GLP實(shí)驗(yàn)室生化檢測(cè)系統(tǒng)的性能驗(yàn)證

趙映淑,林應(yīng)學(xué),黎良程,劉 春

(海南省藥品檢驗(yàn)所/海南省藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?570216)

生化檢測(cè)體系(系統(tǒng))由生化分析儀與檢測(cè)試劑及其校準(zhǔn)品組成，該體系的性能在一定程度上受儀器本身和(或)試劑的影響，在進(jìn)行常規(guī)工作前應(yīng)該對(duì)其性能進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，以證實(shí)其能滿足預(yù)期要求[1-2]。除在儀器首次使用前進(jìn)行安裝驗(yàn)證、操作驗(yàn)證和性能驗(yàn)證外，儀器安裝地點(diǎn)發(fā)生改變、有過(guò)重大維修、控制系統(tǒng)或檢測(cè)方法發(fā)生改變也應(yīng)該視情況對(duì)儀器重新進(jìn)行3Q驗(yàn)證[3-4]。這也是良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP)對(duì)儀器設(shè)備驗(yàn)證的最基本要求[5-7]。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)證也要求儀器設(shè)備在常規(guī)使用中能達(dá)到規(guī)定的性能指標(biāo)[8-10]。本實(shí)驗(yàn)室由日立7100型全自動(dòng)生化分析儀與日本和光試劑及其校準(zhǔn)品組成的生化檢測(cè)體系在首次使用前已進(jìn)行3Q驗(yàn)證，運(yùn)行穩(wěn)定良好，但因其運(yùn)行成本較高，考慮使用國(guó)產(chǎn)試劑進(jìn)行替代，故該體系的有效性必須加以驗(yàn)證[11]。本研究所述生化指標(biāo)體系改變后的驗(yàn)證，是在GLP條件下，以7100型日立全自動(dòng)生化分析儀為依托，基于檢測(cè)試劑改變(更換為國(guó)產(chǎn)科華生化檢測(cè)試劑)后，選擇血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨?；D(zhuǎn)肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(TC)、血糖(GLU)、三酰甘油(TG)、肌酸激酶(CK)、尿素(Ur)和肌酐(Cr)13項(xiàng)常規(guī)生化指標(biāo)進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確性、線性和攜帶污染率等性能的驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1樣本來(lái)源 質(zhì)控血清Ⅰ(批號(hào)：TP738)、質(zhì)控血清Ⅱ(批號(hào)：DP658)購(gòu)于日本和光純藥株式會(huì)社，線性及攜帶污染率實(shí)驗(yàn)采用的血清樣本由海南省腫瘤醫(yī)院提供。

1.2儀器與試劑 儀器為日立7100型全自動(dòng)生化分析儀(日本日立高新技術(shù)株式會(huì)社)。ALT(批號(hào)：20170722)、AST(批號(hào)：20170222)、ALP(批號(hào)：20170812)、GGT(批號(hào)：20170712)、CK(批號(hào)：20170712)、TP(批號(hào)：20170122)、ALB(批號(hào)：20170612)、TBIL(批號(hào)：20170722)、TG(批號(hào)：20170412)、CHO(批號(hào)：20170322)、GLU(批號(hào)：20170712)、CERA(批號(hào)：20170622)、BUN(批號(hào)：20170512)及其校準(zhǔn)品均購(gòu)于上?？迫A生物工程有限公司。

1.3方法

1.3.1精密度 按照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP15-A2[12]文件要求，將高、低水平質(zhì)控血清復(fù)溶后每天重復(fù)測(cè)定3次，連續(xù)測(cè)定5 d，記錄每天的測(cè)定結(jié)果，計(jì)算批內(nèi)變異系數(shù)(CV%)及批間CV%，并與美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)(CLIA′88)比較，若批內(nèi)CV%<1/4允許總誤差(TEa)，批間CV%<1/3TEa證明其性能良好。

1.3.2準(zhǔn)確度 將正常值質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定5次，求平均值，與質(zhì)控血清靶值進(jìn)行比較采用相對(duì)偏差判斷各項(xiàng)的準(zhǔn)確度[13]。相對(duì)偏差=(檢測(cè)值-靶值)/靶值×100%。偏差小于CLIA′88對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求的TEa的1/3則判定測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

1.3.3線性 根據(jù)CLSI EP6-P2[14]文件要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將高值(H)、低值(L)血清按一定比例混合(H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、L)，每個(gè)混合物重復(fù)檢測(cè)4次，取均值。以稀釋度為橫軸、每個(gè)稀釋度的測(cè)量均值為縱軸進(jìn)行線性回歸，根據(jù)線性回歸方程求出每個(gè)稀釋度的理論濃度，計(jì)算每一稀釋度下實(shí)測(cè)濃度和理論濃度的差異，即線性偏差。若相關(guān)系數(shù)(R2)>0.995、線性偏差≤1/2TEa則可判斷測(cè)定方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)成線性。

1.3.4攜帶污染率 根據(jù)CLSI EP10-A2文件要求[15]，將低水平血清分為3份(分別為L(zhǎng)1、L2、L3)和一份高水平血清(H)，按L1、L2、H、L3順序排列進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)攜帶污染率計(jì)算公式[(L3-L2)/H×100%]，計(jì)算每項(xiàng)攜帶污染率，<0.5%為合格。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel2003軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1精密度及準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 13項(xiàng)生化指標(biāo)水平Ⅰ和水平Ⅱ的批內(nèi)CV%和批間CV%分別小于基于生物學(xué)變異確定1/4 CLIA′88和1/3 CLIA′88，均符合性能要求，說(shuō)明該儀器具有較高的精密度。見(jiàn)表1。標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控血清水平Ⅰ和水平Ⅱ測(cè)定值與靶值的相對(duì)偏差均小于CLIA′88對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求的總允許誤差的1/3,13項(xiàng)生化指標(biāo)中有10項(xiàng)相對(duì)偏差均在±3%以內(nèi)，其余3項(xiàng)指標(biāo)也均符合該儀器的準(zhǔn)確度要求。見(jiàn)表2。

2.2線性實(shí)驗(yàn) 13項(xiàng)生化指標(biāo)的線性決定系數(shù)R2值均>0.995，說(shuō)明該儀器在定值血清的稀釋范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。見(jiàn)表3。

表1 精密度檢測(cè)結(jié)果與性能比較(n=5)

表2 準(zhǔn)確度檢測(cè)結(jié)果與性能比較(n=5)

續(xù)表2 準(zhǔn)確度檢測(cè)結(jié)果與性能比較(n=5)

2.3樣品攜帶污染率實(shí)驗(yàn) 13項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè)的攜帶污染率均<0.5%，說(shuō)明前一個(gè)樣品對(duì)下一個(gè)樣品測(cè)定結(jié)果不存在影響，符合該儀器的基本要求。見(jiàn)表4。

表4 攜帶污染率檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

本研究依據(jù)CLIA′88對(duì)13個(gè)常規(guī)生化項(xiàng)目檢測(cè)的精密度、準(zhǔn)確度及線性偏差的結(jié)果進(jìn)行了判定，結(jié)果顯示，批內(nèi)CV%<1/4 CLIA′88TEa，批間CV%<1/3 CLIA′88TEa；準(zhǔn)確度相對(duì)偏差明顯小于1/3 CLIA′88TEa；線性驗(yàn)證R2均>0.995，線性偏差均<1/2 CLIA′88 TEa。表明該儀器檢測(cè)重復(fù)性、準(zhǔn)確性和線性良好，也說(shuō)明國(guó)產(chǎn)試劑和校準(zhǔn)品與日立7100型全自動(dòng)生化分析儀構(gòu)成的新檢測(cè)體系符合質(zhì)量要求，能保證毒理學(xué)研究中的臨床檢驗(yàn)工作。

GLP實(shí)驗(yàn)室的臨檢對(duì)象是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一般以提供客觀檢測(cè)數(shù)據(jù)為主，不涉及疾病診斷，在檢測(cè)方法、儀器選擇和結(jié)果解釋方面與臨床存在差異，且實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和樣品采集的標(biāo)準(zhǔn)化也使臨床常見(jiàn)的干擾現(xiàn)象減少。除定期測(cè)試精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍和攜帶污染率外，首次驗(yàn)證還應(yīng)該考慮最低檢測(cè)限和最大稀釋度。

綜上所述，經(jīng)GLP條件下的性能驗(yàn)證，本實(shí)驗(yàn)室日立7100型全自動(dòng)生化分析儀在更換試劑后各方面性能良好。