酶標(biāo)儀檢測技術(shù)應(yīng)用的研究進(jìn)展

楊敬金 天津市靜海區(qū)疾病預(yù)防控制中心 （天津 301600）

內(nèi)容提要： 酶標(biāo)儀誕生于上個世紀(jì)五十年代，基于其良好的檢測性能快速被應(yīng)用于各個行業(yè)，其中在生物醫(yī)藥檢測方面得到了廣泛應(yīng)用。酶標(biāo)儀檢測基本原理以及主要構(gòu)造與分光光度計或者變相光電比色計類似，具有較高的檢測精度，同時能夠?qū)ε看郎y樣品進(jìn)行檢測，大大提高了檢測工作效率。因此酶標(biāo)儀檢測技術(shù)受到了人們越來越多的關(guān)注，近些年很多專家學(xué)者在將其應(yīng)用于各個領(lǐng)域的檢測中，取得了較為理想的檢測的效果。本文對近些年關(guān)于酶標(biāo)儀檢測技術(shù)應(yīng)用的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，以期為實際工作中酶標(biāo)儀的應(yīng)用提供借鑒。

酶標(biāo)儀的運行原理以及主要構(gòu)造與分光光度計或者變相光電比色計類似，光源發(fā)的光線經(jīng)過單色器或者濾光片后變成單色光，通過微孔板照射到待測標(biāo)本上，部分光線被待測標(biāo)本吸收，其他光線照射到光電檢測器上，基于透光信號不同的強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成不同的電信號[1-2]。由電腦對電信號進(jìn)行處理分析，通過顯示器輸出計算結(jié)果。傳統(tǒng)酶標(biāo)儀檢測微孔板主要采用手工移動的方式，隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，目前酶標(biāo)儀可以在電腦的控制下實現(xiàn)自動檢測，微孔板X方向和Y方向的移動完全由電路控制機(jī)械驅(qū)動實現(xiàn)，大大提高了酶標(biāo)儀的自動化程度[3]。

1.酶標(biāo)儀比色法在血清三酰甘油和總膽固醇檢測中的應(yīng)用

血清三酰甘油和總膽固醇檢測方法整體上可以分為色譜法、化學(xué)法和酶法。化學(xué)法相對來說技術(shù)含量高，但是由于操作復(fù)雜繁瑣，對儀器要求高，難以廣泛推廣應(yīng)用[4]。色譜法在參考物質(zhì)準(zhǔn)確制備方面具有很高的應(yīng)用價值，但是由于樣品處理復(fù)雜且費用昂貴，限制了其進(jìn)一步普及[5]。目前基本上所有的血清三酰甘油和總膽固醇檢測均采用酶法，其優(yōu)點在于簡單方便、具有高準(zhǔn)確度和強(qiáng)特異性。酶標(biāo)儀比色法檢測又可以細(xì)分為手工法、半自動法以及全自動法，相對來說手工檢測需要大量的試劑，檢測成本較高；半自動法和自動法對儀器要求較高，基層醫(yī)院無法普及[6]。相關(guān)研究表明酶標(biāo)儀比色法檢測血清三酰甘油和總膽固醇的精度與全自動生化分析儀檢測精度基本一致，均在CLIA'88推薦允許范圍之內(nèi)[7]。

2.酶標(biāo)儀在細(xì)菌溶液濃度檢測中的應(yīng)用

細(xì)菌溶液濃度的檢測對于微生物發(fā)酵過程中控制工藝具有重要作用。傳統(tǒng)的細(xì)菌溶液濃度檢測方法比如比濁法、血球計數(shù)板法以及平板計數(shù)法等工作量重，且誤差精度較低，難以達(dá)到實時檢測的要求[8]。分光光度法檢測細(xì)菌溶液濃度具有操作簡單方便、精度高等特點，目前在實際工作中得到了普遍應(yīng)用，但是該方法也存在操作繁瑣，耗時長等問題[9]。酶標(biāo)儀檢測細(xì)菌溶液濃度的原理與分光光度法基本一致，同樣具有檢測操作簡單方便、精度高的優(yōu)點，同時該方法可以批量操作，大大提高了檢測效率。相關(guān)研究分析了大腸桿菌發(fā)酵過程中酶標(biāo)儀和分光光度法檢測菌液濃度的效果，結(jié)果顯示兩種方法具有同樣的檢測精度，但是酶標(biāo)儀方法可以一次處理多個樣本，有效降低了工作量，提高了工作效率[10]。

3.酶標(biāo)儀在食用菌多糖含量檢測中的應(yīng)用

目前行業(yè)內(nèi)關(guān)于食用菌中多糖含量的測量主要采用分光光度計，該方法具有較高的精度。酶標(biāo)儀檢測食用菌多糖含量的原理與分光光度計基本一致，具有同樣高的精度，同時具有更好的線性范圍和穩(wěn)定性[11]。除此之外，相比分光光度計方法，酶標(biāo)儀檢測方法操作更加簡單方便，有效降低了繁瑣的比色皿更換和清洗工作[12]。一般來說酶標(biāo)儀檢測可以在1min內(nèi)檢測十個待測樣品，因此比分光光度計檢測具有更高的效率。

4.酶標(biāo)儀三波長比色法在大豆總皂甙檢測中的應(yīng)用

利用水飽和正丁醇對豆粕的乙醇提取物進(jìn)行萃取純化，獲得大豆總皂甙，然后對大豆總皂甙采用香草醛－高氯酸體系進(jìn)行顯色，再利用酶標(biāo)儀三波長比色法對吸光值進(jìn)行測量和校正，進(jìn)而形成了酶標(biāo)儀三波長比色法大豆總皂甙檢測方法[13]。采用酶標(biāo)儀三波長比色法在大豆總皂甙檢測方法可以有效克服皂甙顯色反應(yīng)不穩(wěn)定以及OD值隨時間降低的問題，消除干擾物質(zhì)以及本底漂移對測量結(jié)果的影響，有效提高了測量精度。

5.酶聯(lián)免疫吸附法在梅毒檢驗中的應(yīng)用

酶聯(lián)免疫吸附法目前已經(jīng)在梅毒檢驗中開始推廣應(yīng)用，并取得了較好的效果。梁服泉等選取500例梅毒標(biāo)本作為研究對象，分別采用酶聯(lián)免疫吸附法和甲苯胺紅不加熱血清試驗進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示酶聯(lián)免疫吸附法檢測陽性率要明顯高于甲苯胺紅不加熱血清試驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），同時酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)果的敏感性、特異性、陰性預(yù)測值以及陽性預(yù)測值均明顯高于甲苯胺紅不加熱血清試驗，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）[14]。此外，酶聯(lián)免疫吸附法在梅毒檢驗中適用于對大樣本數(shù)據(jù)的篩查。

6.酶聯(lián)免疫吸附試驗在丙型肝炎病毒抗體檢測中的應(yīng)用

目前我國抗丙型肝炎病毒檢測試劑主要采用酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒，試劑盒的質(zhì)量直接影響丙型肝炎病毒的檢出率以及輸血安全。隨著酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒的不斷發(fā)展，目前應(yīng)用的第三代產(chǎn)品具有較高的檢測靈敏度和特異性。相關(guān)研究表明酶聯(lián)免疫吸附試驗在丙型肝炎病毒抗體檢測中的陽性檢出率要明顯優(yōu)于膠體金快速吸附法[15]。

7.結(jié)束語

基于以上分析，酶標(biāo)儀目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于血清三酰甘油和總膽固醇、細(xì)菌溶液濃度、食用菌多糖含量、大豆總皂甙、梅毒以及丙型肝炎病毒抗體檢測中，具有良好的應(yīng)用效果。相信隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，酶標(biāo)儀將會在更多領(lǐng)域檢測中發(fā)揮重要作用。