• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    氫氣菌群制劑對急性缺氧大鼠的抗氧化效應

    2019-01-17 02:39:40陳郁龔亮李海波羅勇軍
    解放軍醫(yī)學雜志 2018年11期
    關鍵詞:氫氣高原制劑

    陳郁,龔亮,李海波,羅勇軍

    高原地區(qū)由于其特殊的地理環(huán)境,以及近年來的建設發(fā)展和交通設施的逐漸完善,吸引著越來越多的人群從平原進入高原從事相關活動,其中絕大部分為短期旅游者[1]。高原地區(qū)空氣稀薄、氧分壓低,是進入高原的平原人群發(fā)生急性高原反應最主要的原因,但是其導致損傷的具體機制仍未完全闡明[2-4]。氧化應激和自由基代謝異常是低氧引起損傷的重要因素,故適度應用抗氧化劑是防治低氧損傷的重要考慮方向[5]。在眾多的抗氧化劑中,氫具有極強的還原性,能夠選擇性地與氧自由基結合而減弱其作用,在抗氧化應激、對抗自由基代謝和抗炎方面發(fā)揮著重要作用,對機體重要器官具有顯著的保護效應[6]。為評估氫在急性缺氧過程中的抗氧化作用,本研究將大鼠暴露在模擬海拔5000m的高原環(huán)境中,構建大鼠急性缺氧模型,探討不同劑量氫氣菌群制劑對急性缺氧大鼠重要器官氧化應激指標和抗氧化指標的影響,為應用氫氣菌群及氫氣相關制品預防和治療急性高原病提供依據。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物 10~12周齡健康雄性SD大鼠共40只,體重200~220g,購自陸軍軍醫(yī)大學實驗動物中心。動物飼養(yǎng)于陸軍軍醫(yī)大學高原軍事醫(yī)學系動物房,所有動物均自由攝食、飲水,控制室溫在20~24℃。本實驗經陸軍軍醫(yī)大學動物倫理委員會批準。

    1.2 藥物及主要試劑、儀器 氫氣菌群制劑購自日本D&D TRINITY公司(http://ddtrinitylab.shopselect.net/items/3183023)。丙二醛(malonaldehyde,MDA)、過氧化氫酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。血漿腫瘤壞死因子α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)檢測采用ELISA試劑盒完成(武漢博士德生物工程有限公司)。Multiskan GO全自動多功能酶標儀購自美國Thermo公司。動物模型制備采用高原環(huán)境模擬艙(DYC-2842T型低壓氧艙),由貴航集團風雷機械廠建造。

    1.3 動物模型制備 將40只SD大鼠隨機分為平原生理鹽水(normoxic saline,NS)組、高原生理鹽水(high-altitude saline,HS)組、高原低劑量(highaltitude low-dose,HL)組、高原中劑量(high-altitude medium-dose,HM)組、高原高劑量(high-altitude high-dose,HH)組,每組8只。低劑量組、中劑量組和高劑量組的給藥劑量分別為10、20、40mg/(kg·d),于每天上午固定時間灌胃給藥,1次/d。高原組的動物在海拔4000m灌胃給藥、換水、食物及新鮮干凈墊料,在30min內完成,給藥完畢后動物上升至海拔5000m,連續(xù)3d,其中HS組每只大鼠灌胃2ml生理鹽水。NS組每只大鼠亦灌胃2ml生理鹽水,不進入低壓氧艙。

    1.4 實驗動物處理 第3次給藥后1d,在模擬海拔4000m處,將所有高原組動物處死取材。采用14%烏拉坦腹腔注射麻醉大鼠,劑量以1ml/100g計。取材時剪開胸腔,用注射器心臟采血,注意防止大出血導致采血失敗。取血完畢后將血液轉移至EDTA鈉抗凝管中,3000r/min離心10min,留取血漿,分裝凍存,–80℃?zhèn)溆?。分別獲取肝、肺及心臟組織,轉移至凍存管中,于液氮中凍存,再轉移至–80℃?zhèn)溆?。NS組取材在高原組取材后完成,樣品處理同高原組。

    1.5 實驗指標檢測 血漿在室溫解凍,采用ELISA法檢測血漿中的TNF-α含量,單位為pg/ml。采用比色法測定肝、肺、心肌組織中的MDA、CAT、SOD和GSH含量。將肝、肺、心肌組織4℃解凍后,每個標本剪取0.1g的組織,放入2ml的EP管中,再加入0.9ml的生理鹽水。采用預冷的眼科剪剪碎組織,勻漿機勻漿結束后置于冰上。待全部樣品勻漿完成后,以2500r/min的速度于4℃條件下離心10min,制備10%組織勻漿液置于4℃?zhèn)溆?。采用BCA法測定組織勻漿液蛋白含量。在預實驗中,對每個器官的每個檢測指標均測定了最佳檢測濃度,故在獲取10%的組織勻漿液后,采用生理鹽水稀釋至最佳濃度,分裝置于4℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.6 統計學處理 采用軟件SPSS 20.0進行統計分析。所有數據均以表示,多組間比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較時方差齊采用SNK-q檢驗,方差不齊采用Tamhane'T2分析。均為雙側檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

    2 結 果

    2.1 給藥后大鼠血漿TNF-α含量變化 在模擬海拔5000m的低氧環(huán)境暴露3d后,與NS組[(36.24±3.92)pg/ml]相比,高原各組的TNF-α含量[HS組為(39.89±5.38)pg/ml,HL組為(32.59±1.97)pg/ml,HM組為(39.89±5.38)pg/ml,HH組為(35.43±2.09)pg/ml]無明顯差異;與HS組相比,HL組的TNF-α含量明顯下降(P<0.01)。

    2.2 肝、肺、心肌組織各氧化應激指標的最佳測量濃度 由于不同組織的MDA、CAT、SOD及GSH含量不同,為保證最佳檢測效果,在正式檢測之前,先摸索了不同組織不同指標的最佳檢測濃度,結果見表1。在正式檢測前,將勻漿組織上清用生理鹽水稀釋至目標濃度,存于4℃?zhèn)溆谩?/p>

    表1 急性缺氧大鼠各組織氧化應激指標的最佳檢測濃度(%)Tab.1 Optimal concentrations of MDA, SOD, CAT and GSH of different tissues in acute hypoxia rats (%)

    2.3 給藥后大鼠肝組織MDA、CAT、SOD和GSH含量變化 與NS組相比,HS組及高原各藥物組大鼠肝組織MDA含量無明顯變化,與HS組相比,高原各藥物組大鼠肝組織DMA含量無明顯變化,提示氫氣菌群制劑在降低肝組織MDA含量方面無明顯效果。與NS組相比,HS組、HL組及HH組大鼠肝組織CAT含量均明顯下降(P<0.01),而與HS組相比,高原各藥物組大鼠肝組織CAT含量均無明顯變化,提示氫氣菌群制劑在提高肝組織CAT含量方面無明顯效果。NS組、HS組及高原各藥物組大鼠肝組織SOD含量比較均無明顯差異,提示氫氣菌群制劑對改善肝組織SOD無明顯效果。與NS組相比,HS組及高原各藥物組大鼠肝組織GSH含量明顯下降(P<0.01),與HS組相比,HL組和HH組大鼠肝組織GSH含量均明顯升高(P<0.05),HL組、HM組和HH組之間無明顯差異,提示低、中、高劑量的菌群制劑均可改善肝組織中GSH代謝,而高劑量的菌群制劑效果較好(表2)。

    表2 急性缺氧大鼠各組給藥后肝組織氧化應激相關指標的變化(±s,n=8)Tab.2 Changes of indicators in liver tissue of acute hypoxia rats in different groups after administration (±s, n=8)

    表2 急性缺氧大鼠各組給藥后肝組織氧化應激相關指標的變化(±s,n=8)Tab.2 Changes of indicators in liver tissue of acute hypoxia rats in different groups after administration (±s, n=8)

    MDA. Malonaldehyde; CAT. Catalase; SOD. Superoxide dismutase; GSH. Glutathione; NS. Normoxic saline group; HS. High altitude saline group, HL. High altitude low-dose group, HM. High altitude medium-dose group; HH. High altitude high-dose group. (1)P<0.01 compared with NS group; (2)P<0.01, (3)P<0.05 compared with HS group

    GSH(μmol/g prot)NS 0.36±0.04 0.88±0.18 0.76±0.14 43.63±8.90 HS 0.44±0.13 0.62±0.10(1)0.69±0.10 22.89±3.06(1)HL 0.52±0.16 0.56±0.18(1)0.68±0.22 29.65±6.00(1)(3)HM 0.43±0.08 0.65±0.26 0.58±0.12 27.63±3.64(1)HH 0.46±0.08 0.55±0.11(1)0.63±0.07 31.09±5.06(1)(3)Group MDA(nmol/mg prot)CAT(U/ml)SOD(U/mg prot)

    2.4 給藥后大鼠肺組織MDA、CAT、SOD和GSH含量變化 與NS組相比,HS組大鼠肺組織MDA含量明顯增加(P<0.01),與HS組相比,HL組及HM組大鼠肺組織MDA含量明顯下降(P<0.05),HL組則明顯低于HH組(P<0.01)而明顯高于HM組(P<0.01),HM組明顯低于HH組(P<0.01),提示在肺組織中,低劑量和中劑量的菌群制劑均有較好的抑制脂質過氧化的效果。與NS組相比,HS組大鼠肺組織CAT含量無明顯變化,與HS組相比,HL、HM和HH組大鼠肺組織CAT含量明顯上升(P<0.01),HL、HM和HH組之間CAT含量無明顯差異,提示氫氣菌群制劑能夠改善大鼠肺組織的CAT含量。與NS組相比,HS組與高原各藥物組大鼠肺組織SOD含量均無明顯變化,與HS組相比,HM組大鼠肺組織SOD含量明顯增加(P<0.01),HM組明顯高于HL組和HH組(P<0.01),HH組與HL組比較無明顯差異,提示氫氣菌群制劑能夠提高缺氧大鼠肺組織SOD的含量,且中等劑量效果最佳。與NS組相比,HS組大鼠肺組織GSH含量明顯下降(P<0.05),而高原各藥物組無明顯變化,與HS組相比,HM組大鼠肺組織GSH含量明顯升高(P<0.01),且HM組明顯高于HL組及HH組(P<0.01),提示氫氣菌群制劑能夠改善肺組織GSH含量,且中等劑量效果最好(表3)。

    表3 急性缺氧大鼠各組給藥后肺組織氧化應激相關指標的變化(±s,n=8)Tab.3 Changes of indicators in lung tissue of acute hypoxia rats in different groups after administration (±s, n=8)

    表3 急性缺氧大鼠各組給藥后肺組織氧化應激相關指標的變化(±s,n=8)Tab.3 Changes of indicators in lung tissue of acute hypoxia rats in different groups after administration (±s, n=8)

    MDA. Malonaldehyde; CAT. Catalase; SOD. Superoxide dismutase; GSH. Glutathione; NS. Plain saline group; HS. Plateau saline group, HL. Plateau low dose hydrogen group, HM. Medium dose hydrogen group; HH. High dose hydrogen group. (1)P<0.01, (2)P<0.05 compared with NS group; (3)P<0.01, (4)P<0.05 compared with HS group; (5)P<0.01 compared with HL group; (6)P<0.01 compared with HM group

    GSH(μmol/g prot)NS 0.57±0.20 0.26±0.05 1.64±0.22 5.97±1.70 HS 1.64±0.13(1) 0.29±0.07 1.63±0.40 4.14±1.20(2)HL 1.28±0.29(1)(4) 0.55±0.15(3)2.07±0.53 4.99±1.38 HM 1.22±0.36(1)(4) 0.61±0.13(3)2.71±0.80(3)(5)7.17±2.11(3)(6)HH 1.61±0.25(1)(5)(6)0.59±0.05(3)1.89±0.35(6) 4.88±0.98(6)Group MDA(nmol/mg prot)CAT(U/ml)SOD(U/mg prot)

    2.5 給藥后大鼠心肌組織MDA、CAT、SOD和GSH含量變化 與NS組相比,HS組與高原各藥物組大鼠心肌組織MDA含量均明顯增加(P<0.01),與HS組相比,HL組、HM組及HH組大鼠心肌組織MDA含量均明顯下降(P<0.05或P<0.01),HL組、HM組及HH組之間比較無明顯差異,提示氫氣菌群制劑可改善缺氧大鼠心肌組織的MDA含量增加。與NS組相比,HS組及高原各藥物組大鼠心肌組織CAT含量無明顯變化,與HS組相比,HH組大鼠心肌組織CAT含量明顯下降(P<0.05),HL組和HM組均明顯高于HH組(P<0.01),HL組與HM組比較無明顯差異,提示氫氣菌群制劑在改善缺氧大鼠心組織的CAT含量方面無明顯效果,且高劑量組還可導致CAT含量進一步下降。與NS組相比,HS組、HL組及HH組大鼠心肌組織SOD含量無明顯變化,HM組大鼠心肌組織SOD含量明顯增加,與HS組相比,HL組及HM組大鼠心肌組織SOD含量明顯增加(P<0.05或P<0.01),而HH組無明顯變化,HL、HM及HH組之間比較無明顯差異,提示氫氣菌群制劑能夠改善大鼠心組織SOD含量,且以中等劑量為最佳。與NS組相比,HS組大鼠心肌組織GSH含量明顯下降(P<0.01),而高原各藥物組無顯著改善,與HS組相比,HL組、HM組及HH組大鼠心肌組織GSH含量均明顯增加(P<0.05或P<0.01),且HH組明顯高于HL組及HM組(P<0.01),HL組與HM組之間比較無明顯差異,表明氫氣菌群制劑能夠提高缺氧大鼠心肌組織的GSH含量,且高劑量組的效果較好,優(yōu)于低劑量組與中劑量組(表4)。

    表4 急性缺氧大鼠各組給藥后心肌組織氧化應激相關指標變化(±s,n=8)Tab.4 Changes of indicators in heart tissue of acute hypoxia rats in different groups after administration (±s, n=8)

    表4 急性缺氧大鼠各組給藥后心肌組織氧化應激相關指標變化(±s,n=8)Tab.4 Changes of indicators in heart tissue of acute hypoxia rats in different groups after administration (±s, n=8)

    MDA. Malonaldehyde; CAT. Catalase; SOD. Superoxide dismutase; GSH. Glutathione; NS. Normoxic saline group; HS. High altitude saline group, HL. High altitude low-dose group, HM. High altitude medium-dose group; HH. High altitude high-dose group. (1)P<0.01 compared with NS group; (2)P<0.01, (3)P<0.05 compared with HS group; (4)P<0.05 compared with HL and HM group

    GSH(μmol/g prot)NS 0.68±0.23 1.57±0.34 0.95±0.30 4.02±1.40 HS 1.94±0.71(1) 1.64±0.12 0.90±0.10 2.09±0.44(1)HL 1.52±0.28(1)(3) 1.72±0.26 1.14±0.19(3) 2.39±0.42(3)HM 1.33±0.36(1)(3) 1.72±0.21 1.36±0.22(1)(2)2.47±0.52(3)HH 1.25±0.43(1)(3) 1.42±0.13(3)0.97±0.16 3.38±0.91(2)(4)Group MDA(nmol/mg prot)CAT(U/ml)SOD(U/mg prot)

    3 討 論

    正常情況下,機體不斷生成自由基,同時也存在自由基的清除體系如抗氧化酶等,使自由基的產生與清除處于動態(tài)平衡中,以保證機體不受自由基的損傷[7]。在高原低氧環(huán)境中,自由基代謝紊亂,自由基生成明顯增多,過多的自由基可造成組織損傷[5]。肝臟是機體最重要的代謝器官,肺臟是最主要的氣體交換場所,而心臟是對氧代謝特別敏感的器官,因此,本研究驗選擇了肝臟、肺臟和心臟作為靶器官,觀察氫氣菌群制劑在大鼠急性缺氧后對機體氧化指標和抗氧化指標的影響。MDA是脂質過氧化的終產物之一,其含量高低可提示機體的自由基代謝狀態(tài)并能夠間接反映自由基對組織的損傷程度[8]。SOD、CAT及GSH是機體重要的抗氧化系統,在機體拮抗氧化應激損傷和清除自由基的過程中發(fā)揮著重要作用[9]。本研究選擇的是能夠在腸道中代謝產生氫氣的菌群,進入消化道之后可在腸道定居并增殖以增加體內氫氣的產量,促進機體對氫氣的吸收以拮抗自由基的生成。本研究發(fā)現,在模擬海拔5000m暴露3d,應用氫氣菌群制劑后,能夠降低缺氧大鼠血漿TNF-α含量,降低缺氧大鼠肺組織和心肌組織的MDA含量,增加缺氧大鼠肝、肺以及心肌組織的GSH含量,增加肺組織CAT含量與肺、心肌組織SOD含量。上述結果表明,氫氣菌群制劑能夠在一定程度上中和缺氧導致的氧代謝自由基增加,對心肌組織和肺組織都有一定程度的保護作用。此外,本研究還觀察到,在單純缺氧組中各組織的MDA、CAT、SOD和GSH指標反應并不一致,考慮一方面可能與動物實驗中個體對藥物的反應不同有關,另外也可能與各組織對氫氣代謝反應的不一致有關。給予氫氣菌群制劑后經代謝產生氫氣,但是每只動物的產氫氣的量不一致,氫氣通過各種中間過程到達各組織的途徑不一致,到達的量也不一樣,從而使得HS組中MDA以及各抗氧化的指標反應并不一致。

    目前針對抗缺氧的藥物研究較多,以各種植物提取物以及小分子化合物為主,如槲皮素[10]、黃芪甲苷[9]、苯乙醇苷[11]、天麻素[12]、醋甲唑胺[13]、四甲基哌啶衍生物[14]及單硝酸異山梨酯化合物等[15]?,F有研究多為觀察自由基及抗缺氧物質等氧化損傷/抗氧化指標在細胞水平[11]或者動物組織中的含量變化[9-10,12-15]以評估抗缺氧物質的效應,本研究選取的MDA、CAT、SOD及GSH等也是動物實驗較多采用的指標,而部分細胞實驗則采用細胞活力等指標。目前的抗氧化指標雖然多,但仍缺少敏感、特異的抗缺氧指標,這也是篩選抗缺氧藥物的重要方向之一??谷毖跣且粋€整體效應,是在面對低氧環(huán)境時整個機體的活動能力,而不是僅僅停留在細胞或者組織層面。因此,針對藥物的抗缺氧效應,可考慮以動物的整體表現為評估指標,如在低氧環(huán)境中的認知能力和運動能力等行為學特征,并以此為基礎在組織、細胞及分子層面深入研究其機制。

    氫氣是自然界中最小、結構最簡單的分子,無色無味,具有極強的還原性。此外,由于其分子量小和電中性特點,能夠穿透生物膜到達細胞質、線粒體、細胞核等部位,因此很有可能作為一種小分子生命信號傳遞物質,在機體內傳遞信息。人體內的氫氣有兩個來源:一是皮膚從外界吸收,但是通過此途徑獲得的氫氣量非常少,二是腸道菌群代謝產生的氫氣,這也是人體內氫氣最主要的來源。研究表明,氫氣能夠對氧自由基進行有針對性的清除,尤其是中和體內氧化性較強的活性氧(reactive oxygen species,ROS)如羥基等而發(fā)揮作用[6]。而且大量研究表明,氫氣相關制劑如富氫水等能夠抑制炎癥因子如TNF-α、IL-1β的生成,并降低自由基的含量,進而減輕缺血再灌注損傷[16]。此外,富氫水還可通過抗炎抗氧化作用,減輕炎癥性腸病損傷[17],改善多發(fā)性硬化模型小鼠的癥狀和減輕脫髓鞘病變[18]。除了炎癥病變外,富氫水還可通過促進干擾素的表達來減低腫瘤的質量和體積[19],改善因化療導致的肝功能損傷[20]。上述研究結果提示,氫氣及其相關制劑有望在多種疾病的治療中得到進一步應用,改善機體癥狀。

    本研究使用的是氫氣菌群制劑,依賴于腸道菌群代謝產生氫氣,這種方式不穩(wěn)定,易受原有的腸道菌群和飲食的影響。在后期的進一步實驗中,可考慮直接應用富氫水腹腔注射處理動物模型,對急性高原病動物模型應有較好的效果。此外,雖然本研究使用的是急性動物模型,但是在高原紅細胞增多癥和高原肺動脈高壓等慢性缺氧模型中,也可針對性使用氫氣菌群或者富氫水制劑,以觀察其對低氧損傷的拮抗作用。目前,尚無高原現場條件下制備富氫水的報道,在高原條件下富氫水的保存也存在一定難度,因此使用氫氣菌群制劑以改善高原地區(qū)人群的腸道菌群,增加高原人群腸道氫氣的生成,也是未來可以考慮的方式。值得注意的是,由于高原低氧環(huán)境會對腸道菌群的組成和含量造成明顯的影響[21],因此針對需要長期在高原停留的人群,建議考慮長期應用氫氣菌群制劑以獲得較好的效果。

    綜上所述,本研究表明,使用氫氣菌群制劑可改善缺氧環(huán)境對心臟以及肺臟的損傷,通過拮抗自由基而對上述器官發(fā)揮保護作用。此外,氫氣菌群制劑的應用方式還可進一步優(yōu)化調整以發(fā)揮其最大效應。而氫氣在這其中發(fā)揮作用的機制如何,是否還有其他因子也參與了這一過程,我們將在后期實驗中進一步關注。

    猜你喜歡
    氫氣高原制劑
    中草藥制劑育肥豬
    拯救了無數人的抗菌制劑
    高原往事
    迸射
    高原往事
    高原往事
    元胡止痛系列制劑4種工藝比較
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:48
    一種用氫氣還原制備石墨烯的方法
    電源技術(2015年7期)2015-08-22 08:48:42
    氫氣對缺血再灌注損傷保護的可能機制
    最輕的氣體—氫氣
    亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产成人精品久久二区二区91 | 天天添夜夜摸| 欧美av亚洲av综合av国产av | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲欧美清纯卡通| 激情视频va一区二区三区| 国产成人系列免费观看| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av日韩在线播放| 交换朋友夫妻互换小说| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久99精品国语久久久| 男人操女人黄网站| 日韩大片免费观看网站| 黑人猛操日本美女一级片| 精品卡一卡二卡四卡免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 999精品在线视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久久欧美国产精品| 黄色视频不卡| 国产在线视频一区二区| 免费高清在线观看日韩| 欧美在线一区亚洲| 哪个播放器可以免费观看大片| 两性夫妻黄色片| 成人国产av品久久久| 精品久久蜜臀av无| 国产一区二区 视频在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产 精品1| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 波多野结衣av一区二区av| 少妇被粗大的猛进出69影院| 熟女av电影| 叶爱在线成人免费视频播放| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲人成电影观看| 男的添女的下面高潮视频| 午夜日本视频在线| 成人国语在线视频| 色视频在线一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 我要看黄色一级片免费的| 一级a爱视频在线免费观看| 性色av一级| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 黄色视频不卡| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲国产av影院在线观看| 精品一区在线观看国产| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 一区二区三区激情视频| 国产日韩欧美在线精品| 青春草视频在线免费观看| 九草在线视频观看| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品乱久久久久久| 免费观看性生交大片5| av女优亚洲男人天堂| 性色av一级| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲在久久综合| 亚洲欧美精品自产自拍| 最黄视频免费看| svipshipincom国产片| 制服人妻中文乱码| 亚洲色图综合在线观看| 在线 av 中文字幕| 老熟女久久久| 亚洲第一青青草原| 中文天堂在线官网| 欧美日韩视频精品一区| 99热网站在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美97在线视频| 久久久国产精品麻豆| 日韩av不卡免费在线播放| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久国产一区二区| 国产1区2区3区精品| 韩国高清视频一区二区三区| 少妇精品久久久久久久| 久久婷婷青草| 满18在线观看网站| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲美女视频黄频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 好男人视频免费观看在线| 中文字幕亚洲精品专区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美97在线视频| 天天添夜夜摸| 美女主播在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 一级毛片我不卡| 丝袜脚勾引网站| 亚洲少妇的诱惑av| 久久鲁丝午夜福利片| 男女免费视频国产| 少妇人妻 视频| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日韩免费高清中文字幕av| 秋霞在线观看毛片| 精品视频人人做人人爽| 五月开心婷婷网| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲精品一二三| 精品福利永久在线观看| 亚洲免费av在线视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 免费高清在线观看日韩| 欧美日韩视频精品一区| 国产成人欧美在线观看 | 香蕉国产在线看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 人人澡人人妻人| 久久久精品94久久精品| 丝袜脚勾引网站| 国产精品久久久av美女十八| 欧美日韩综合久久久久久| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲免费av在线视频| 久久久久久久久免费视频了| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲图色成人| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日韩av不卡免费在线播放| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 极品人妻少妇av视频| 国精品久久久久久国模美| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品.久久久| 亚洲七黄色美女视频| 极品人妻少妇av视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 乱人伦中国视频| 大陆偷拍与自拍| 成人毛片60女人毛片免费| 婷婷色综合大香蕉| 伦理电影免费视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 一级a爱视频在线免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 国产av精品麻豆| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| av片东京热男人的天堂| 最近手机中文字幕大全| 亚洲精品在线美女| 青春草视频在线免费观看| 美女高潮到喷水免费观看| 国产黄频视频在线观看| 久久久久视频综合| 我的亚洲天堂| 国产在视频线精品| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美人与善性xxx| 色网站视频免费| 中国三级夫妇交换| 午夜免费鲁丝| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 欧美黑人精品巨大| 国产福利在线免费观看视频| 日本vs欧美在线观看视频| 一级毛片电影观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 18禁观看日本| 午夜福利一区二区在线看| 丝袜人妻中文字幕| 青春草亚洲视频在线观看| 韩国av在线不卡| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费观看a级毛片全部| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲欧美激情在线| 免费在线观看完整版高清| 国产黄频视频在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 黑人欧美特级aaaaaa片| 九色亚洲精品在线播放| 丝袜喷水一区| 久久免费观看电影| www.熟女人妻精品国产| 欧美乱码精品一区二区三区| 国精品久久久久久国模美| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 五月天丁香电影| 欧美成人精品欧美一级黄| 男女床上黄色一级片免费看| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99精品久久久久人妻精品| 精品第一国产精品| 久久综合国产亚洲精品| 狂野欧美激情性bbbbbb| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲成人一二三区av| 国产午夜精品一二区理论片| av.在线天堂| 捣出白浆h1v1| 午夜日本视频在线| 国产精品人妻久久久影院| 日本爱情动作片www.在线观看| 日韩一区二区三区影片| 丝瓜视频免费看黄片| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩大码丰满熟妇| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 综合色丁香网| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 下体分泌物呈黄色| 国产精品久久久人人做人人爽| 成人免费观看视频高清| 国产成人91sexporn| 爱豆传媒免费全集在线观看| 无限看片的www在线观看| 制服诱惑二区| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 在线观看人妻少妇| av在线老鸭窝| 精品人妻一区二区三区麻豆| 搡老岳熟女国产| av.在线天堂| 一本色道久久久久久精品综合| 精品少妇久久久久久888优播| 曰老女人黄片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| videosex国产| 亚洲av男天堂| 老司机亚洲免费影院| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产亚洲av高清不卡| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 满18在线观看网站| 成年女人毛片免费观看观看9 | 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 一本大道久久a久久精品| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲七黄色美女视频| 操出白浆在线播放| 看免费av毛片| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产乱来视频区| 91精品三级在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 青青草视频在线视频观看| 嫩草影院入口| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产黄频视频在线观看| 成人黄色视频免费在线看| av国产久精品久网站免费入址| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲成人国产一区在线观看 | 精品国产乱码久久久久久小说| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲三区欧美一区| 免费看不卡的av| 男人操女人黄网站| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美日韩精品网址| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲av电影在线进入| 色吧在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美黑人欧美精品刺激| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲综合色网址| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 看十八女毛片水多多多| 大码成人一级视频| 亚洲情色 制服丝袜| 美女视频免费永久观看网站| 宅男免费午夜| a级毛片在线看网站| 美女扒开内裤让男人捅视频| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲视频免费观看视频| 国产黄频视频在线观看| 操美女的视频在线观看| 99久久综合免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜av观看不卡| 99九九在线精品视频| 青春草视频在线免费观看| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久鲁丝午夜福利片| 欧美精品一区二区免费开放| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 女人久久www免费人成看片| 久久久久视频综合| 秋霞在线观看毛片| 少妇精品久久久久久久| 午夜福利免费观看在线| 伊人亚洲综合成人网| 丰满迷人的少妇在线观看| 999精品在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 在线精品无人区一区二区三| 少妇人妻 视频| 9热在线视频观看99| 赤兔流量卡办理| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 日韩av免费高清视频| 不卡av一区二区三区| 国产精品国产av在线观看| 国产精品无大码| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美日韩av久久| 国产伦理片在线播放av一区| 香蕉国产在线看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久天堂一区二区三区四区| 国产精品偷伦视频观看了| 嫩草影院入口| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品国产三级专区第一集| 制服人妻中文乱码| 九九爱精品视频在线观看| 国产成人精品在线电影| 亚洲伊人久久精品综合| 欧美日韩国产mv在线观看视频| av视频免费观看在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 高清欧美精品videossex| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一区二区三区乱码不卡18| 国产精品久久久av美女十八| 精品国产乱码久久久久久男人| 大片电影免费在线观看免费| 欧美日韩亚洲高清精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 一边亲一边摸免费视频| 如何舔出高潮| 99久久综合免费| 久久久国产欧美日韩av| 国产黄频视频在线观看| 看免费av毛片| videos熟女内射| 满18在线观看网站| 男女国产视频网站| 免费黄色在线免费观看| 日本91视频免费播放| 午夜av观看不卡| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久婷婷青草| 国产一区二区在线观看av| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 看十八女毛片水多多多| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 欧美激情高清一区二区三区 | 久久毛片免费看一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产精品久久久人人做人人爽| 一区二区三区精品91| 卡戴珊不雅视频在线播放| 美女中出高潮动态图| 亚洲天堂av无毛| 国产精品久久久久成人av| 精品人妻在线不人妻| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品国产综合久久久| 亚洲男人天堂网一区| 精品久久蜜臀av无| 悠悠久久av| 交换朋友夫妻互换小说| 人人澡人人妻人| 国产成人系列免费观看| 亚洲欧洲国产日韩| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲中文av在线| 欧美精品av麻豆av| 男人舔女人的私密视频| 欧美在线一区亚洲| 欧美久久黑人一区二区| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 在线观看免费高清a一片| 国产亚洲精品第一综合不卡| 老鸭窝网址在线观看| 9191精品国产免费久久| 18禁国产床啪视频网站| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品中文字幕在线视频| 91精品三级在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 黄色毛片三级朝国网站| www.自偷自拍.com| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美日韩一级在线毛片| 久久青草综合色| 秋霞伦理黄片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| av在线老鸭窝| 精品一区二区免费观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 两性夫妻黄色片| 九色亚洲精品在线播放| 天天添夜夜摸| 久久热在线av| 精品一品国产午夜福利视频| 人人妻人人澡人人看| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲人成77777在线视频| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲人成电影观看| 丰满少妇做爰视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜av观看不卡| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产精品.久久久| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲精品第二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 黄色怎么调成土黄色| 国产一卡二卡三卡精品 | 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| avwww免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲,欧美精品.| 日日摸夜夜添夜夜爱| 最近中文字幕2019免费版| 在现免费观看毛片| 久久婷婷青草| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 看免费成人av毛片| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲av日韩在线播放| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美日本中文国产一区发布| 9191精品国产免费久久| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美成人午夜精品| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品免费大片| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 麻豆乱淫一区二区| 精品国产一区二区久久| 国产免费又黄又爽又色| 制服人妻中文乱码| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 高清欧美精品videossex| 久久久亚洲精品成人影院| 美女视频免费永久观看网站| 成人国语在线视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美激情高清一区二区三区 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| av在线老鸭窝| 在线观看国产h片| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩免费高清中文字幕av| 一级,二级,三级黄色视频| 如何舔出高潮| 大码成人一级视频| 国产成人一区二区在线| 午夜日韩欧美国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 色吧在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 精品国产国语对白av| 伊人亚洲综合成人网| 国产一级毛片在线| 精品久久蜜臀av无| 亚洲,欧美,日韩| 一级毛片我不卡| 亚洲精品视频女| 久久久久久人妻| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产毛片在线视频| av电影中文网址| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲综合色网址| 精品少妇黑人巨大在线播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 亚洲av综合色区一区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产色婷婷99| 午夜免费鲁丝| 亚洲欧美精品自产自拍| 婷婷色av中文字幕| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 久久久国产欧美日韩av| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 成人亚洲欧美一区二区av| 丝袜脚勾引网站| 婷婷色综合大香蕉| 男女无遮挡免费网站观看| 日本爱情动作片www.在线观看| av.在线天堂| 激情视频va一区二区三区| 七月丁香在线播放| 熟女av电影| 一区二区三区乱码不卡18| 18在线观看网站| 美女午夜性视频免费| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲av电影在线进入| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日本wwww免费看| 欧美黑人精品巨大| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 悠悠久久av| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品美女久久av网站| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日本色播在线视频| 亚洲国产看品久久| 啦啦啦在线免费观看视频4| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产男女内射视频| 伦理电影大哥的女人| 九色亚洲精品在线播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费看不卡的av| 一级毛片我不卡| 国产精品偷伦视频观看了| tube8黄色片| 校园人妻丝袜中文字幕| 欧美在线一区亚洲| 韩国精品一区二区三区| av天堂久久9| 欧美激情高清一区二区三区 | 成人国产av品久久久| 黄片播放在线免费| 黄频高清免费视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品三级大全| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 少妇人妻久久综合中文| 国产一卡二卡三卡精品 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 美国免费a级毛片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 美女中出高潮动态图| 在线观看免费高清a一片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一个人免费看片子| av国产精品久久久久影院| 日韩人妻精品一区2区三区| 乱人伦中国视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲av日韩在线播放| 熟妇人妻不卡中文字幕| 在线观看国产h片| 欧美xxⅹ黑人| 熟妇人妻不卡中文字幕| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 精品免费久久久久久久清纯 | 波野结衣二区三区在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产成人精品福利久久| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲av男天堂| 国产在线视频一区二区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲免费av在线视频| 日本黄色日本黄色录像| 久热爱精品视频在线9| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 黄色视频不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 中文字幕色久视频| 亚洲精品美女久久av网站| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲成国产人片在线观看| 大香蕉久久网| 青春草国产在线视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 波野结衣二区三区在线| 婷婷色av中文字幕| 免费av中文字幕在线| av.在线天堂| 九九爱精品视频在线观看| 黄片播放在线免费|