循環(huán)miR-146a水平對(duì)亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的預(yù)測(cè)價(jià)值觀察

，，，，

臨床將血清促甲狀腺激素(TSH)≥4.0 mU/L且血清游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)和血清游離甲狀腺素(FT4)正常，定義為亞臨床甲狀腺功能減退，成年人患病率為4%～20%，女性和老年人發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)高，是臨床常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝性疾病[1]。近年來(lái)的研究顯示[2-3]，亞臨床甲狀腺功能減退癥是冠心病易感性的潛在危險(xiǎn)因素，隨著TSH水平升高，冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度愈加明顯，并可增加冠心病發(fā)生率和冠心病死亡率。亞臨床甲狀腺功能減退可導(dǎo)致血脂代謝異常、炎癥、氧化應(yīng)激、血管內(nèi)皮功能障礙等多種狀態(tài)，參與冠心病發(fā)生發(fā)展的多個(gè)環(huán)節(jié)[4]。miR-146a在動(dòng)脈粥樣硬化形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；血管內(nèi)皮細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞均有表達(dá)，通過(guò)調(diào)控不同靶基因發(fā)揮不同生物學(xué)作用，參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。高水平的miR-146a表達(dá)是心血管事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，但miR-146a是否可預(yù)測(cè)亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病的發(fā)生國(guó)內(nèi)尚鮮見(jiàn)報(bào)道[5]。本研究選擇2015年1月—2018年1月在西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院因胸悶、胸痛就診的亞臨床甲狀腺功能減退癥病人作為研究對(duì)象，探討循環(huán)miR-146a水平對(duì)亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年1月—2018年1月在西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院因胸悶、胸痛就診的亞臨床甲狀腺功能減退癥病人作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①血清TSH>4.5 mIU/L，F(xiàn)T3、FT4正常，符合2012版《成人甲狀腺功能減退癥臨床處理指南》中亞臨床甲狀腺功能減退癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②年齡>18歲，性別不限，既往無(wú)心腦血管病史；③無(wú)造影劑過(guò)敏史，同意進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影檢查；④對(duì)研究知情并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有甲狀腺疾病史或患有可能引起甲狀腺激素代謝異常的疾病者；②近期服用影響甲狀腺功能藥物者；③妊娠或哺乳期女性；④合并嚴(yán)重心、肝、腎功能及凝血機(jī)制異常；⑤合并惡性腫瘤者；⑥急慢性感染者；⑦合并腦血管疾病、下丘腦疾病者；⑧認(rèn)知功能障礙、精神疾病、視聽(tīng)功能障礙者；⑨擬納入或已納入其他臨床研究者。共納入246例病人，其中男74例，女172例；年齡39歲～72歲(58.25歲±7.14歲)。

1.2 研究方法

1.2.1 一般情況 收集病人性別、年齡、體重指數(shù)(BMI)、既往史、合并癥等一般情況，體重指數(shù)以<24 kg/m2、(24～28) kg/m2和>28 kg/m2分別代表正常、超重、肥胖。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室檢查 入組后抽取病人空腹靜脈血，采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)病人空腹血糖、血脂、肌酐、尿酸(UA)，采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)血清TSH、FT3、FT4水平，采用循環(huán)酶法檢測(cè)血清同型半胱氨酸(Hcy)水平；采用淋巴細(xì)胞分離液分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，采用miR-Neasy Mini Kit試劑盒提取總RNA，采用miScript Ⅱ RT Kit逆轉(zhuǎn)錄cDNA，RT-PCR檢測(cè)miR-146a表達(dá)，按SYBR Green EXScript TMPCR Kit操作程序完成PCR擴(kuò)增，以U6為內(nèi)參，測(cè)定miR-146a表達(dá)水平，采用2-ΔΔCT值表示，miR-146a引物：上游：5′-TGAGAACTGAATTCCATGGGTT-3′，下游：5′-ATCTACTCTCCAGGTCCTCA-3′，U6引物：上游：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.2.3 冠狀動(dòng)脈造影檢查 采用Jundins技術(shù)，局部麻醉下經(jīng)皮穿刺對(duì)冠狀動(dòng)脈進(jìn)行多體位、多角度造影，病人左前降支、左回旋支、右冠狀動(dòng)脈主干或其癥分支至少1處狹窄程度≥50%即診斷為冠心病[7]。

2 結(jié) 果

2.1 亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病發(fā)病率及單因素分析 246例病人檢出冠心病102例，檢出率為41.46%，冠心病組miR-146a表達(dá)量為2.209±0.636，非冠心病組miR-146a表達(dá)量為1.586±0.586，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.925，P<0.001)。單因素分析顯示，飲酒不是影響亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素(P>0.05)，性別、年齡、體重指數(shù)、冠心病家族史、吸煙、高血壓、糖尿病、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、Hcy、TSH是影響亞臨床甲狀腺減退癥病人冠心病發(fā)病的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

2.2 影響亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病發(fā)病的多因素分析 對(duì)單因素分析有臨床意義的因素賦值，以冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，將賦值后的自變量引入二分類(lèi)多因素Logistic分析，結(jié)果顯示，年齡≥60歲、糖尿病、LDL-C≥3.12 mmol/L、TSH≥10 mU/L、miR-146a是影響亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表1 影響亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病發(fā)病的單因素分析

表2 影響亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病發(fā)病的多因素分析

2.3 miR-146a預(yù)測(cè)亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病的臨床價(jià)值 以冠狀動(dòng)脈造影檢查結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，繪制miR-146a預(yù)測(cè)亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病的ROC，結(jié)果顯示，miR-146a預(yù)測(cè)的靈敏度、特異性、Cut-off、AUC和95%CI分別是62.75%、82.64%、2.06、0.767和0.709～0.818。詳見(jiàn)圖1。

3 討 論

亞臨床甲狀腺功能減退無(wú)明顯臨床表現(xiàn)，主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查確診，近年來(lái)隨著TSH檢測(cè)技術(shù)的提高，亞臨床甲狀腺功能減退的檢出率和檢出人數(shù)不斷增加[8]。近年來(lái)的研究顯示，亞臨床甲狀腺功能減退與冠心病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，多項(xiàng)研究顯示亞臨床甲狀腺功能減退可引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化、血脂異常，與心腦血管疾病密切相關(guān)[9-10]。

圖1 miR-146a預(yù)測(cè)亞臨床甲狀腺功能減退癥病人冠心病的ROC

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展是涉及免疫和炎癥反應(yīng)的復(fù)雜慢性炎癥疾病，伴有免疫反應(yīng)的炎癥過(guò)程貫穿于整個(gè)發(fā)病過(guò)程。微小RNA(miRNA)是一類(lèi)內(nèi)源性、序列高度保守的RNA，參與機(jī)體多種病理生理過(guò)程，miRNA是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的具有免疫調(diào)節(jié)作用的miRNA，可介導(dǎo)下游基因參與機(jī)體免疫、炎癥、造血、腫瘤等生理和病理生理過(guò)程[11]。Guo等[12]研究顯示，急性冠脈綜合征病人外周血單個(gè)核細(xì)胞miR-146a水平升高，且與外周血炎癥因子水平呈正相關(guān)，miR-146a擬似物可刺激單個(gè)核細(xì)胞升高體內(nèi)炎癥因子水平，而miR-146a抑制劑可降低體內(nèi)炎癥因子水平，結(jié)果認(rèn)為miR-146a可增強(qiáng)輔助性T細(xì)胞功能，促進(jìn)炎癥發(fā)生。而王麗莉[13]研究顯示，通過(guò)表達(dá)miR-146a，可升高TLR4、NF-κBmRNA和蛋白，抑制miR-14，降低TLR4、NF-κB mRNA和蛋白，白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等炎癥因子隨之升高或降低，認(rèn)為miR-146通過(guò)調(diào)控TLR4/NF-κB調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。孟凡磊等[14]研究顯示，miRNA-146可通過(guò)下游信號(hào)下調(diào)膽固醇酯水解酶表達(dá)，抑制膽固醇的逆行轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。因此，miRNA-146a可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫炎癥、脂質(zhì)代謝等多種途徑促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。

陳麗媛等[15]研究顯示，冠心病病人外周血單個(gè)核細(xì)胞miRNA-146a表達(dá)升高，且與穩(wěn)定型冠心病病人相比較，急性冠脈綜合征病人miRNA-146a表達(dá)明顯升高，且與冠脈病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。駱瑜等[16]研究顯示，miR-146a通過(guò)正反抗調(diào)控NF-κBp65的方式促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，頸動(dòng)脈粥樣硬化病人循環(huán)miRNA-146a水平顯著升高，且與超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)和白介素-1(IL-1)呈相關(guān)，認(rèn)為miRNA-146a可作為動(dòng)脈粥樣硬化的血清標(biāo)志物之一。Quan等[17]研究顯示，冠心病病人外周血miRNA-146a水平高于健康對(duì)照組，亞臨床甲狀腺功能減退病人miRNA-146a水平高于單純冠心病病人，miRNA-146a預(yù)測(cè)亞臨床甲狀腺功能減退病人冠心病的AUC為0.779。本研究結(jié)果顯示，miRNA-146a是亞臨床甲狀腺功能減退病人冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，預(yù)測(cè)亞臨床甲狀腺功能減退病人冠心病的AUC為0.767 。

miRNA-146a是亞臨床甲狀腺功能減退病人冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，血漿miR-146a水平對(duì)亞臨床甲狀腺功能減退病人冠心病具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，有待納入更多病例進(jìn)一步研究探討。