2015-2017年重慶地區(qū)感染HPV各基因型及分布特點(diǎn)

霍兆群，吳曉輝，李嘉燕，盧志云，畢慶軍，涂干卿

(重慶金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所科研組，重慶 400039)

宮頸癌是女性發(fā)病率居第2位的惡性腫瘤，也是目前病因較明確的惡性腫瘤之一，人乳頭瘤病毒(HPV)較長(zhǎng)期反復(fù)感染是其主要病因。我國(guó)宮頸癌患病率及病死率均較高，且有年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重危害女性健康[1]。因此，HPV感染越來(lái)越引起人們的關(guān)注，各國(guó)學(xué)者從不同角度對(duì)HPV感染型別和疫苗進(jìn)行研究，取得一定的成績(jī)[2]。HPV感染率及型別分布在不同種族和地域存在差異[3-5]，因受檢病例量及檢查條件的關(guān)系，其感染率及分布特點(diǎn)各項(xiàng)研究報(bào)道有較大差異[3-15]?，F(xiàn)將本檢驗(yàn)所對(duì)重慶市超14萬(wàn)例次女性檢測(cè)HPV感染的研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 選取本檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室2015年1月1日至2017年12月31日接收的重慶市三大行政片區(qū)(渝東北、渝東南、渝西及主城)各級(jí)醫(yī)院(344家)專門采集并送檢的女性患者宮頸區(qū)細(xì)胞作為HPV-DNA檢測(cè)樣本。

1.2儀器與試劑 黑馬9600基因擴(kuò)增儀(珠海黑馬)，伯樂(lè)GELDOC XR+凝膠成像系統(tǒng)，全自動(dòng)核酸分子雜交儀(亞能)，基因雜交信號(hào)擴(kuò)大儀(DML2000TM)，ABI 3500xL基因分析儀，液基薄層細(xì)胞(TCT)制片儀(海世嘉)，OLYMPUS BX41顯微及攝像系統(tǒng)。PDE柱DNA提取試劑盒及PCR-斑點(diǎn)雜交法HPV-DNA分型檢測(cè)試劑盒(亞能)，高危型HPV-DNA (hrHPV)第二代捕獲雜交法(HCⅡ)檢測(cè)試劑盒(凱杰)，設(shè)計(jì)單一各型的特異性引物(見(jiàn)表1)，Digestion Solution for MagJET gDNA Kit切膠回收試劑盒及3500 Dx Series Sequencing Standard,BigDyeTMTerminator v1.1測(cè)序試劑盒(賽默飛公司)，巴氏染液。

1.3檢測(cè)方法 所有送檢樣本均在采集的當(dāng)天8 h內(nèi)，進(jìn)行PCR-斑點(diǎn)雜交法HPV-DNA分型檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性的作TCT檢查。另選取64例HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的患者，再同時(shí)進(jìn)行PCR-斑點(diǎn)雜交法和HCⅡ法比對(duì)檢測(cè)。并選取HPV-DNA高危和低危型檢出率高的亞型在基因分析儀上作基因測(cè)序、鑒定。

1.3.1采樣要求 于檢查前3 d內(nèi)未做陰道沖洗，未陰道內(nèi)用藥(避孕藥等)。檢查前24 h內(nèi)無(wú)性行為。采樣時(shí)仰臥于檢查床上，消毒(不能用醋酸或碘液涂抹消毒)，由醫(yī)生以窺陰器或陰道張開(kāi)器暴露宮頸，用棉拭子將宮頸口過(guò)多的分泌物擦去，然后用HPV專用采樣刷及專用宮頸脫落細(xì)胞采集器，進(jìn)行采樣，單方向旋轉(zhuǎn)4～5周以獲得足量的上皮細(xì)胞樣本，然后將宮頸刷頭部分別放入洗脫管中，沿刷柄處將宮頸刷折斷，擰緊洗脫管蓋，做好樣本標(biāo)識(shí)，保持洗脫管直立放置。用于PCR-斑點(diǎn)雜交法HPV-DNA分型檢測(cè)采樣管一套，HCⅡ法檢測(cè)專用采樣管一套，TCT細(xì)胞學(xué)檢查采集器一套，分別采集。

1.3.2HPV-DNA分型檢測(cè)方法 采用PCR-斑點(diǎn)雜交法，按照該法檢測(cè)試劑盒操作規(guī)程，制備DNA模板、PCR擴(kuò)增(根據(jù)HPV-DNA特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異引物PCR Premix，可以擴(kuò)增出23種HPV-DNA亞型目的片段)，再將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜條上的17種hrHPV和6種低危型(lrHPV)的分型探針，用全自動(dòng)核酸分子雜交儀進(jìn)行雜交，依據(jù)雜交信號(hào)點(diǎn)有無(wú)存在，來(lái)判斷有無(wú)HPV感染及其基因型別。

表1 hrHPV和lrHPV檢出率高的亞型所用的單一特異性引物

1.3.3hrHPV-DNA HCⅡ檢測(cè)方法 按照HCⅡ檢測(cè)試劑盒提取DNA模板，含有目標(biāo)DNA的標(biāo)本與一種特殊的HPV-RNA探針雞尾酒雜交,反應(yīng)形成的RNA-DNA雜交體，捕獲到被有RNA-DNA雜交體相對(duì)應(yīng)特異抗體的酶標(biāo)板小孔杯里,被固定好的雜交體與接合了RNA-DNA雜交體相對(duì)應(yīng)特異抗體的堿性磷酸酯酶反應(yīng)，再用化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行檢測(cè)。發(fā)光射出用照度計(jì)測(cè)量其相對(duì)光單位，根據(jù)發(fā)出光的強(qiáng)度確定樣本中有無(wú)目標(biāo)DNA存在，并定量。

1.3.4HPV-DNA測(cè)序、鑒定 使用單一特異性引物，對(duì)提取的樣本DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳(120 V，40 min)，并用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。再使用Digestion Solution for MagJET gDNA Kit切膠回收試劑盒對(duì)與目標(biāo)片段大小一致的電泳條帶進(jìn)行切膠回收，按照3500 Dx Series Sequencing Standard,BigDyeTMTerminator v1.1測(cè)序試劑盒進(jìn)行配液，將配制好的反應(yīng)液于ABI 3500xL基因分析儀上進(jìn)行雙向測(cè)序，并與NCBI官網(wǎng)上的相對(duì)應(yīng)的基因序列進(jìn)行Blast分析。

1.3.5TCT細(xì)胞病理學(xué)檢查方法 經(jīng)TCT制片儀將樣品制成直徑15 mm的圓形細(xì)胞薄層涂片進(jìn)行巴氏染色，在顯微鏡下閱片檢查，并對(duì)典型視野攝片，根據(jù)上皮細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞形態(tài)變化情況，確定變化級(jí)別。

1.3.6檢測(cè)方法的質(zhì)量控制 采用留樣標(biāo)本(每批的高值、臨界水平、陰性)復(fù)查方法，每天做室內(nèi)質(zhì)控，每年參加兩次國(guó)家衛(wèi)健委組織的室間質(zhì)評(píng)，符合質(zhì)控要求，檢測(cè)結(jié)果有效。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 檢測(cè)結(jié)果按年度、各年齡段、各行政片區(qū)、各基因型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各年份HPV-DNA分型檢測(cè)情況 2015-2017年3年間共計(jì)檢測(cè)樣本143 083例(同一患者多次檢查計(jì)為1例)，其中，檢出HPV-DNA陽(yáng)性36 312例(同一個(gè)樣本檢出多種亞型陽(yáng)性也計(jì)為1例)，陽(yáng)性檢出率25.38%；2015年檢測(cè)樣本39 279例，檢出陽(yáng)性10 609例，陽(yáng)性檢出率27.01%；2016年檢測(cè)樣本45 350例，檢出陽(yáng)性12 011例，檢出率26.49%；2017年檢測(cè)樣本58 454例，檢出陽(yáng)性13 692例，檢出率23.42%。3年陽(yáng)性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，有逐年降低趨勢(shì)。

2.2各年齡段HPV-DNA分型檢測(cè)情況 18～45歲年齡段檢測(cè)樣本108 547例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性26 851例，陽(yáng)性檢出率24.74%；45歲以上年齡段檢測(cè)樣本34 536例，檢出陽(yáng)性9 461例，陽(yáng)性檢出率27.39%。后一年齡段陽(yáng)性檢出率明顯高于前一年齡段，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3各片區(qū)HPV-DNA分型檢測(cè)情況 3年間共計(jì)檢測(cè)渝西及主城的樣本111 091例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性27 147例，陽(yáng)性檢出率24.44%；渝東北的樣本17 779例，檢出陽(yáng)性5 655例，陽(yáng)性檢出率31.81%；渝東南樣本14 213例，檢出陽(yáng)性3 510例，陽(yáng)性檢出率24.70%。渝東北片區(qū)陽(yáng)性檢出率明顯高于另外兩個(gè)片區(qū)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.4HPV-DNA各基因亞型陽(yáng)性檢出情況

2.4.13年間各基因亞型陽(yáng)性檢出情況 3年間HPV-DNA檢出陽(yáng)性中占比超過(guò)10%的有HPV基因型有52、16、58、81亞型，以52亞型最高，達(dá)23.16%。見(jiàn)圖1。

圖1 2015-2017年3年間各基因亞型陽(yáng)性檢出情況

2.4.22個(gè)年齡段各基因亞型陽(yáng)性檢出情況 在HPV-DNA檢出陽(yáng)性中占比達(dá)10%的:(1)18～45歲年齡段，包括52、16、58、81亞型，占比分別為22.80%，16.29%，11.02%，9.75%；(2)45歲以上年齡段，包括52、16、58、53、81亞型，占比分別為24.16%，18.51%，14.68%，11.69%，11.49%。2個(gè)年齡段各檢出的亞型占比居前3位的亞型基本一致，均以52亞型最高。

2.4.3三大片區(qū)各基因亞型陽(yáng)性檢出情況 在HPV-DNA檢出陽(yáng)性中占比達(dá)10%的:(1)渝西及主城，包括52、16、58、81、6亞型，占比分別為23.12%、16.10%、11.28%、10.58%、9.48%；(2)渝東北，包括52、16、58、53亞型，占比分別為22.69%、19.77%、14.75%、9.12%；(3)渝東南，包括52、16、58、53亞型，占比分別為24.19%、18.12%、12.93%、9.74%。各片區(qū)檢出的亞型占比居前3位的亞型基本一致，均以52亞型最高。

2.5hrHPV-DNA檢出情況 hrHPV包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等17個(gè)亞型(6、11、42、43、81、83亞型屬低危型lrHPV)。3年間共計(jì)檢測(cè)樣本143 083例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性36 312例，其中hrHPV 30 880例(同一個(gè)樣本檢出多種hrHPV亞型陽(yáng)性計(jì)為1例)，檢出率為21.58%，在檢出陽(yáng)性中占比85.04%。

2.5.1各年份hrHPV檢出情況 2015年檢測(cè)樣本39 279例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性10 609例，其中hrHPV 8 906例，hrHPV檢出率22.67%，在檢出陽(yáng)性中占比83.95%；2016年檢測(cè)樣本45 350例，檢出陽(yáng)性12 011例，其中hrHPV 10 174例，hrHPV檢出率22.43%，在檢出陽(yáng)性中占比84.71%；2017年檢測(cè)樣本58 454例，檢出陽(yáng)性13 692例，其中hrHPV 11 800例，hrHPV檢出率20.19%，在檢出陽(yáng)性中占比86.18%。3年間hrHPV檢出率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，但在檢出陽(yáng)性中占比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。

2.5.22個(gè)年齡段hrHPV檢出情況 18～45歲年齡段檢測(cè)樣本108 547例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性26 851例，其中hrHPV 22 723例，hrHPV檢出率20.93%，在檢出陽(yáng)性中占比84.63%；45歲以上年齡段檢測(cè)樣本34 536例，檢出陽(yáng)性9 461例，其中hrHPV 8 157例，hrHPV檢出率23.62%，在檢出陽(yáng)性中占比86.22%。hrHPV檢出率和在檢出陽(yáng)性中占比，45歲以上年齡段明顯高于18～45歲年齡段，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.5.3三大片區(qū)hrHPV檢出情況 3年間渝西及主城檢測(cè)樣本111 091例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性27 147例，其中hrHPV 22 959例，hrHPV檢出率20.67%，在檢出陽(yáng)性中占比84.57%；渝東北檢測(cè)樣本17 779例，檢出陽(yáng)性5 655例，其中hrHPV 4 894例，hrHPV檢出率27.53%，在檢出陽(yáng)性中占比86.54%；渝東南檢測(cè)樣本14 213例，檢出陽(yáng)性3 510例，其中hrHPV 3 027例，hrHPV檢出率21.30%，在檢出陽(yáng)性中占比86.24%。hrHPV檢出率渝東北片區(qū)明顯高于另外兩個(gè)片區(qū)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在檢出陽(yáng)性中的占比，渝西及主城片區(qū)低于另外兩個(gè)片區(qū)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.6同時(shí)感染HPV多種基因亞型的檢出情況 3年間各年份、各片區(qū)、各年齡段檢出的陽(yáng)性均以同時(shí)感染HPV 1種和2種基因亞型為多見(jiàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，檢出陽(yáng)性中占比分別達(dá)到69.0%和19.1%。見(jiàn)圖2。

圖2 同時(shí)感染HPV多種基因亞型的檢出情況

2.7HPV-DNA同時(shí)用兩種檢測(cè)方法檢查情況 選擇64例HPV-DNA分型檢測(cè)屬hrHPV陽(yáng)性者，再次按規(guī)范采樣，同時(shí)用PCR-斑點(diǎn)雜交法及HCⅡ方法進(jìn)行HPV-DNA檢測(cè)，PCR-斑點(diǎn)雜交法檢出陽(yáng)性 47 例，陰性 17 例，陽(yáng)性檢出率73.44%；HCⅡ法檢出陽(yáng)性 35 例，陰性 29 例，陽(yáng)性檢出率為67.31%(35/52,因64例中有12例不屬于HCⅡ法檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)未計(jì)入總例數(shù)，計(jì)入在陰性數(shù))，2種方法檢測(cè)均為陽(yáng)性的34例，均為陰性的16例，2種方法結(jié)果一致的例數(shù)為50例，符合率96.2%(50/52,因64例中有12例不屬HCⅡ法檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)未計(jì)入總例數(shù))。

2.8HPV-DNA分型檢測(cè)陽(yáng)性者同時(shí)作TCT細(xì)胞病理學(xué)檢查情況 2015-2017年共有7 168例HPV-DNA分型檢測(cè)陽(yáng)性者同時(shí)作TCT宮頸細(xì)胞病理學(xué)檢查，其中屬hrHPV的有5 835例，TCT檢查報(bào)告結(jié)果CINⅠ 481例，檢出占比 8.24 %，CINⅡ 321例，檢出占比5.50%，ASCUS 649例，檢出占比11.12%；屬lrHPV的有1 333例，TCT檢查報(bào)告結(jié)果CINⅠ 96例，檢出占比7.20%，CINⅡ 7例，檢出占比0.53%，ASCUS 107例，檢出占比8.03%。hrHPV的CINⅡ檢出占比明顯高于lrHPV(P<0.05)。本組病例檢查結(jié)果顯示，HPV感染導(dǎo)致宮頸及陰道上皮細(xì)胞異形改變的比例并不高，有CIN改變的檢出占比均低于10.0%，也未發(fā)現(xiàn)宮頸及陰道上皮細(xì)胞癌變。

2.9hrHPV和lrHPV檢出率高的亞型在基因分析儀上作基因測(cè)序、鑒定情況 經(jīng)PCR后凝膠電泳成像系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3，各亞型均在130～170 bp處顯現(xiàn)成像帶；正向和反向測(cè)序Blast結(jié)果，僅選hrHPV的52型測(cè)序的Blast結(jié)果作為代表，結(jié)果顯示，檢測(cè)的一種亞型測(cè)序Blast結(jié)果，一致性在95%以上，各亞型測(cè)序的Blast結(jié)果，一致性也均在95%以上。將各型測(cè)序結(jié)果分別與NCBI相對(duì)應(yīng)基因型的全長(zhǎng)質(zhì)粒比對(duì)，一致性均在99%以上，說(shuō)明檢出的各基因亞型符合該HPV基因型的特征。

注：M為標(biāo)志物，6為6亞型，16為16亞型，52為52亞型，53為53亞型，58為58亞型，81為81亞型

圖3 PCR后凝膠電泳成像檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

HPV是一種雙鏈?zhǔn)壬掀ば訢NA病毒，屬乳多空病毒科，具有高度種屬及組織特性。人類皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞/黏膜鱗狀上皮細(xì)胞是其天然宿主，男、女性皆可感染。HPV以通過(guò)性活動(dòng)傳播為主[3]，在全球性傳播疾病中HPV的感染占15%～20%，75%的性活躍成人，一生中皆感染過(guò)此病毒[4-8]。HPV感染能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖，表現(xiàn)為尋常疣、生殖器疣等癥狀，并可進(jìn)展為癌前病變及浸潤(rùn)性癌。各國(guó)學(xué)者從不同角度，對(duì)HPV致病譜及感染率、病毒結(jié)構(gòu)及變異、致癌機(jī)制、基因亞型、流行病學(xué)及地域分布差異等多方面進(jìn)行研究，取得一定的成績(jī)，報(bào)道了不少資料[3-19 ]。國(guó)際癌癥研究協(xié)會(huì)報(bào)道全球25個(gè)國(guó)家的3 607例宮頸癌患者中HPV 16亞型的感染率為57.4%，18亞型感染率居第2位，非洲、歐洲、東南亞及北美洲報(bào)道45亞型感染率居第3位[4-8]。我國(guó)報(bào)道不同的地區(qū)和人群感染HPV型別及分布相差較大，其感染率在20.7%～58.4%間[3，9-13]。也有報(bào)道HPV 16亞型是最為常見(jiàn)的感染型別，占所有HPV感染型別的33.54%[11]。本研究項(xiàng)目采用大數(shù)據(jù)對(duì)重慶市地區(qū)感染HPV情況的分析，顯示2015-2017年，共計(jì)檢測(cè)女性樣本143 083例，檢出HPV-DNA陽(yáng)性36 312例，陽(yáng)性率25.38%，在國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道的HPV感染率范圍內(nèi)。檢出hrHPV 30 880例，檢出率為21.58%，在檢出的陽(yáng)性中占比85.04%，這比張海偉等[14]報(bào)道的重慶地區(qū)hrHPV感染率為27.49%要低。但在2015-2017年檢出的HPV-DNA陽(yáng)性中hrHPV占比呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，感染基因型以HPV 52亞型為主，在陽(yáng)性中占比23.16%，依次還有HPV16型，占比16.86%，HPV 58型，占比11.98%，HPV 81型，占比10.20%，HPV 53型，占比9.39%，三大行政片區(qū)和兩個(gè)年齡段的檢出情況也基本一致，這與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道類似[11-14]，國(guó)內(nèi)香港、廣州、湖南地區(qū)報(bào)道均以HPV 52及582個(gè)亞型居多，日本也類似，因而有文獻(xiàn)報(bào)道稱HPV 52，58型為亞洲型[11-14]。同時(shí)，重慶地區(qū)以HPV單一亞型感染為主，占比69.0%，二重亞型感染占比19.1%，多重亞型感染檢出率不高，這也與國(guó)內(nèi)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道類似[11-14]。

HPV-DNA根據(jù)基因序列不同目前已經(jīng)分出100余種亞型，有40多種與生殖道感染、20多種與腫瘤病變有關(guān)[3]，根據(jù)其致病力情況分為hrHPV和lrHPV兩大類。近些年用于HPV-DNA分型檢測(cè)的方法有多種，本研究對(duì)HPV-DNA的分型檢測(cè)，選用PCR-斑點(diǎn)雜交法為主要檢查方法，這是目前采用較多的分型檢測(cè)法，可分析檢出23種亞型，其中hrHPV 17種，lrHPV 6種，檢測(cè)靈敏度較高，也被用來(lái)作HPV-DNA感染的篩查方法。本項(xiàng)目選取的比對(duì)檢測(cè)方法為HCⅡ法，可對(duì)hrHPV中的13種亞型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亞型)感染進(jìn)行HPV-DNA半定量測(cè)定，結(jié)果準(zhǔn)確性較高；但其檢測(cè)亞型范圍稍較局限，并不能作分型檢測(cè)，多用作hrHPV中的13種亞型感染患者的療效觀察檢測(cè)，因HPV感染在治療期間還可能有型別的改變，療效觀察作分型檢測(cè)意義不及HCⅡ?qū)PV-DNA半定量檢測(cè)意義。本研究通過(guò)對(duì)2種方法進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，結(jié)果符合率達(dá)96.2%，在HPV感染的診治過(guò)程中，2種方法配合選用對(duì)臨床是很有價(jià)值的。本研究針對(duì)檢出率高的hrHPV和lrHPV的各亞型，在基因分析儀上作了基因測(cè)序、鑒定，其各亞型的Blast結(jié)果，一致性均在95%以上，與NCBI中相對(duì)應(yīng)基因的全長(zhǎng)質(zhì)粒比對(duì)，一致性均在99%以上，說(shuō)明本研究檢出的各基因亞型符合HPV該基因型特征。

本研究結(jié)果顯示，HPV感染存在各年齡段、不同地域分布差異。45歲以上年齡段陽(yáng)性檢出率27.39%，高于18～45歲年齡段陽(yáng)性檢出率24.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，并且hrHPV的檢出率和在檢出陽(yáng)性中占比也是如此，這可能與該年齡段的女性患者性活動(dòng)次數(shù)累積增多，感染概率增大有關(guān)，不過(guò)近年報(bào)道有年輕化增多的趨勢(shì)。因此，女性的個(gè)體日常衛(wèi)生、特別是經(jīng)期衛(wèi)生和同房前后的良好衛(wèi)生習(xí)慣應(yīng)強(qiáng)化宣教，另一方面，各年齡段的已婚女性都應(yīng)重視健康體檢，這些都是降低HPV感染概率的重要措施。女性乳腺癌和宮頸癌篩查在我國(guó)已較廣泛地開(kāi)展，HPV-DNA分型檢測(cè)，是其中重要的檢查項(xiàng)目，也是目前防治女性HPV感染很重要的措施。本研究還將重慶市分為渝西及主城、渝東北、渝東南三大片區(qū)進(jìn)行HPV感染情況比對(duì)分析，渝東北片區(qū)陽(yáng)性檢出率為31.81%，明顯高于其他兩個(gè)片區(qū)的24.70%和24.44%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這說(shuō)明HPV感染率的地域差異不僅存在于洲際間、國(guó)際間、省級(jí)間的大區(qū)域間[3-9]，同一省、市的不同片區(qū)間也都有差異，這可能與不同地區(qū)的女性個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣不同有一定關(guān)系。重慶本市三大片區(qū)都以hrHPV感染為主，在檢出陽(yáng)性中的占比均超過(guò)84%，說(shuō)明本地區(qū)的任何一個(gè)片區(qū)，HPV感染的嚴(yán)峻性都不容忽視。

宮頸癌是目前病因較明確的腫瘤之一，有報(bào)道顯示99.7%的宮頸癌組織活檢標(biāo)本中可檢測(cè)到HPV-DNA，hrHPV較長(zhǎng)期反復(fù)感染是主要病因[7,15]，其病理機(jī)制，首先是導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)瘤變(CIN)、生殖道細(xì)胞CIN變，繼而發(fā)展成宮頸癌。有報(bào)道顯示，近年來(lái)CIN及宮頸癌的發(fā)病率有明顯增多趨勢(shì)[5]。本研究對(duì)2015-2017年7 186例HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性的病例同時(shí)作了TCT，其中屬hrHPV的有5 835例，占比81.2%，TCT檢查結(jié)果CINⅠ 481例，檢出占比8.24%，CINⅡ 321例，檢出占比5.50%，ASCUS 649例，檢出占比11.12%。HPV感染導(dǎo)致宮頸細(xì)胞異形改變的比例并不高，有CIN改變的檢出占比均低于10%。國(guó)內(nèi)有關(guān)宮頸細(xì)胞病理學(xué)檢查，CIN的檢出占比的報(bào)道數(shù)據(jù)差異較大[18-19]，究其原因，檢查病例量的差異有一定影響，另一方面，樣本采集的影響也是一重要因素，從1個(gè)患者的宮頸所刷取的細(xì)胞量對(duì)檢查結(jié)果影響很大，特別是一次采集要同時(shí)分作兩項(xiàng)以上的檢查，對(duì)結(jié)果的影響就更大。所以本研究在分析報(bào)道的宮頸癌篩查結(jié)果有關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)時(shí)要注意考慮這些影響因素。不過(guò)，無(wú)論一篇報(bào)道的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如何，改變不了hrHPV較長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)感染導(dǎo)致宮頸上皮細(xì)胞、生殖道細(xì)胞CIN變，繼而發(fā)展成宮頸癌的這一共識(shí)，同時(shí)，HPV-DNA分型檢測(cè)對(duì)于細(xì)胞病理醫(yī)生作宮頸細(xì)胞CIN分級(jí)檢查和臨床醫(yī)生有效區(qū)分易患宮頸癌的高危婦女有重要價(jià)值[21]，所以在女性的宮頸癌防治中要高度重視HPV感染的診治。

4 結(jié) 論

hrHPV較長(zhǎng)期反復(fù)感染已明確為宮頸癌的主要病因，HPV的感染已越來(lái)越引起人們的關(guān)注。我國(guó)為了女性的健康已將婚育婦女的宮頸癌防治工作提到重要日程，在全國(guó)廣范開(kāi)展預(yù)防普查工作，HPV-DNA分型檢查和TCT檢查已作為宮頸癌的篩查項(xiàng)目，本研究正是配合該工作的重要課題，其結(jié)果為重慶市建立HPV感染人群的診斷及防治體系提供有力的科學(xué)依據(jù)，為該病原疫苗的研發(fā)和應(yīng)用提供本地高信息量的流行病學(xué)資料，進(jìn)而為降低女性宮頸癌的發(fā)生率做出貢獻(xiàn)。

(志謝：重慶市人民醫(yī)院中山院區(qū)婦科陳健英副主任醫(yī)師臨床采集科研樣本)