MTHFR基因多態(tài)性與老年慢性腎衰竭的相關(guān)性

余波 張韶英 聶斌 管斯斯

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院綜合一科，湖北 武漢 430012)

慢性腎衰竭(CRF)患者常伴有維生素缺乏和高同型半胱氨酸(Hcy)血癥(HHcy)。CRF患者，尤其是行血液透析和腹膜透析治療的患者易發(fā)生葉酸缺乏〔1〕。葉酸與神經(jīng)精神疾病、出生缺陷、腫瘤等密切相關(guān)，特別是近年來(lái)葉酸缺乏被證實(shí)與CRF患者動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管疾病的發(fā)生相關(guān)〔2〕。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是葉酸代謝途徑的關(guān)鍵酶，MTHFR基因突變可顯著降低其活性，導(dǎo)致蛋氨酸循環(huán)障礙，Hcy水平上升，發(fā)生HHcy〔3〕。HHcy是冠心病、腦血管和周?chē)芗膊“l(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此MTHFR基因突變是CRF患者發(fā)生心血管疾病的危險(xiǎn)因素〔4〕。本研究旨在探討MTHFR基因突變對(duì)武漢市老年CRF人群Hcy的影響及葉酸補(bǔ)充治療的作用。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院2015年2月至2017年2月收治的268例CRF患者為CRF組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)慢性腎衰竭治療指南中有關(guān)尿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)；尿毒癥期CKD 3～4期；年齡≥60歲；知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重肝疾病、全身性感染、腫瘤者；近3個(gè)月內(nèi)服用過(guò)維生素B12和葉酸者。CRF組男172例，女96例；年齡60～88〔平均(69.5±6.5)〕歲；透析時(shí)間12～76〔平均(52.6±15.9)〕個(gè)月；原發(fā)?。貉和肝瞿I病122例，慢性腎小球腎炎62例，慢性間質(zhì)性腎炎38例，高血壓腎小球動(dòng)脈硬化癥20例，梗阻性腎病20例，多囊腎病6例。另外選取同期健康體檢人群250例為對(duì)照組，男166例，女84例；年齡60～85〔平均(70.2±7.3)〕歲。兩組性別、年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1基因多態(tài)性檢測(cè) 采集所有受檢者2 ml靜脈血，EDTA抗凝，全血DNA提取嚴(yán)格按試劑盒(北京諾博萊德科技有限公司)說(shuō)明書(shū)操作，并進(jìn)行DNA濃度測(cè)定。上PCR儀器(上海百傲Bio-Rad T100型)檢測(cè)，PCR擴(kuò)增條件：50℃ 5 min；94℃ 5 min；94℃ 25 s，56℃ 25 s，72℃ 25 s，35個(gè)循環(huán)；72℃ 5 min。MTHFR 677C/T基因雜交過(guò)程嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，結(jié)束后采用芯片識(shí)讀儀(上海百傲科技有限公司BE-2.0型)對(duì)雜交結(jié)果進(jìn)行掃描判定。

1.2.2治療方法 CRF組每日口服葉酸(常州制藥廠(chǎng)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32023302，規(guī)格：5 mg×100片)5 mg/d，維生素B6(廣東恒健制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44020622，規(guī)格：10 mg×1 000片)10 mg/d，維生素B12(上海信誼九福藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31022370，規(guī)格：25 μg×100片)，50 μg/d。連續(xù)服用6個(gè)月。

1.3觀(guān)察指標(biāo) 治療前后，采集患者靜脈血2 ml，采用免疫熒光偏振法檢測(cè)Hcy水平，試劑盒為上?；鈱?shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品。采用去蛋白終點(diǎn)比色法檢測(cè)肌酐(Scr)，試劑盒為北京雷根生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，根據(jù)以下公式計(jì)算eGFR，eGFR(ml·min-1·1.73 m-2)=175×(Scr)-1.154×(年齡)-0.203×(0.742女性)。記錄治療期間心血管事件發(fā)生情況，心血管事件主要指心肌梗死、心律失常、心源性猝死、心絞痛和心力衰竭。

1.4統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS18.0軟件行χ2及t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組MTHFR基因677C/T多態(tài)性比較 CRF組和對(duì)照組MTHFR基因677C/T多態(tài)性基因型分布均處于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，所觀(guān)察到的基因型頻數(shù)與預(yù)期的基因型頻數(shù)相符合。兩組CC、CT和TT型基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CRF組T等位基因頻率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組MTHFR基因677C/T多態(tài)性多態(tài)性基因型比較及Hardy-Weinberg平衡分析〔n(%)〕

與對(duì)照組比較：1)P<0.05

2.2不同基因型患者治療結(jié)果比較 治療前、后，MTHFR基因TT型血清Hcy水平均顯著高于CC、CT型(均P<0.05)，eGFR均顯著低于CC、CT型(均P<0.05)；治療前后血清Hcy水平和eGFR差值均顯著低于CC、CT型CRF患者(均P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3不同基因型患者心血管事件發(fā)生率比較 MTHFR基因TT型心絞痛、心肌梗死、心力衰竭和總體心血管事件發(fā)生率顯著高于CC、CT型(均P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 MTHFR基因677C/T CC、CT和TT型CRF患者治療結(jié)果比較

與TT型相比:1)P<0.05，下表同

表3 MTHFR基因677C/T CC、CT和TT型心血管事件發(fā)生情況比較〔n(%)〕

3 討 論

MTHFR基因全長(zhǎng)17 kb，包含11個(gè)外顯子，位于人類(lèi)1號(hào)染色體1p36.3位置，存在 29種不同位點(diǎn)的基因突變，其中以677C/T位點(diǎn)突變最為常見(jiàn)，即第677位核苷酸 C至T(丙氨酸至纈氨酸)突變〔5，6〕。MTHFR基因是葉酸和Hcy代謝途徑中的關(guān)鍵酶，葉酸吸收進(jìn)入人體經(jīng)MTHFR還原和轉(zhuǎn)甲基化形成5-甲基四氫葉酸，這是葉酸在血清中的主要存在形式，當(dāng)MTHFR 基因C677C/T位點(diǎn)突變可導(dǎo)致其耐熱性和活性下降，導(dǎo)致血清Hcy水平上升〔7，8〕。HHcy不但被證實(shí)是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，Hcy水平上升可導(dǎo)致腎功能下降，Hcy是CRF的重要致病因素之一〔2，9〕。

本研究表明MTHFR T等位基因可能是武漢市老年人群發(fā)生CRF的一個(gè)易感基因。李秀季等〔10〕報(bào)道稱(chēng)，原發(fā)性高血壓腎衰竭患者M(jìn)THFR T等位基因頻率明顯高于健康人群和原發(fā)性高血壓腎功能正?；颊?，認(rèn)為MTHFR T等位基因是我國(guó)北方漢族人原發(fā)性高血壓患者發(fā)生腎衰竭的一個(gè)易感基因。有國(guó)外學(xué)者也證實(shí)，MTHFR T等位基因是原發(fā)性高血壓患者動(dòng)脈硬化性器官損傷的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔11〕。蘭瑩瑩〔12〕報(bào)道，MTHFR 基因C677 C/T多態(tài)性對(duì)原發(fā)性高血壓患者血清葉酸和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平的關(guān)聯(lián)性存在交互作用，TT基因型人群中的葉酸和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平相關(guān)性顯著低于MTHFR 基因CC 基因型。

Hcy是由蛋氨酸代謝生成的一種含硫氨基酸，可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和血栓性疾病的發(fā)生。在Hcy復(fù)雜的轉(zhuǎn)化過(guò)程中，葉酸、維生素B6和維生素B12發(fā)揮重要作用，可降低血清Hcy水平〔13，14〕。本研究結(jié)果表明MTHFR T等位基因可能是導(dǎo)致血清Hcy水平上升的易感基因，MTHFR基因TT型CRF患者腎功能損害更為嚴(yán)重。其主要機(jī)制可能是：MTHFR基因TT型導(dǎo)致Hcy水平上升明顯，高血清Hcy損害腎臟，并最終影響腎臟功能〔15，16〕。經(jīng)葉酸補(bǔ)充治療后，MTHFR基因TT型CRF患者治療效果較差。

葉酸不但能降低血清Hcy水平，還能拮抗其毒性作用〔17〕。本研究結(jié)果表明MTHFR基因TT型更易發(fā)生心血管事件。研究〔18，19〕顯示，補(bǔ)充葉酸能顯著降低終末期腎病患者發(fā)生心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，本研究也支持補(bǔ)充葉酸能有助于降低CRF心血事件發(fā)生率。

綜上，MTHFR T等位基因可能是武漢市老年人群發(fā)生CRF的一個(gè)易感基因，MTHFR基因TT型患者腎功能更差，葉酸補(bǔ)充治療效果不佳。因此，臨床上應(yīng)對(duì)CRF患者推廣MTHFR基因多態(tài)性的篩查，從而有助于指導(dǎo)臨床治療。