特應(yīng)性皮炎患者皮膚中轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2蛋白的檢測

沈 輝，高艷薇

特應(yīng)性皮炎（atopic dermatitis，AD）是一種自身變態(tài)反應(yīng)性疾病，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜[1]，臨床主要為IgE和嗜酸粒細(xì)胞增多[2]，具體的致病機(jī)制仍未完全闡明，研究其發(fā)病機(jī)制對于疾病的防治具有積極的意義。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2（transglutaminase-2，TG2）是角質(zhì)包膜形成的關(guān)鍵蛋白，在皮膚的最后分化階段起到關(guān)鍵的作用[3]。已有研究顯示TG2作為自身抗原參與了一些自身免疫性疾病的發(fā)病過程[4]。本研究檢測了AD患者皮膚中轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2蛋白表達(dá)的水平，借此探討其在AD致病中的作用。

1 病例和方法

1.1 病例資料

收集我院2017年1月—2018年1月皮膚科診治的AD患者52例的皮損組織，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合Williams AD診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴發(fā)皮膚炎癥以及其他免疫異常病變者，曾服用糖皮質(zhì)激素類或免疫抑制劑治療者。另取我院同期痣切除患者切緣周圍正常皮膚標(biāo)本30例作為正常對照。AD組男28例、女24例，平均年齡（32.28±6.62）歲（8～52歲）；對照組男27例、女25例，平均年齡（32.15±6.71）（9～51歲）。兩組患者在性別、年齡方面具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 皮膚組織TG2蛋白表達(dá)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 取AD患者皮損處皮膚50 mg，1 ml PBS緩沖液中組織勻漿，離心取上清，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測上清中TG2蛋白表達(dá)水平，檢測試劑盒購自上海魯汶生物科技有限公司，交由檢驗(yàn)科參照試劑盒說明書步驟操作。加入相關(guān)試劑顯色后，450 nm波長測定樣品的吸光度，結(jié)合試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣本皮膚組織中TG2蛋白表達(dá)水平。

1.2.2 臨床觀察指標(biāo) 記錄患者的嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和評估AD評分（SCORAD），SCORAD評分根據(jù)臨床癥狀按 0、1、2、3 等級評分[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

SPSS16.0軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，Spearman檢驗(yàn)分析各指標(biāo)間的相關(guān)關(guān)系，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AD患者皮膚組織TG2 蛋白表達(dá)和臨床指標(biāo)的變化

AD患者皮膚組織TG2 蛋白為（11.57±3.25 ）ng/ml，顯著高于對照組（0.16±0.03）ng/ml（P＜0.01）。AD患者嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)為（0.52±0.13）×109/L，顯著高于對照組（0.31±0.07）×109/L（P＜0.01）。AD患者SCORAD評分為（8.46±1.54）分，顯著高于對照組的（0.09±0.02）分（P＜0.01）（表1）。

表1 兩組TG2 蛋白和臨床指標(biāo)比較

2.2 AD患者皮膚組織TG2 蛋白表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

Spearman檢驗(yàn)分析顯示AD患者皮膚組織中TG2蛋白表達(dá)與患者的性別和年齡無顯著相關(guān)性，但TG2蛋白與AD患者的嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)（r=0.473，P＜0.05）和SCORAD評分（r=0.462，P＜0.05）呈顯著正相關(guān)（表2）。

表2 TG2蛋白與AD患者嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和SCORAD評分的相關(guān)性分析

3 討論

皮膚屏障功能受損是AD發(fā)生、發(fā)展的主要機(jī)制之一，近年來正逐漸引起學(xué)者們的關(guān)注[7]。TG2是一種多功能蛋白，由331個(gè)氨基組成，可以參與細(xì)胞分化、炎癥、遷移和傷口愈合在內(nèi)的多種細(xì)胞過程[8]。在皮膚組織角質(zhì)包膜形成過程中需要TG2的?；D(zhuǎn)移或賴氨酸殘基轉(zhuǎn)移作用，為皮膚屏障功能維護(hù)的重要活性分子[9]。Li等[7]的研究發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶基因缺失小鼠會(huì)發(fā)生皮膚屏障功能的損傷，表皮局部對刺激的保護(hù)性反應(yīng)減少，在紫外線照射過程中皮膚的炎癥反應(yīng)顯著減低，可能是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放，在缺失了TG2后，無法打開鈣通道。本研究顯示AD患者皮膚組織中TG2高表達(dá)，可能是這些高表達(dá)的TG2，加強(qiáng)了炎癥通路的激活，導(dǎo)致了患者病程的發(fā)生和進(jìn)展。蘇惠春等[10]使用ELISA檢測AD患者TG2特異性IgE水平表達(dá)，發(fā)現(xiàn)患者有高的血清特異性TG2-IgE表達(dá)，并且與患者的病情呈正相關(guān)，這可能是皮膚中高表達(dá)的TG2激活了機(jī)體的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生了針對TG2的特異性IgE抗體。自身變態(tài)反應(yīng)也是AD的一個(gè)主要發(fā)病機(jī)制，臨床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)一些針對自身蛋白的特異性IgE抗體，這些特異性IgE抗體的滴度與患者的病情動(dòng)態(tài)變化呈現(xiàn)正相關(guān)[11]。這一結(jié)果從側(cè)面驗(yàn)證了筆者的研究結(jié)果。本研究的相關(guān)性分析顯示AD患者皮膚組織TG2 蛋白表達(dá)水平與患者的外周血嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和SCORAD評分呈顯著正相關(guān)，提示了TG2高表達(dá)可能參與了AD病變的進(jìn)展。

綜上所述，本研究顯示AD患者皮膚組織中TG2蛋白高表達(dá)，其表達(dá)水平與患者的外周血嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和SCORAD評分呈顯著正相關(guān)。