潰瘍性結(jié)腸炎中真核細(xì)胞翻譯起始因子A1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)及意義

廖如奕 姚萍 張艷

(新疆醫(yī)科大學(xué) 1第一附屬醫(yī)院消化科，新疆 烏魯木齊 830054；2國(guó)際教育學(xué)院)

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是與血管生成相關(guān)的蛋白，在潰瘍性結(jié)腸炎中表達(dá)升高，可以激活黏膜間質(zhì)的內(nèi)皮細(xì)胞的增殖〔1〕。真核細(xì)胞翻譯起始因子(EIF)4A1是EIF家族中的重要成員，其不僅與炎性反應(yīng)相關(guān)〔2〕，還對(duì)活化血管生成因子有一定作用〔3,4〕，并影響間質(zhì)的血管新生。本實(shí)驗(yàn)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎患者血清和組織中的EIF4A1和VEGF的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，分析其相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1臨床材料 以93例潰瘍性結(jié)腸炎患者作為觀察組，留取患者的空腹靜脈血(觀察組1)及腸鏡咬檢組織(觀察組2)。經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者均由臨床病史、內(nèi)鏡及病理分析后確診，且患者或家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①腹部手術(shù)史；②有惡性腫瘤病史?；颊吣挲g32～85歲，平均46.3歲，其中男49例，女44例。選擇25例體檢證實(shí)為無明顯器質(zhì)性病變的成人血清標(biāo)本作為對(duì)照組1，年齡34～79歲，平均44.9歲，其中男13例，女12例。選擇因非腫瘤性腸梗阻切除的切緣正常的結(jié)腸黏膜組織25例作為對(duì)照組2，年齡39～78歲，平均53.2歲，其中男14例，女11例。

1.2血清中EIF4A1和VEGF表達(dá)的檢測(cè) 觀察組1患者于確診后抽取清晨空腹靜脈血3 ml，對(duì)照組1常規(guī)抽取空腹靜脈血3 ml，應(yīng)用3 000 r/min 離心10 min后，分離并留取血清樣本，-20℃冰箱中保存。樣本均于2個(gè)月內(nèi)集中檢測(cè)。EIF4A1和VEGF的檢測(cè)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，嚴(yán)格按說明書操作，并由同一檢驗(yàn)師完成，做好質(zhì)控工作。

1.3組織中EIF4A1和VEGF表達(dá)的檢測(cè) 鼠抗人EIF4A1試劑購(gòu)自蘇州睿瀛生物公司，VEGF試劑購(gòu)自北京中杉金橋生物公司。腸鏡咬檢的組織經(jīng)取材、固定、脫水、石蠟包埋后常規(guī)切取4 μm的膠片。EIF4A1和VEGF均行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇EIF4A1(1∶100)和VEGF(1∶300)染色效果最好的濃度用于實(shí)驗(yàn)中。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化En Vision法，嚴(yán)格按說明書步驟進(jìn)行操作，均由同一技師完成，做好質(zhì)控工作，減少誤差。

1.4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化切片的判讀由病理科兩位副主任醫(yī)師完成。EIF4A1和VEGF的陽性部位是上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)(在周圍間質(zhì)中可見到散在的弱陽性染色的間質(zhì)細(xì)胞)，以著色強(qiáng)度和陽性率綜合評(píng)定。著色強(qiáng)度：未見著色為0分；弱為1分，中為2分，強(qiáng)為3分。陽性判定：上皮細(xì)胞集中分布區(qū)(400倍)計(jì)數(shù)，共5個(gè)視野，取平均值，以<5%為0分，5～10%(不包括10%)為1分，以10%～30%(不包括30%)為2分，以30%～50%(不包括50%)為3分，以≥50%為4分。共觀察三個(gè)視野，二者相加為最終評(píng)分，以≤2分為陰性，以>2分為陽性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SAS6.12軟件行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1觀察組1和對(duì)照組1血清中EIF4A1和VEGF的表達(dá)比較 觀察組1和對(duì)照組1血清中EIF4A1的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，VEGF的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2觀察組2和對(duì)照組2中EIF4A1和VEGF表達(dá)陽性率的比較 觀察組2與對(duì)照組2的EIF4A1〔35例(37.6%)vs 2例(8.0%)〕和VEGF表達(dá)的陽性率〔41例(44.1%)vs 1例(4.0%)〕差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。

2.3觀察組1不同臨床特征分組患者血清中EIF4A1和VEGF表達(dá)的比較 觀察組1血清中EIF4A1和VEGF的表達(dá)量與病變時(shí)間、有無并發(fā)癥密切相關(guān)，VEGF的表達(dá)量與是否復(fù)發(fā)密切相關(guān)(P<0.05,P<0.01)。見表2。

表1 觀察組1和對(duì)照組1血清中EIF4A1和VEGF的表達(dá)比較

表2 觀察組1不同臨床特征分組患者血清中EIF4A1和VEGF表達(dá)的比較

2.4觀察組2不同臨床特征分組患者組織中EIF4A1和VEGF表達(dá)陽性率的比較 觀察組2中EIF4A1和VEGF表達(dá)陽性率與病變時(shí)間、有無并發(fā)癥及是否復(fù)發(fā)密切相關(guān)(P<0.05,P<0.01)，見表3。

表3 觀察組2不同臨床特征分組患者組織中EIF4A1和VEGF表達(dá)陽性率的比較〔n)%〕

2.5EIF4A1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組1中EIF4A1和VEGF的表達(dá)無相關(guān)性(P>0.05)，觀察組2中EIF4A1和VEGF之間呈正相關(guān)(r=0.48，P=0.0410)。

3 討 論

潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生時(shí)較多炎性相關(guān)介質(zhì)參與病變，在炎性病變的活動(dòng)期，有活性的炎性因子表達(dá)更明顯。VEGF在病變中表達(dá)升高，可以直接刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂繁殖，血管內(nèi)皮間的空隙增大，血管通透性增加，同時(shí)纖維蛋白原滲出，可以為血管性結(jié)構(gòu)提供網(wǎng)架的支撐，促進(jìn)血管新生〔5〕。潰瘍性病變的活動(dòng)期，缺氧表現(xiàn)更明顯，此時(shí)缺氧誘導(dǎo)因子大量生成。VEGF也是缺氧相關(guān)的因子，因此其分泌量明顯增加。無論是急性期還是活動(dòng)期，病變時(shí)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)較為明顯。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與蛋白質(zhì)的合成有關(guān)，對(duì)外界環(huán)境的改變十分敏感〔6〕。當(dāng)體內(nèi)發(fā)生明顯的炎性病變時(shí)，間質(zhì)的血液供應(yīng)需求量明顯增加，且病變的耗氧量增加，這種缺氧環(huán)境極易引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(PERK)解離后發(fā)生自身二聚體磷酸化而活化，進(jìn)一步使得下游信號(hào)通路的EIF4A1活化，引起細(xì)胞的增生和炎性病變〔7,8〕。EIF4A1具有RNA依賴的三磷酸腺苷(ATP)酶活性，也具有解旋酶活性，可以解開mRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)，引起小核糖體進(jìn)行起始密碼子掃描，啟動(dòng)翻譯。

本實(shí)驗(yàn)觀察組組織和血清中EIF4A1的表達(dá)不一致。EIF4A1主要在病變的上皮細(xì)胞中產(chǎn)生，尤其是病變的活動(dòng)期，EIF4A1可能一部分釋放到組織間隙及血清中，但是需要時(shí)間，同時(shí)也與分泌方式有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)在病變超過2年患者和有復(fù)發(fā)的患者血清中發(fā)現(xiàn)EIF4A1的表達(dá)明顯升高，且與組織學(xué)中的表達(dá)相一致，因此EIF4A1在血清中表達(dá)可能與病變持續(xù)時(shí)間和病變程度的積累有關(guān)，也說明血清中EIF4A1表達(dá)升高可能是病變的遲發(fā)事件，也使EIF4A1在病變的作用變得更加復(fù)雜。結(jié)果顯示血清和組織中VEGF的表達(dá)有較明顯的一致性，這可能與VEGF的旁分泌方式有關(guān)，也提示VEGF在組織中產(chǎn)生后，能較早地進(jìn)入血清中，VEGF在病變的發(fā)生和發(fā)展中均起促進(jìn)作用。組織學(xué)中EIF4A1和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)性，提示二者具有明顯的正向協(xié)同作用，即EIF4A1可能作為上游基因，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激形成大量表達(dá)后〔9,10〕，引起VEGF的表達(dá)升高，促進(jìn)間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生，在血液的沖擊下，幼稚的血管內(nèi)皮細(xì)胞形成管腔，演變?yōu)槌墒斓拿?xì)血管并具有血管的功能〔11〕。這與潰瘍性結(jié)腸炎病變的免疫性及炎癥反應(yīng)的實(shí)質(zhì)也有關(guān)聯(lián)，炎癥反應(yīng)需要大量的營(yíng)養(yǎng)和氧，而重度炎癥抑制血液供應(yīng)，使局部表達(dá)出明顯的缺血狀態(tài)，營(yíng)養(yǎng)和氧均不足，間質(zhì)微血管灌注更不足，尤其是伴有微血栓形成后，缺血的表達(dá)更明顯，此時(shí)需要促進(jìn)血管生成的細(xì)胞因子參與進(jìn)來，改善缺氧環(huán)境。eIF4A1是促進(jìn)血管生成因子分泌的蛋白之一，能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生，供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)〔12,13〕，在一定程度上改善缺氧同時(shí)，對(duì)病變的進(jìn)展也有調(diào)控作用〔14〕。