本,根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算預(yù)期值(理論值);每份標(biāo)本重復(fù)測定3次,計(jì)算測定均值。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：測定均值與預(yù)期值的偏差≤1/2 TEa的最大稀釋倍數(shù)乘以稀釋前的濃度即為臨床可報(bào)告范圍。

1.2.5檢測限 因廠商未給出檢出限的聲明，因此參照CLSI EP17-A2文件及前期試驗(yàn)方案[4-5]建立檢出限：(1)空白限(LoB)的建立：使用去離子水作為空白樣本，每天檢測12個(gè)空白樣本1次，連續(xù)測定5 d，共計(jì)60個(gè)檢測數(shù)據(jù)；(2)檢出限(LoD)的建立：根據(jù)LoB值，用低濃度患者混合血漿配制5個(gè)濃度范圍在1～5倍LoB的樣本，分裝于12只EP管中，-20 ℃保存。每日測量2批，連續(xù)6 d，獲得60個(gè)數(shù)據(jù)；(3)定量檢出限(LoQ)的建立：依據(jù)室間質(zhì)量評價(jià)的允許誤差，GLU測量的TEa為10%，在不考慮分析偏差的條件下，TEa=2CV，CV為變異系數(shù)，如果低濃度樣本的CV≤1/2 TEa，則LoQ=LoD；反之,則需要繼續(xù)配制更高倍數(shù)LoB濃度的樣本進(jìn)行重復(fù)檢測，CV剛好小于1/2 TEa時(shí)的濃度即為LoQ值。檢測結(jié)果使用SPSS24.0統(tǒng)計(jì)軟件檢驗(yàn)是否符合正態(tài)分布，再選擇參數(shù)或者非參數(shù)方法進(jìn)行計(jì)算[6]。

1.2.6干擾實(shí)驗(yàn) 根據(jù)廠商聲明：血紅蛋白(Hb)、維生素C(VitC)、膽紅素(BIL)、三酰甘油(TG)干擾物濃度分別不大于5.0 g/L、0.5 g/L、700 μmol/L、20 mmol/L。將分析樣本分為2份，一份樣本根據(jù)廠商聲明的最大干擾物濃度加入相應(yīng)量的干擾物質(zhì)作為實(shí)驗(yàn)樣本，另一份樣本加入不含干擾物的溶劑作為對照樣本，重復(fù)測量2次，取均值計(jì)算二者的偏差，如偏差≤1/2 CLIA′88 TEa(10%)，則廠商的聲明得到驗(yàn)證。

2 結(jié) 果

2.1精密度評價(jià) GLU濃度1批內(nèi)CV及日間CV分別為0.46%和0.69%，濃度2批內(nèi)CV及日間CV分別為0.59%和0.72%，2個(gè)濃度的批內(nèi)精密度均小于1/4 CLIA′88 TEa(2.50%)，日間精密度均小于1/3 CLIA′88 TEa(3.30%)，且均小于廠商聲明的批內(nèi)精密度(3.70%)和日間精密度(4.20%)。

2.2正確度評價(jià) 對2017年原衛(wèi)生部室間質(zhì)評一個(gè)完整周期(3、6、9月)的GLU回報(bào)成績數(shù)據(jù)進(jìn)行評價(jià)，結(jié)果見表1，3次室間質(zhì)評合格率均達(dá)100.00%，因此，檢測系統(tǒng)的正確度可以接受。

表1 正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3可報(bào)告范圍驗(yàn)證 線性范圍驗(yàn)證結(jié)果顯示，GLU檢測的回歸方程為Y=0.984X+0.152，r2=0.999，t=1.29(*t

2.4檢測限

2.4.1LoB 空白樣本檢測結(jié)果經(jīng)檢驗(yàn)呈非正態(tài)分布，故使用非參數(shù)方法[6]估計(jì)第95百分位數(shù)(PctB)的值，LoB=[NB(ρ/100)+0.5]=[60×(95/100+0.5)]=57.5位置的結(jié)果，即第57個(gè)和第58個(gè)結(jié)果數(shù)據(jù)的均值。第57和第58位置均為0.01 mmol/L，故LoB=0.01 mmol/L。

2.4.2LoD 低濃度樣本檢測結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件檢驗(yàn)呈非正態(tài)分布，使用非參數(shù)方法估計(jì)LoD，即LoD=LoB+DSβ，DSβ是低濃度樣本測定值中位數(shù)的值與低濃度樣本的第5百分位數(shù)值的間距，低濃度樣本中位數(shù)為0.04，第5百分位數(shù)值=(60×0.05+0.5)=第3.5秩號的值=0.02，DSβ=0.04-0.02=0.02，故LoD=0.03 mmol/L。

表2 己糖激酶法檢測GLU低濃度樣本的日間CV

2.5干擾實(shí)驗(yàn) Hb、VitC、BIL、TG 4種干擾物質(zhì)在廠商聲明的干擾濃度所引起的結(jié)果偏差分別為2.21%、0.44%、2.20%、7.78%，均小于10.00%(1/2 TEa)，誤差可以接受，廠商聲明得到驗(yàn)證，見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)樣本與對照樣本均值偏差數(shù)據(jù)表

3 討 論

檢測系統(tǒng)是由檢測設(shè)備、試劑、校準(zhǔn)品組成的一個(gè)完整系統(tǒng)，分為“AAA”“ABB”和“ABC” 3種情形，其中“AAA”是檢測設(shè)備、試劑、校準(zhǔn)品均為同一個(gè)生產(chǎn)廠家，是嚴(yán)格意義上的配套系統(tǒng)；“ABB”是試劑、校準(zhǔn)品為同一個(gè)生產(chǎn)廠家，而檢測設(shè)備來自不同生產(chǎn)廠家，但試劑及校準(zhǔn)品聲明適用于該檢測設(shè)備，日常工作中常把其當(dāng)成配套系統(tǒng)對待；而“ABC”屬于檢測設(shè)備、試劑、校準(zhǔn)品均來源于不同生產(chǎn)廠家，屬于非配套系統(tǒng)。配套系統(tǒng)性能驗(yàn)證應(yīng)該包括不精密度、不正確度及可報(bào)告范圍，而非配套系統(tǒng)性能驗(yàn)證指標(biāo)應(yīng)包括測量正確度、精密度、不確定度、抗干擾能力、LoD和LoQ、測量區(qū)間、生物參考區(qū)間。

雖然“ABB”常被當(dāng)做配套系統(tǒng)對待，但嚴(yán)格意義上，它并不屬于配套系統(tǒng)，因此，在性能驗(yàn)證方面，常建議除了驗(yàn)證配套系統(tǒng)的3個(gè)參數(shù)外，還應(yīng)對系統(tǒng)的抗干擾能力、LoD及LoQ進(jìn)行驗(yàn)證，特別是對于低值有臨床意義的項(xiàng)目尤為重要。本研究的檢測系統(tǒng)屬于“ABB”，且血糖低值對于診斷低血糖及療效評價(jià)具有重大臨床意義，因此，除了驗(yàn)證配套系統(tǒng)性能參數(shù)外，本研究還對抗干擾能力、LoD及LoQ進(jìn)行了驗(yàn)證或建立。

在性能指標(biāo)中，精密度反映的是操作人員變化、儀器日間變化及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境變化等導(dǎo)致的方法性能的改變[7]，精密度越高，重復(fù)性越好；正確度表示測量值與約定真值的一致程度。本研究檢測系統(tǒng)的批內(nèi)及日間不精密度分別小于1/4 CLIA′88 TEa和1/3 CLIA′88 TEa，2017年原衛(wèi)生部室間質(zhì)評一個(gè)完整周期的合格率均為100.00%，因此，該檢測系統(tǒng)的不精密度及正確度可以接受。據(jù)CNAS-CL38應(yīng)用說明要求[8]：非配套分析系統(tǒng)應(yīng)采用有證參考物質(zhì)、正確度控制品等進(jìn)行正確度驗(yàn)證。如上述方式無法實(shí)現(xiàn)，可通過參加適宜的能力驗(yàn)證或者室間質(zhì)評，用最近一個(gè)完整周期內(nèi)的成績合格率來證明實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的可信度。可報(bào)告范圍驗(yàn)證包括線性范圍(測量區(qū)間)和臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證。臨床可報(bào)告范圍為樣本通過濃縮或稀釋后，在測量誤差可接受的情況下，能夠報(bào)告的最大測量范圍。一些實(shí)驗(yàn)室在性能驗(yàn)證中只對線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證，卻忽略了臨床可報(bào)告范圍的驗(yàn)證[9]。本研究中選取的高值或低值標(biāo)本濃度范圍大于廠商聲明的線性范圍，驗(yàn)證所得的線性范圍大于廠商聲明的范圍，廠商聲明的線性范圍全部得到驗(yàn)證。因廠商的血糖試劑說明書中未對LoQ作出聲明，因此，本研究根據(jù)CLSI EP17-A2文件程序，結(jié)合前期研究結(jié)果[10-13]，建立了該檢測系統(tǒng)檢測GLU的LoQ為0.08 mmol/L，遠(yuǎn)低于3.89 mmol/L的血糖參考范圍下限，符合實(shí)驗(yàn)室診斷低血糖的預(yù)期用途，可以接受?？垢蓴_能力驗(yàn)證結(jié)果表明在廠商聲明的Hb、VitC、BIL、TG 4種干擾物最大干擾濃度處，所引起的測量偏差均小于1/2 TEa(10.00%)，廠商聲明的抗干擾能力可以接受。但TG所引起的偏差較接近可允許誤差臨界值，提示應(yīng)警惕乳糜樣本對檢測結(jié)果的干擾。雖有研究證明采用超高速離心消除乳糜微粒的干擾，但分離后的血清對某些項(xiàng)目的檢測仍存在一定影響[14]。因此，對于乳糜標(biāo)本，建議實(shí)驗(yàn)室拒收，并要求臨床重采樣本送檢。

4 結(jié) 論

日立7600-210檢測系統(tǒng)廠商聲明的性能參數(shù)在本實(shí)驗(yàn)室均得到了復(fù)現(xiàn)且可以接受，能夠滿足臨床檢驗(yàn)的預(yù)期用途。對于“ABB”這種嚴(yán)格意義上的非配套檢測系統(tǒng)模式及測量結(jié)果具有臨床意義的項(xiàng)目的性能驗(yàn)證除包含精密度、正確度、可報(bào)告范圍的驗(yàn)證外，還需要對檢測限及抗干擾能力進(jìn)行建立或驗(yàn)證。