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    響應(yīng)面法提取榆干離褶傘多糖的工藝研究

    2019-01-24 02:59:56,,,,,,
    山東化工 2019年1期
    關(guān)鍵詞:蘑菇多糖功率

    , ,,,,,

    (鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

    蘑菇是自然界中種類繁多、世界分布的生物資源,我國(guó)有蘑菇1萬(wàn)余種,同時(shí)也是世界上較早應(yīng)用蘑菇的國(guó)家,《神農(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》中記載了蘑菇的藥用價(jià)值[1]。蘑菇中含有多糖類﹑甾體類、萜類、黃酮類等生物活性物質(zhì),藥理實(shí)驗(yàn)表明,蘑菇多糖具有抗衰老、抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、降血脂、抗肝炎等廣泛的生物活性,已成為藥品和食品行業(yè)的開(kāi)發(fā)研究方向[2-4]。榆干離褶傘(Lyophyllum ulmarium)屬白蘑科離褶傘屬,又名對(duì)子蘑、大榆蘑,是一種菌肉肥厚,香味濃郁的食用菌,在我國(guó)主要分布在東北三省,并已人工馴化栽培成功,研究者發(fā)現(xiàn),榆干離褶傘發(fā)酵液和菌絲體具有抗氧化、保肝、溶栓作用和保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等功效[5-7],而子實(shí)體生物活性方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。因此,本文采用超聲提取榆干離褶傘中多糖,利用響應(yīng)面法優(yōu)化提取條件,旨在為榆干離褶傘開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    榆干離褶傘:2015年購(gòu)買于吉林安圖,由鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院張福維教授鑒定為榆干離褶傘(Lyophyllum ulmarium)。

    葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品、石油醚、無(wú)水乙醇、苯酚、硫酸等試劑均為分析純:國(guó)藥集團(tuán)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Cary50紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):美國(guó)Varian公司;KQ-700GVDV型三頻恒溫?cái)?shù)控超聲波清洗器:江蘇省昆山市超聲波儀器有限公司;離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠;電子天平:梅特勒-托利多(上海)有限公司;其他為實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 樣品的處理

    榆干離褶傘經(jīng)過(guò)洗凈,自然干燥,粉碎,備用。

    1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

    參照文獻(xiàn)[8]中的苯酚-硫酸法。

    1.3.3 榆干離褶傘多糖的提取及測(cè)定

    參照文獻(xiàn)[9]中的提取與測(cè)定法。

    1.3.4 單因素試驗(yàn)

    準(zhǔn)確稱取一定量的榆干離褶傘樣品超聲提取。采用不同的超聲時(shí)間、超聲功率、超聲溫度、料液比進(jìn)行提取試驗(yàn),考察各因素對(duì)提取產(chǎn)率的影響。

    1.3.5 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

    在1.3.4試驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用四因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn)方法優(yōu)化提取工藝,試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Design Expert 8.0.6軟件分析,得到榆干離褶傘多糖提取的最佳提取工藝。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 超聲時(shí)間對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響

    在料液比超聲功率440 W、1∶20 (g/mL)、超聲溫度40 ℃條件下,分別經(jīng)超聲提取15、20、25、30、35min后,分析超聲時(shí)間對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響,如圖1所示。

    圖1 超聲時(shí)間對(duì)多糖得率的影響

    由圖1可知,榆干離褶傘多糖得率隨超聲時(shí)間的增加,先升高后下降,在30min時(shí)最大。原因在于超聲時(shí)間增加會(huì)使體系的溫度升高,引起多糖分解[10],同時(shí)考慮超聲時(shí)間短,也不利于多糖從組織細(xì)胞中溶出,因此選取超聲時(shí)間為25~35min。

    2.2 超聲功率對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響

    在超聲時(shí)間25min、超聲溫度40 ℃、料液比1∶20 (g/mL)條件下,分別經(jīng)超聲功率380、410、440、470、500 W后,分析超聲功率對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響,結(jié)果如圖2所示。

    圖2 超聲功率對(duì)多糖得率的影響

    從圖2可以看出,隨著超聲功率的增大,多糖得率呈先上升后下降趨勢(shì),原因在于超聲功率的增加會(huì)破壞多糖結(jié)構(gòu),從而降低多糖得率[11-12]。因此超聲功率選擇在380~440 W。

    2.3 超聲溫度對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響

    在超聲功率440 W、料液比1∶20 (g/mL)、超聲時(shí)間25min條件下,分別在溫度20、30、40、50、60 ℃提取后,分析超聲溫度對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響,結(jié)果如圖3所示。

    圖3 超聲溫度對(duì)多糖得率的影響

    從圖3可看出,多糖提取率隨著超聲溫度的升高先增加后下降趨勢(shì),在50 ℃為最大,原因在于超聲溫度過(guò)高也會(huì)破壞多糖的結(jié)構(gòu)[13]。因此超聲溫度選擇在40~60 ℃。

    2.4 料液比榆干離褶傘多糖得率的影響

    在超聲時(shí)間25min、超聲功率440 W、超聲溫度40 ℃條件下,分別以料液比1∶10,1∶15,1∶20,1∶25,1∶30提取后,分析料液比對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響,結(jié)果如圖4所示。

    圖4 料液比對(duì)多糖得率的影響

    從圖4可看出,隨著溶劑用量的逐漸增大,多糖得率先升高,在1∶20后再下降,原因是提取溶劑的增加,有利于多糖的溶出,但溶劑量過(guò)多會(huì)降低熱量密度,從而提取率下降[14],因此料液比選擇在1∶15~1∶25。

    2.5 榆干離褶傘多糖提取工藝的響應(yīng)面優(yōu)化

    2.5.1 回歸模型的建立

    在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上,選取超聲時(shí)間、超聲功率、超聲溫度、料液比4個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面分析,試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案與結(jié)果

    表1(續(xù))

    對(duì)表1試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行Design-Expert 8.0.6.1軟件分析和多元回歸擬合,得榆干離褶傘多糖得率對(duì)超聲時(shí)間(A)、超聲功率(B)、超聲溫度(C)和料液比(D)的二次多項(xiàng)式回歸模型:

    Y=7.78-0.30A+0.032B+0.13C-0.46D-0.082AB+0.16AC-0.36AD+0.055BC-0.083BD-0.22CD-0.22A2-0.39B2-0.054C2-0.77D2

    方差分析和系數(shù)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 方差分析及回歸系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)

    注: *代表差異顯著(P<0.05);**代表差異極顯著(P<0.01)。

    由分析發(fā)現(xiàn)一次項(xiàng)A、C、D和二次項(xiàng)A2、B2、D2及交互項(xiàng)AC、AD、CD對(duì)多糖得率的影響極顯著。同時(shí),表2中模型P<0.0001,極顯著,失擬項(xiàng)(P =0.1442>0.05)不顯著,說(shuō)明模型是合理的[15],由此可見(jiàn),此種試驗(yàn)方法是可靠的。

    2.5.2 響應(yīng)面交互作用分析與最佳提取條件的確定

    方差分析中AB、BC、BD交互作用不顯著(P > 0.05),因此只對(duì)AC、AD和CD的交互作用進(jìn)行回歸分析,根據(jù)回歸方程得出相應(yīng)的響應(yīng)面圖,如圖5所示。

    圖5 不同因素交互作用對(duì)多糖得率影響的響應(yīng)面圖

    響應(yīng)面坡度越陡越顯著,說(shuō)明此因素對(duì)榆干離褶傘多糖得率的影響越大,反之則表明影響越??;圓形的等高線表示參數(shù)之間交互作用不顯著,橢圓形的等高線則相反[16]。由圖5可知,兩因素交互作用大小為∶ 超聲時(shí)間和料液比>超聲溫度和料液比>超聲時(shí)間和超聲溫度,與方差分析的結(jié)果相吻合。

    通過(guò)響應(yīng)面回歸分析得出榆干離褶傘多糖最佳提取工藝條件的參數(shù)為:超聲時(shí)間30.21min、超聲溫度60 ℃、料液比1 ∶17.70、超聲功率414.73 W,多糖得率預(yù)測(cè)值為8.0117%;結(jié)合實(shí)際條件,選取超聲時(shí)間30min、超聲溫度60 ℃、料液比1∶18、超聲功率415 W,進(jìn)行三組重復(fù)性實(shí)驗(yàn),多糖得率為7.96%±0.03%,與預(yù)測(cè)值相近,說(shuō)明優(yōu)化模型是可靠的。

    3 結(jié)論

    本研究在單因素超聲提取試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面軟件優(yōu)化榆干離褶傘多糖的最佳提取工藝為:超聲時(shí)間30min、超聲溫度60 ℃、料液比1∶18、超聲功率415 W,多糖得率為7.96%±0.03%,該模型回歸顯著,對(duì)試驗(yàn)擬合程度好,有關(guān)榆干離褶傘多糖的活性還有待進(jìn)一步研究。

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