Girdin在宮頸癌中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系

曲曉媛 劉曉慶 尹秀花

山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，占全部腫瘤發(fā)病的第三位，僅次于乳腺癌和結(jié)直腸癌，全球每年新增宮頸癌患者達(dá)50萬例以上。截至目前，宮頸癌發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，其血管生成的機(jī)制亦未完全明了。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展、增殖侵襲及轉(zhuǎn)移均依賴于腫瘤血管生成。腫瘤血管生成活躍程度對組織病理分級、放療及預(yù)后判斷都具有重要評估價值。Girdin（Gird of actin filaments）作為一種在哺乳動物中普遍表達(dá)的肌動蛋白結(jié)合蛋白[1]，在腫瘤的起始進(jìn)展過程中扮演重要角色[2]。本研究旨在探索與腫瘤血管生成關(guān)系密切的Girdin在宮頸癌中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系，以明確其在宮頸癌血管生成中的作用。

一、資料和方法

（一）一般資料

選擇煙臺毓璜頂醫(yī)院2015年1月至2016年12月經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的宮頸癌患者60例，作為實(shí)驗(yàn)組。所有患者均首次發(fā)病，術(shù)前未行任何治療。另選擇同期在該院因收集的正常宮頸組織標(biāo)本20例，作為對照組。該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，患者知情同意。

（二）主要試劑

兔抗人Girdin多克隆抗體，鼠抗人CD34單克隆抗體。

（三）方法

1.標(biāo)本處理。術(shù)中取新鮮標(biāo)本，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。每例組織連續(xù)切片4μm×3片，一片行HE染色明確病理診斷，其余兩張行免疫組化染色。

2.免疫組化（Envision二步法）染色。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照操作方法說明進(jìn)行，Girdin多克隆抗體濃度1：120，CD34單克隆抗體濃度1：60。陰性對照采用PBS代替一抗，陽性對照采用結(jié)腸癌組織。

3.免疫組化結(jié)果判定。

（1）Girdin判定標(biāo)準(zhǔn)。Girdin陽性結(jié)果為細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。每張切片隨機(jī)觀察10個高倍鏡視野，計(jì)數(shù)100個宮頸癌細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)目，根據(jù)胞漿染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比評定。胞漿染色強(qiáng)度：無染色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，深棕色計(jì)3分。陽性細(xì)胞百分比：無染色細(xì)胞為0分，染色細(xì)胞≤25%為1分，染色細(xì)胞26%～50%為2分，染色細(xì)胞＞50%為3分。上述兩項(xiàng)相乘，按乘積分4級：0分為陰性（-），1～2分為弱陽性（＋），3～5分為中等陽性（＋＋），≥6分為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。

（2） MVD計(jì)數(shù)。CD34標(biāo)記腫瘤組織血管內(nèi)皮細(xì)胞。以清晰棕黃色單個或數(shù)個血管內(nèi)皮細(xì)胞圍繞成簇作為1個血管標(biāo)記。低倍鏡選擇MVD熱區(qū)，轉(zhuǎn)高倍鏡下計(jì)數(shù)，取5個視野MVD平均值作為MVD。

（四）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。各參數(shù)值之間比較用x2檢驗(yàn)及相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有顯著性。

二、結(jié)果

（一） Girdin在正常宮頸組織和宮頸癌中的表達(dá)

Girdin在正常宮頸組織中不表達(dá)。宮頸癌中Girdin陽性率61.7%(37/60)。Girdin在宮頸癌中表達(dá)高于正常宮頸組織，差異有顯著性（P＜0.05）。

（二）宮頸癌組織中的MVD計(jì)數(shù)

正常宮頸組織中MVD 18.3±3.99，宮頸癌中MVD 39.35±5.13。宮頸癌組織與正常宮頸組織MVD計(jì)數(shù)比較，差異有顯著性(P＜0.05）。

（三）宮頸癌中Girdin與MVD之間的關(guān)系

宮頸癌中Girdin表達(dá)與MVD呈正相關(guān)（r=0.420，P＜0.01）。

三、討論

（一）Girdin在宮頸癌中的表達(dá)

Girdin是日本學(xué)者于2005年首次發(fā)現(xiàn)并報道的一種細(xì)胞內(nèi)大分子蛋白，普遍表達(dá)于哺乳動物細(xì)胞中，由1870個氨基酸組成，分子量220～250kDa，在維持肌動蛋白的結(jié)構(gòu)、調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖侵襲和轉(zhuǎn)移、血管生成、創(chuàng)傷修復(fù)及細(xì)胞自噬等方面發(fā)揮重要作用。研究顯示[3]，Girdin在乳腺癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤組織中均高表達(dá)。本研究顯示，Girdin在正常宮頸組織中不表達(dá)，在宮頸癌中高表達(dá)，提示Girdin與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。表皮生長因子受體信號被激活時，Akt可直接激活Girdin[4]，活化的Girdin在細(xì)胞內(nèi)重新分布，募集肌動蛋白、促進(jìn)片狀偽足形成，最終促進(jìn)細(xì)胞移行。Girdin和Akt可相互激活，因此，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中很可能存在這一信號通路的活化，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的存活和發(fā)展。但Girdin在宮頸癌中的具體作用機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步探索。

（二）宮頸癌中 Girdin表達(dá)與血管生成的關(guān)系

本研究結(jié)果顯示，宮頸癌中CD34表達(dá)明顯高于正常宮頸組織，說明宮頸癌中新生血管豐富，其發(fā)生發(fā)展與微血管密度之間可能存在某種關(guān)系，提示宮頸癌的新生血管生成可以為癌細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)和血供，從而促進(jìn)宮頸癌的惡性生物學(xué)行為。我們同時發(fā)現(xiàn)，宮頸癌中Girdin表達(dá)與MVD呈正相關(guān)，提示Girdin高表達(dá)可促進(jìn)宮頸癌新生血管的形成，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。內(nèi)皮細(xì)胞移行是組織血管再生最主要的一環(huán)。Girdin廣泛分布于內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞中，是出生后血管形成不可或缺的蛋白，在細(xì)胞遷徙和重組肌動蛋白骨架中起著關(guān)鍵作用，提示Girdin可能與血管生成相關(guān)。

綜上所述，Girdin與宮頸癌血管生成之間具有較好的相關(guān)性，提示Girdin在宮頸癌的血管生成中起重要作用，但其具體的作用機(jī)制，尚需深入探究，以期為宮頸癌的抗血管生成治療提供新的認(rèn)識。