非小細(xì)胞肺癌中E-cadherin、MUC1及PINCH的表達(dá)及其臨床意義①

胡兆鵬 郭麗霞 李慧明 徐 妍 梁 賀

(萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院病理科，萍鄉(xiāng)337000)

非小細(xì)胞肺癌 (Non-small-cell lung cancer，NSCLC) 是常見肺部腫瘤病變類型，遠(yuǎn)期預(yù)后較差，5年存活率較低[1，2]。目前通常以臨床分期作為評(píng)估NSCLC患者病變程度及預(yù)后的方法，而腫瘤病情遷延進(jìn)展是一個(gè)漫長(zhǎng)而復(fù)雜的過(guò)程，臨床分期也處于動(dòng)態(tài)變化中，因此提升NSCLC病變進(jìn)展評(píng)測(cè)的準(zhǔn)確性，需要更具有代表性的評(píng)測(cè)指標(biāo)。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移與細(xì)胞間的黏附性密切相關(guān)，本研究目的在于分析與細(xì)胞黏附相關(guān)的E-cadherin、MUC1及PINCH在NSCLC中表達(dá)水平，并探討三者之間的相關(guān)性，探尋NSCLC病變進(jìn)展更具代表性的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1臨床資料 抽選2001年1月至2013年1月本院收治的70例NSCLC患者石蠟包埋標(biāo)本，其中男性患者38例，女性患者32例，年齡42～65歲，平均(51.4±3.5)歲，均進(jìn)行手術(shù)治療，患者手術(shù)治療前未接受其他治療干預(yù)，并且取得患者監(jiān)護(hù)人或患者本人的書面知情同意。70例NSCLC患者手術(shù)標(biāo)本均為石蠟包埋，肺癌組織標(biāo)本為觀察組，癌旁正常組織標(biāo)本記為對(duì)照組。癌變組織高、中、低分化者分別為14例、30例、26例；分期為Ⅰ期至Ⅳ期，分別16例、20例、18例、16例。根據(jù)術(shù)后病理報(bào)告詳細(xì)記錄組織學(xué)類型、是否伴有淋巴轉(zhuǎn)移等情況。

1.1.2主要試劑 E-cadherin鼠抗人單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)，MUC1 IgG 鼠抗人單克隆抗體( 美國(guó)Santa Cruz公司)，PINCH蛋白兔抗人多克隆抗體(博士德公司)，免疫組化 SP 法試劑盒(福建邁新生物技術(shù)公司)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)方法 病例標(biāo)本均來(lái)源于手術(shù)切除標(biāo)本，均用10%中性緩沖福爾馬林固定液固定24 h，常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋、4 μm連續(xù)切片，置于56℃烤箱中烘烤12 h，用于免疫組織化學(xué)染色。免疫組化染色采用SP法，并結(jié)合抗體說(shuō)明書進(jìn)行操作。用已知的陽(yáng)性組織作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS液代替一抗作空白對(duì)照，其他步驟相同。

1.2.2結(jié)果判斷 以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒分布為陽(yáng)性細(xì)胞，隨機(jī)觀察10個(gè)不同高倍視野(10×40)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù))，陽(yáng)性細(xì)胞率小于10%為陰性，大于等于10%為陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，采用四格表χ2檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)檢驗(yàn)，以0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)，即P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1.1E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織(觀察組)及癌旁正常組織(對(duì)照組)中的表達(dá)情況 E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白在觀察組及對(duì)照組中的表達(dá)情況詳見表1，三者在觀察組與對(duì)照組組織的陽(yáng)性表達(dá)率均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示非小細(xì)胞肺癌組織中MUC1、PINCH蛋白的表達(dá)增加，而E-cadherin蛋白的表達(dá)下調(diào)。

2.1.2E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征間的關(guān)系 E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況詳見表2。不同臨床分期中，E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率隨著分期的升高而下降(P<0.05)，而MUC1和PINCH陽(yáng)性表達(dá)率隨著分期的升高而升高(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織顯著降低(P<0.01)，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中MUC1和PINCH陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織顯著升高(P<0.01)。

表1E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白表達(dá)情況

Tab.1ExpressionofE-cadherin,MUC1andPINCHinNSCLC

GroupsnE-cadherin positiveexpressionMUC1 positiveexpressionPINCH positiveexpressionControl7053(75.7%)4(5.7%)6(8.6%)Observation7018(25.7%)44(62.9%)40(57.1%)χ2 value-35.00750.72537.428P value-0.0000.0000.000

2.2非小細(xì)胞肺癌中E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白表達(dá)的相關(guān)性

2.2.1MUC1和PINCH蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 MUC1和PINCH蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中共同陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為35例。MUC1陽(yáng)性組中有9例PINCH呈陰性表達(dá)(9/44)，MUC1陰性組中有5例PINCH呈陽(yáng)性表達(dá)(5/26)，以P<0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，結(jié)果表明兩者之間呈正相關(guān)(r=0.589，P=0.000)。見表3。

2.2.2E-cadherin和MUC1蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 E-cadherin和MUC1蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中共同陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為3例。MUC1陽(yáng)性組中有41例E-cadherin呈陰性表達(dá)(41/44)，MUC1陰性組有15例E-cadherin呈陽(yáng)性表達(dá)(15/26)，兩者之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.562，P=0.000)。見表4。

表2E-cadherin、MUC1及PINCH蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征間關(guān)系

Tab.2ExpressionofE-cadherin,MUC1andPINCHinNSCLCofdifferentclinicalstageandlymphaticmetastasis

VariableItemnE-cadherinpositive casesMUC1positive casesPINCHpositive casesStagesⅠ-Ⅱ3613(36.1%)18(50.0%)14(38.9%)Ⅲ-Ⅳ345(14.7%)26(76.5%)26(76.5%)LymphaticMetastasis463(6.5%)40(86.9%)34(73.9%)Non-metastasis2415(62.5%)4(16.7%)6(25%)

表3非小細(xì)胞肺癌中MUC1和PINCH蛋白表達(dá)的關(guān)系

Tab.3CorrelationofMUC1andPINCHexpressioninNSCLC

MUC1Positive casesNegative casesTotalPINCHPositive cases35540Negative cases92130Total442670

表4非小細(xì)胞肺癌中E-cadherin和MUC1蛋白表達(dá)的關(guān)系

Tab.4CorrelationofE-cadherinandMUC1expressioninNSCLC

E-cadherinPositive casesNegative casesTotalMUC1Positive cases34144Negative cases151126Total185270

表5非小細(xì)胞肺癌中E-cadherin和PINCH蛋白表達(dá)的關(guān)系

Tab.5CorrelationofE-cadherinandPINCHexpressioninNSCLC

E-cadherinPositive casesNegative casesTotalPINCHPositive cases43640Negative cases141630Total185270

2.2.3E-cadherin和PINCH蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 E-cadherin和PINCH蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中共同陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為4例。PINCH陽(yáng)性組中有36例E-cadherin呈陰性表達(dá)(36/40)，PINCH陰性組有14例呈E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)(14/30)，兩者之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.415，P=0.000)。見表5。

3 討論

腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移與細(xì)胞間的黏附性密切相關(guān)，細(xì)胞間黏附性的下降與癌細(xì)胞的去分化、侵襲性及轉(zhuǎn)移傾向有關(guān)。E-cadherin是一種鈣依賴的細(xì)胞黏附分子，它介導(dǎo)細(xì)胞間結(jié)合，抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌[3]、膀胱癌[4]和胰腺癌[5]等多種腫瘤中E-cadherin不同程度表達(dá)下降或不表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)[6-7]，E-cadherin缺失或低表達(dá)可以成為預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌疾病進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)。在本研究中，NSCLC腫瘤組織中僅有18例E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)(25.7%)，與正常組織相比，陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度明顯減弱；隨著臨床分期升高，其陽(yáng)性表達(dá)率顯著降低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中其陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織顯著降低，與Jiang等[8]研究結(jié)果基本一致，提示E-cadherin可能參與了NSCLC腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。

MUC1是Mucins黏蛋白家族成員，主要表達(dá)于正常組織的上皮細(xì)胞[9]。研究表明當(dāng)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染MUC1基因后，腫瘤細(xì)胞獲得了更高的移動(dòng)性和侵襲性[10]；以 MUC1 為靶點(diǎn)研制抗腫瘤疫苗也是目前的研究熱點(diǎn)[11，12]。大量研究提示MUC1可在卵巢腫瘤等多種腫瘤中異常表達(dá)[13-15]，與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究中NSCLC腫瘤組織MUC1的陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.9%(44/70)，與對(duì)照組比較具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；其陽(yáng)性表達(dá)率隨著pTNM分期升高而降低；且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中MUC1陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織顯著升高，提示MUC1蛋白可能與NSCLC的腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)，與Kuemmel等[15]的研究結(jié)果基本一致。

PINCH是黏著斑蛋白，對(duì)細(xì)胞黏附、遷移過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)，在正常組織中僅少量表達(dá)，但在肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤間質(zhì)及腫瘤浸潤(rùn)的邊緣中異常高表達(dá)[16，17]，提示參與腫瘤發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程。本研究中NSCLC患者腫瘤組織中PINCH的陽(yáng)性表達(dá)率為57.1%(40/70)，與對(duì)照組比較差異明顯(P<0.01)；隨著臨床分期升高，其陽(yáng)性表達(dá)率顯著降低；而且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織中PINCH陽(yáng)性表達(dá)率較無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織顯著升高，提示PINCH蛋白的陽(yáng)性表達(dá)可能是NSCLC浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)志物，具有一定的代表性。

E-cadherin是細(xì)胞黏附分子，MUC1是黏蛋白家族成員，PINCH是黏著斑蛋白，三者均與細(xì)胞間的黏附性能密切相關(guān)，對(duì)細(xì)胞黏附、遷移過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)。有學(xué)者認(rèn)為[18]，MUC1的異常高表達(dá)，可使 E-cadherin表達(dá)水平下調(diào)。與此結(jié)果一致，本研究顯示NSCLC中E-cadherin和MUC1蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，E-cadherin和PINCH蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。另外，本研究分析了MUC1和PINCH蛋白之間的相關(guān)性，結(jié)果顯示二者之間呈正相關(guān)關(guān)系，提示E-cadherin、MUC1及PINCH三者可能互相聯(lián)系共同促進(jìn)NSCLC的侵襲轉(zhuǎn)移；更為具體的分子機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

綜上，我們推測(cè)E-cadherin、MUC1及PINCH三者可能互相聯(lián)系共同影響細(xì)胞間的黏附性進(jìn)而促進(jìn)NSCLC侵襲與轉(zhuǎn)移；同時(shí)檢測(cè)E-cadherin和MUC1和PINCH蛋白在NSCLC癌組織中的表達(dá)，對(duì)于潛在病變組織以及轉(zhuǎn)移組織的檢測(cè)可能有重要意義。在此研究的基礎(chǔ)上，我們將追蹤分析NSCLC患者的五年存活率，以進(jìn)一步確定E-cadherin和MUC1和PINCH蛋白在NSCLC預(yù)后中的作用。