潔身洗液的含量測定方法及工藝優(yōu)化研究

魏紅妮，郭增軍，張 青

(1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061；2.陜西國際商貿(mào)學(xué)院，咸陽 712000)

潔身洗液復(fù)方制劑組成來源于清代名醫(yī)高秉鈞的《瘍科心得集》[1]、顧世澄的《瘍醫(yī)大全》和王清任的《醫(yī)林改錯》[2-3]，由其中的苦參湯、塌癢湯和蛇床子散精煉而成?，F(xiàn)代藥理研究表明，苦參湯中的苦參、黃連，苦寒清心，有抗心律失常即抑制異位起搏點和直接快速阻斷心肌微型折返的作用；塌癢湯由苦參、威靈仙和蛇床子等組成，主治婦人濕熱下注、陰中作癢及內(nèi)外生瘡，現(xiàn)用于治療陰道滴蟲??；蛇床子散由蛇床子等中藥組成，主治小兒瘙癢、疥瘡等。經(jīng)三方合并精選后組成潔身洗液配方，具有清熱解毒、燥濕殺蟲的功效。適用于濕熱蘊結(jié)所致的濕疹、陰癢帶下。其主要成分苦參具有清熱燥濕、祛風殺蟲、主濕熱瀉痢、腸風便血、黃疸、小便不利、水腫和帶下陰癢。由于傳統(tǒng)的水提醇沉工藝時間長、效率低，苦參的有效成分轉(zhuǎn)移率低。因此，本文通過改進該產(chǎn)品制劑的工藝方法來提高苦參[4-7]藥材主成分的轉(zhuǎn)移率，同時通過改進現(xiàn)有的含量檢測方法[8-12]，提高檢測結(jié)果的準確性。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100 高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；PB-21型酸度計(美國賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；STC-302型液-液自動萃取設(shè)備(濟南盛泰電子科技有限公司)。

1.2試藥 含量測定樣品(潔身洗液，批號170901)，工藝研究樣品(潔身洗液，批號：160701，160702和160703)，均購自陜西步長高新制藥有限公司；苦參堿對照品(批號110805-200508)，購自中國食品藥品檢定研究院；苦參藥材飲片(陜西康盛堂藥業(yè)有限公司)；乙腈、無水乙醇均為色譜純(賽默飛世爾科技有限公司)；磷酸為分析純(天津市富宇精細化工有限公司)。

2 原工藝及檢測方法

2.1原工藝 以上幾味藥材，按照工藝要求加水煎煮2次，合并煎液，濾過，濾液在適當溫度下減壓濃縮至相對密度，加乙醇稀釋至含規(guī)定乙醇體積分數(shù)，靜置，濾過，濾液在一定溫度下減壓回收乙醇至無醇味，加水至規(guī)定量，加藥用輔料適量，攪勻，過濾，灌裝。

2.2原測定方法

2.2.1供試品溶液的制備 精密吸取樣品10 mL，置于分液漏斗中，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至酸性，用三氯甲烷振搖提取2次，定量，棄去三氯甲烷液，水液用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至標準值，用三氯甲烷振搖提取4次，定量，合并三氯甲烷液，加適量無水硫酸鈉脫水，濾過，無水硫酸鈉用三氯甲烷液適量分數(shù)次洗滌，洗液并入濾液中，蒸干，殘渣加無水乙醇溶解，移至50 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.2色譜條件 采用Kromasil氨基鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-無水乙醇-35 mL·L-1磷酸溶液 (78∶10∶12)；流速：1 mL·min-1;檢測波長：220 nm；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下各色譜峰分離度均達到定量要求。

2.2.3對照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對照品適量，加乙腈-無水乙醇(80∶20)使溶解，制成苦參堿質(zhì)量濃度為0.15 mg·mL-1的溶液，即得。

3 優(yōu)化后的含量測定方法

3.1供試品溶液的制備 精密量取本品(批號170901)10 mL，加氨液適量，用氯仿萃取，萃取過程使用液-液自動萃取設(shè)備[13-14]，合并萃取液，蒸干，殘渣加無水乙醇溶解，移至50 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

3.2色譜條件 采用Kromasil氨基鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相為乙腈-無水乙醇-35 mL·L-1磷酸溶液 (78∶10∶12)；流速：1 mL·min-1；檢測波長：220 nm；進樣量：10 μL。在上述色譜條件下各色譜峰分離度均達到定量要求。結(jié)果見圖1。

圖1HPLC圖

A.空白溶劑；B.苦參堿對照品；C.陰性對照品;D.樣品；1.苦參堿。

Fig.1 HPLC chromatograms

A.blank solvent；B.matrine reference substance；C.negative control；D.sample；1.matrine.

3.3對照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對照品適量，加乙腈-無水乙醇(80∶20)使溶解，制成苦參堿質(zhì)量濃度為0.15 mg·mL-1的溶液，即得。

3.4線性范圍的考察 精密稱取苦參堿對照品適量，加乙腈-無水乙醇(80∶20)使溶解，制成苦參堿質(zhì)量濃度為2 mg·mL-1的溶液；分別精密吸取3.3項下制備的對照品溶液，用無水乙醇制成質(zhì)量濃度分別為0.05，0.1，0.5，1.0和1.5 mg·mL-1的系列對照品溶液，進樣10 μL，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積(y)對進樣量(x)進行回歸，得標準曲線方程y=3 347.66x-13 825.07(r=0.999 9)。結(jié)果表明，苦參堿質(zhì)量濃度在0.5～15 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5干擾性實驗 取不含苦參的陰性樣品，按照3.1 項下制備方法制成陰性樣品溶液，按照3.2項下色譜條件進樣，結(jié)果表明，陰性樣品在苦參堿峰位置處無干擾峰出現(xiàn)。

3.6精密度實驗 取3.1項下制備好的供試品溶液(批號170901)，按照3.2項下色譜條件測定，重復(fù)進樣5次，進樣量為10 μL，測定苦參堿峰面積，結(jié)果苦參堿峰面積RSD值為0.31%。

3.7穩(wěn)定性實驗 取3.1項下制備好的供試品溶液(批號170901)，分別在0，2，4，6和8 h進樣，進樣量為10 μL，測定苦參堿峰面積，結(jié)果苦參堿峰面積RSD值為0.23%。

3.8重復(fù)性實驗 按照擬定的含量測定方法，對同一批樣品(批號170901)分別制備5份供試品溶液，測定苦參堿含量，結(jié)果苦參堿含量的RSD值為0.24%。

3.9回收率實驗 精密吸取已知含量的樣品(批號 170901)6份，分別加入不同量的苦參堿對照品，按照3.1項下供試品制備方法和3.2項下色譜條件制備加樣回收供試品溶液，并注入高效液相色譜儀，計算苦參堿的回收率。結(jié)果苦參堿的平均回收率為98.3%，RSD值為0.27%。

3.10檢測結(jié)果 見表1。

表1含量測定方法優(yōu)化前后實驗結(jié)果

Tab.1 Experimental results before and after the optimization of the content determination method (n=5)

樣品方法優(yōu)化前含量/mg·mL-1平均值/mg·mL-1RSD值/%方法優(yōu)化后含量/mg·mL-1平均值/mg·mL-1RSD值/%10.730.7022.740.720.7160.7620.710.7230.700.7140.680.7150.690.72

3.11小結(jié) 采用改進前后的含量測定方法所測得的結(jié)果均在標準范圍內(nèi)，但改進后的測定方法測得的結(jié)果誤差更小，RSD值為0.76%，明顯低于改進前的RSD值2.74%，有效降低了標準誤差。結(jié)果表明，該方法操作更加簡便，有效減少了人員操作的個體化差異，使結(jié)果更具有代表性和準確性。

4 工藝改進

4.1水提工藝的改進 將傳統(tǒng)水提煎煮工藝改為霧化提取工藝[15-16]，分別設(shè)定相應(yīng)的工藝參數(shù)[17-19]，設(shè)計正交實驗[20]，因素水平見表2。以苦參堿轉(zhuǎn)移率和氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率作為評價指標進行綜合評分，結(jié)果見表3。

由表3可知，B>A>C，其中以A和B因素影響較大，最佳工藝為A3B2C3，按照最佳工藝進行生產(chǎn)，苦參堿轉(zhuǎn)移率高出傳統(tǒng)水提工藝15%以上，時間縮短，工藝的提取成本降低。

表2水提工藝正交實驗因素與水平

Tab.2 The orthogonal test factors and levels of water extraction process

水平因素A,噴嘴直徑/mmB,時間/minC,壓力/MPa10.255020.4107030.61590

表3水提工藝改進后的實驗結(jié)果

Tab.3 Experimental results of the improved water extraction process

項目ABCD苦參堿轉(zhuǎn)移率/%氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率/%綜合評分1111160.229.564.022122279.643.789.303133381.345.191.664212369.339.178.785223174.240.683.106231272.438.379.797313283.250.698.208321386.348.597.929332180.444.390.35K181.6674.2080.5879.16K280.5690.1186.1489.10K395.4988.3790.9989.45R14.9315.9110.4110.29

注:苦參堿轉(zhuǎn)移率得分=苦參堿轉(zhuǎn)移率÷苦參堿轉(zhuǎn)移率最大值×100；氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率得分=氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率÷氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率最大值×100；綜合評分=(苦參堿轉(zhuǎn)移率得分+氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率得分)÷2。

4.2醇沉工藝的改進 分別設(shè)定相應(yīng)工藝參數(shù)，設(shè)計正交試驗，因素水平見表4。以苦參堿轉(zhuǎn)移率和固體去除率作為評價指標，結(jié)果見表5。

由表5可知，a>c>b，以a和c因素影響較大，最佳工藝為a3b3c2，按照該工藝操作，相對轉(zhuǎn)移率比工藝改進前顯著提高，醇沉干燥物顯著降低。

表4醇沉工藝正交實驗因素與水平

Tab.4 The orthogonal test factors and levels of alcohol precipitation process

水平因素a,乙醇體積分數(shù)/%b,加醇管徑/cmc,加醇速度/mL·min-1190115285320380625

表5醇沉工藝改進后實驗結(jié)果

Tab.5 Experimental results after the improvement of alcohol precipitation process

項目abcd苦參堿轉(zhuǎn)移率/%固體去除率/%綜合評分1111170.345.376.982122278.747.484.533133380.660.192.344212378.756.288.925223177.652.386.126231280.345.284.677313283.558.793.888321385.550.191.149332190.558.699.25K184.6283.5284.2687.45K286.5787.2690.9087.69K394.7692.5790.7890.80R8.193.746.523.35

注:苦參堿轉(zhuǎn)移率得分=苦參堿轉(zhuǎn)移率÷苦參堿轉(zhuǎn)移率最大值×100；固體去除率得分=固體去除率÷固體去除率最大值×100；綜合評分=(苦參堿轉(zhuǎn)移率得分×70+固體去除率得分×30)÷100。

5 中試結(jié)果

小試結(jié)束后，我們對改進前后的工藝進行中試結(jié)果跟蹤，并將改進前后的結(jié)果進行對比，3批中試實驗數(shù)據(jù)見表6和表7。

表6水提工藝改進前后測定結(jié)果

Tab.6 Determination results before and after the improvement of water extraction process

樣品批號改進前苦參堿轉(zhuǎn)移率/%氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率/%改進后苦參堿轉(zhuǎn)移率/%氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率/%16070172.138.888.549.616070273.739.289.648.316070375.641.790.550.2

表7醇沉工藝改進前后測定結(jié)果

Tab.7 Determination results before and after the improvement of alcohol precipitation process

樣品批號改進前苦參堿轉(zhuǎn)移率/%固體去除率/%改進后苦參堿轉(zhuǎn)移率/%固體去除率/%16070169.345.691.260.516070271.347.289.459.816070374.848.890.759.2

由表6和表7可知，從改進前后的3批中試結(jié)果對比可知，傳統(tǒng)的水提工藝在進行霧化提取改進后，其苦參堿和氧化苦參堿轉(zhuǎn)移率均有了很大提高，苦參堿平均轉(zhuǎn)移率提高15.7%，氧化苦參堿平均轉(zhuǎn)移率提高9.5%。同樣在醇沉工藝中，加醇速度和加醇體積分數(shù)的變化亦會影響苦參堿的轉(zhuǎn)移率，醇沉改進后苦參堿的平均轉(zhuǎn)移率提高18.6%。因此，改進后的工藝方法及參數(shù)均能提高水提、醇沉工藝的效率。

6 討論

6.1提取方法的優(yōu)化 本實驗改進了現(xiàn)有的檢測方法，采用液-液自動萃取設(shè)備，提高檢測結(jié)果的穩(wěn)定性，減少個體差異間的操作誤差，使其結(jié)果更具代表性和準確性。

6.2提取次數(shù)的考察 用氯仿進行提取，每次20 mL，分別提取2，3，4和5次，進行考察，結(jié)果表明，提取4次樣品中的苦參堿就可完全提取，故選擇提取4次。

6.3生產(chǎn)工藝的優(yōu)化 潔身洗液提取工藝采取噴霧化[21-22]提取，大大提高了苦參堿和氧化苦參堿的轉(zhuǎn)移率。霧化提取為連續(xù)性生產(chǎn)，每小時藥材提取量可達1噸以上，與普通回流提取相比，效率提高數(shù)十倍；從節(jié)約提取溶媒的成本及時間的成本方面有了很大的改進。噴霧提取為常溫提取，對熱敏性物質(zhì)具有很好的保護作用，可大幅提高提取物中目標成分的含量，有效成分回收率達90%以上；從節(jié)能環(huán)保方面考慮，霧化提取為常溫提取，提取過程無需加熱或少量加熱，可大幅降低熱能的使用，節(jié)約能耗，利于環(huán)保。通過對醇沉工藝參數(shù)的改進，以目標成分的轉(zhuǎn)移率和固體去除率作為考察指標。通過不斷的實驗摸索，為今后產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的改進提供參考依據(jù)。