陳嘉惠,陳沁,鈕冰
(上海大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,上海201900)
乳品在人們的膳食結(jié)構(gòu)中具有十分重要的地位,乳品富含人體所需的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)[1]。乳品營養(yǎng)豐富,同時也是微生物的良好培養(yǎng)基,微生物污染引起的乳品安全事件頻繁發(fā)生,2002年美國FDA在乳品巨頭企業(yè)所生產(chǎn)的嬰幼兒配方奶粉中,檢測出阪崎腸桿菌;2008年法國寶怡樂公司生產(chǎn)的一批嬰幼兒奶粉被召回,這一批次產(chǎn)品可能受到沙門氏菌污染;2011年我國國家質(zhì)檢總局在蒙牛公司生產(chǎn)的一批純牛奶中檢測出黃曲霉毒素M 1含量超標(biāo)。乳品安全意義重大,它對消費者的健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響,還與中國乳品、食品行業(yè),甚至國際形象息息相關(guān)[2]。因此,完善乳品中有害微生物的檢測技術(shù),對于提高乳品的質(zhì)量安全和確保消費者的健康問題具有重要的意義。
乳品中常見腐敗型微生物可分為細(xì)菌和真菌兩大類,細(xì)菌又可分為耐熱菌與嗜冷菌。乳品中污染能力較大的耐熱菌為部分異型乳酸菌,這些異型乳酸菌具有一定的抗熱性,60℃下可存活20分鐘,當(dāng)其出現(xiàn)在密閉條件下的原料乳中時,會大量增殖導(dǎo)致原料乳的酸敗,這種污染后的原料乳不能用來生產(chǎn)超高溫瞬時滅菌乳(Ultra High Temperature treated,UHT),而發(fā)酵乳被這些異性乳酸菌污染時,會產(chǎn)生一些不良的風(fēng)味物質(zhì),導(dǎo)致乳品變質(zhì)而不能食用;乳品中常見的耐熱菌還有芽孢桿菌屬,如枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、地衣形芽孢桿菌等,芽孢桿菌屬能分解生乳中的蛋白質(zhì)和脂肪,不僅會產(chǎn)生腐敗味,還會導(dǎo)致鮮奶產(chǎn)氣。嗜冷菌同樣是乳品中的腐敗菌,國際乳品聯(lián)合會(International Dairy Federation,IDF)提出,凡是在7℃以下能生長的細(xì)菌為低溫菌,而在20℃以下能繁殖的細(xì)菌為嗜冷菌。乳品中的嗜冷菌有:假單胞菌屬、醋酸桿菌屬、明串珠菌屬、氣單胞菌屬等[3],以假單胞菌屬中的腐敗假單胞菌為例,腐敗假單胞菌可從水和土壤中分離得到,是一種兼性厭氧菌,其代謝產(chǎn)生的脂肪酶和蛋白酶是最耐熱的,會導(dǎo)致超高溫瞬時滅菌乳(UHT)在貯存期內(nèi)產(chǎn)生結(jié)皮、變味、脂肪上浮等現(xiàn)象。乳品中另一大類腐敗型微生物為部分真菌,食品被其污染后會腐敗變質(zhì),產(chǎn)生大量的真菌毒素,誤食可導(dǎo)致中毒。黃曲霉是這類真菌的典型代表之一,其代謝產(chǎn)物是黃曲霉毒素,是真菌毒素中較常見的毒素,可導(dǎo)致DNA損傷,并具有遺傳性,其中黃曲霉素M 1常存在于乳制品中,毒性較強[4]。1993年世界衛(wèi)生組織(WHO)和國際癌癥研究所將黃曲霉素確定為一級人類致癌物。
致病型微生物的主要類型有金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌和阪崎腸桿菌等[5]。金黃色葡萄球菌是一種廣泛存在于自然界的致病菌,革蘭氏陽性菌的代表,其污染食物的主要原因是能產(chǎn)生對熱穩(wěn)定的腸毒素,可引起惡心、腹瀉嚴(yán)重時可導(dǎo)致呼吸困難和休克等癥狀;大腸桿菌是人和部分動物腸道內(nèi)最主要的一種菌,部分菌株具有致病性,是重要的食源性致病菌,其中毒力較強的是腸出血性大腸桿菌,食用其污染的乳品后,會導(dǎo)致嚴(yán)重的腹痛與腹瀉,重者可能引起便血與高熱,同時大腸桿菌是乳品國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定中主要的檢測菌群;沙門氏菌是重要的食源性致病菌之一,分布較為廣泛,大多數(shù)菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素,所以對人體和其他動物有致病性,受其感染的人和動物會出現(xiàn)傷寒、副傷寒等病癥,一旦進入血液組織,則會導(dǎo)致系統(tǒng)性炎癥,甚至死亡[6];阪崎腸桿菌屬于腸桿菌科,主要寄生在人和動物的腸道內(nèi),嬰幼兒食入阪崎腸桿菌污染的乳粉,可能導(dǎo)致腦膜炎、敗血癥及新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎等癥狀[7]。我國2010新修訂的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒配方食品》GB 10765-2010,已將阪崎腸桿菌列入微生物限量控制指標(biāo)[8]。致病型微生物主要通過奶牛進入乳制品中,加工過程中消毒或殺菌不徹底會導(dǎo)致污染的擴散,從而引起乳及乳制品變質(zhì),食用后會引起中毒等一系列癥狀。
我國比較傳統(tǒng)的微生物檢測方法主要包括標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)法(SPC)和顯微鏡直接觀察法(DMC)兩種方法。它的原理是對活菌的總數(shù)進行測定,我國現(xiàn)行國標(biāo)GB/T 4789.2—2016規(guī)定采用以上兩種方法對菌落總數(shù)進行測定[9]。這兩種方法的優(yōu)點是設(shè)備簡單、成本低廉,因此受到了社會各大企業(yè)和質(zhì)量監(jiān)督檢測部門的普遍歡迎。缺點是操作煩瑣、檢測周期長,且靈敏度相對較低,無法檢測乳品中全部的微生物,因此檢測效果較差[10]。在傳統(tǒng)計數(shù)法基礎(chǔ)上,Margot[11]等人開發(fā)了一種新型顯色培養(yǎng)方法,用以快速檢測沙門氏菌,結(jié)果顯示該方法對沙門氏菌的特異性可以達到100%,可用于乳品中沙門氏菌的檢測,與標(biāo)準(zhǔn)方法比縮短了檢測時間。除此之外,Teramura[12]等人對市售的四種顯色培養(yǎng)基進行比較,以建立檢測乳粉中阪崎腸桿菌的標(biāo)準(zhǔn)方法。顯色培養(yǎng)方法與傳統(tǒng)計數(shù)法相比,提高了靈敏度和檢測效率,常用于乳品中沙門氏菌、阪崎腸桿菌和李斯特氏菌的檢測。
2.2.1 ELISA法
酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immuno-Sorbent Assay,ELISA)是一種將抗原、抗體免疫反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性有機結(jié)合起來的方法。Portanti[13]等人根據(jù)單克隆抗體原理建立的一種新型捕獲ELISA法用于識別食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌,其中包括乳制品的檢測,實驗結(jié)果表明該法對李斯特氏菌屬具有100%的特異性,與國際組織的標(biāo)準(zhǔn)化相比,具有顯著的一致性。Yazdankhah[14]等人將ELISA方法與免疫磁性分離技術(shù)聯(lián)用檢測牛奶中的金黃色葡萄球菌,最低檢測限為1×105CFU/mL,檢測時間為3小時,這種聯(lián)用技術(shù)極大的提高了檢測效率。ELISA方法目前已被開發(fā)成商品化試劑盒,用于乳品安全檢測,其優(yōu)點是靈敏度很高,所得結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)法相似、操作簡便快捷以及受樣品干擾小,適用于食品中微生物和生物毒素的快速檢測。但也存在著一些缺陷,比如檢測過程中樣品中若存在結(jié)構(gòu)類似的化合物則可能發(fā)生交叉反應(yīng),檢測分子量較小或很不穩(wěn)定的化合物時有一定的困難,隨著酶聯(lián)免疫技術(shù)的不斷完善和發(fā)展,該技術(shù)將會得到進一步的發(fā)展。
2.2.2 免疫熒光技術(shù)
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence)也稱熒光抗體技術(shù),是將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來鑒定和檢測細(xì)胞或組織切片中相應(yīng)抗原(抗體)的方法。該技術(shù)是由Nerurkar等[15]在1984年建立的,可用來檢測沙門氏菌、李斯特菌、葡萄球菌毒素、E·Coli O 157。Song[16]等人提供了一種使用無標(biāo)記免疫熒光條傳感器檢測大腸桿菌O 157∶H 7的快速簡單方法,將熒光素異硫氰酸酯(FITC)加入到樣品培養(yǎng)基中以制備用于無標(biāo)記條帶傳感器的熒光探針,并保持與針對大腸桿菌O 157∶H 7的單克隆抗體的良好親和力,當(dāng)樣品中存在大腸桿菌O 157∶H 7時,富集激發(fā)后會發(fā)出黃綠色熒光,當(dāng)樣品溶液遷移到條帶的末端時,熒光細(xì)菌與捕獲抗體結(jié)合,從而在測試區(qū)域上形成可見的黃綠色線,這種方法檢測迅速,可用于現(xiàn)場快速檢測。免疫熒光技術(shù)的主要特點為特異性強、快速簡便、靈敏度高及測試費用低。然而,這種方法在交叉反應(yīng)、假陽性、非特異性染色等問題上仍需要進行改進。
2.2.3 免疫膠體金技術(shù)
免疫膠體金技術(shù)(Immune colloidal gold technique)是一種新型免疫標(biāo)記技術(shù),其原理是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物,結(jié)合抗原抗體反應(yīng),進行定性或半定量的快速檢測。1971年Faulk和Taytord[17]首次將膠體金引入免疫學(xué),用來研究沙門氏菌菌壁細(xì)胞抗原成分。隨著該技術(shù)的發(fā)展,Rong[18]等建立了一種基于多克隆抗體的膠體金試紙條檢測方法,用于檢測金黃色葡萄球菌腸毒素B,該方法在緩沖液中檢測限為1 ng/mL,在牛奶中檢測限為10 ng/mL,靈敏度較高。目前,沙門氏菌抗原、李斯特菌抗原等可用專門的商品化檢測卡進行檢測,此種方法靈敏準(zhǔn)確、快捷迅速、安全簡便且不需任何設(shè)備和儀器,只需制備好試劑盒或測試條即可。與ELISA方法相比,膠體金本身具有顏色,省略了添加顯示液和終止液的步驟,簡化了操作,更適合于野外或現(xiàn)場應(yīng)用。
ATP生物熒光檢測技術(shù)原理是將微生物內(nèi)自由的可溶解的ATP釋放出來,在有熒光素酶等存在條件下與蟲熒光素發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生熒光,通過熒光信號的強弱計算出ATP的含量,推算出樣品中的含菌量。1970年,Sharpe等[19]首次利用ATP生物熒光技術(shù)檢測了牛奶中細(xì)菌含量,隨后這個方法很快應(yīng)用到不同種類的乳品中微生物含量的檢測,如Samkutty等[20]利用ATP生物熒光技術(shù)預(yù)測了原料乳中的總菌數(shù),所得結(jié)果與平板計數(shù)法所得結(jié)果的相關(guān)性約為80%。Cunha等[21]人應(yīng)用ATP生物熒光技術(shù)評價超高溫滅菌乳中微生物的含量,實驗采用三種不同成分的培養(yǎng)基對乳品中微生物進行培養(yǎng),不同培養(yǎng)基的平板計數(shù)結(jié)果與ATP生物熒光技術(shù)結(jié)果皆有顯著相關(guān)性。兩者實驗結(jié)果也證明了ATP生物熒光技術(shù)可用于不同加工方式乳品中微生物含量的檢測。與傳統(tǒng)的檢測技術(shù)相比,ATP熒光檢測技術(shù)的優(yōu)勢是無需進行微生物培養(yǎng),檢測速度快,操作簡便,低端手持型ATP生物熒光檢測儀僅需一人即可完成所有檢測;缺點是低端檢測儀靈敏度較低,效果不太理想;高端檢測儀相關(guān)試劑較貴;檢測過程中受游離ATP、體細(xì)胞以及鹽等成分干擾。
流式細(xì)胞術(shù)的原理是對懸液中的單細(xì)胞或其他生物粒子,通過檢測標(biāo)記的熒光信號,實現(xiàn)細(xì)胞的定量分析和分選。流式細(xì)胞儀由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、分析系統(tǒng)等構(gòu)成設(shè)備的主要部分。Cassoli等[22]使用流式細(xì)胞檢測法和標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)兩種方法對來自于100個農(nóng)場并存儲24,48或72小時后的散裝牛奶進行分析,結(jié)果顯示這兩種方法的相關(guān)性極高并由此建立了一種轉(zhuǎn)換關(guān)系,最后評估了它們之間的轉(zhuǎn)換關(guān)系,不受樣品存儲時間的影響。Ikeda[23]等人將微流控芯片技術(shù)和熒光原位雜交技術(shù)應(yīng)用到流式細(xì)胞檢測法上,用于快速鑒定牛奶中的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。與標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)法相比,流式細(xì)胞檢測法有許多優(yōu)勢,該技術(shù)無需進行樣品的前期制備和培養(yǎng),節(jié)省了大量的時間、人力和物力等,在現(xiàn)代化快速生產(chǎn)要求越來越高的今天,該技術(shù)十分實用。該技術(shù)的弊端是前期投入相對較高,樣品處理以及熒光染料的選擇會影響檢測結(jié)果,且流式細(xì)胞儀價格較高,日常維護費用也相對昂貴,并且對操作人員專業(yè)素養(yǎng)要求相對較高。
2.5.1普通PCR技術(shù)
1983年Millus等[24]發(fā)明了PCR(Polymerase chain reaction)技術(shù),該技術(shù)可以通過特異性地擴增某種微生物的基因片斷而實現(xiàn)快速檢測。馬冬等[25]用大腸桿菌人工污染乳樣品,對污染前后全脂乳和脫脂乳中的大腸桿菌應(yīng)用PCR擴增技術(shù)進行檢測,檢出限分別為104CFU/mL,1 CFU/mL,實驗證實PCR法用于乳品中大腸桿菌檢測的可行性。但是要達到實際應(yīng)用,還應(yīng)對可能存在于乳品中的其他微生物對PCR反應(yīng)特異性的影響進行更深入的研究。Amagliani[26]等人采用基于DNA磁性捕獲的PCR法,檢測了巴氏滅菌全脂乳中的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌,檢測限達到10 CFU/mL,該方法顯示出較高的特異性和靈敏度。與傳統(tǒng)檢測方法相比,PCR技術(shù)最大的特點是快速、準(zhǔn)確,簡便。通常在幾小時內(nèi)便可完成對微生物的測定。但缺點是其在檢測中不能區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞,并且僅限于核酸序列已知的微生物的鑒定,同時其定量能力較差。
2.5.2 多重PCR技術(shù)
多重PCR(multiplex PCR)的原理是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對以上引物,同時擴增出多個核酸片段的PCR反應(yīng),可以對大腸桿菌、沙門氏菌和致病性弧菌等幾種微生物進行同步檢測。Nandi等人[27]使用兩重PCR檢測牛奶中腹瀉性大腸桿菌的2個重要毒素基因,產(chǎn)生志賀毒素的大腸桿菌(STEC)和產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)的stx2和elt基因,多重PCR可快速和有效地檢測牛奶中的STEC和ETEC,證明了多重PCR在乳品微生物檢測上的便利性。劉繼超等人[28]應(yīng)用三重PCR對原料乳中沙門氏菌、無乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌進行了研究,使用該方法檢測的30份乳品樣品中,沙門氏菌檢出率為46.7%,無乳鏈球菌檢測率為53.5%,金黃色葡萄球菌檢測率為50.0%,與國標(biāo)方法的檢測結(jié)果完全一致,檢測結(jié)果驗證了多重PCR方法具有良好的可行性和實用性。多重PCR方法將傳統(tǒng)方法中大量的生化試驗轉(zhuǎn)化為一次性擴增,便于批量檢測,結(jié)合國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),使用多重PCR方法對乳品樣品進行致病微生物初篩,可大大縮短檢測周期,降低檢驗成本,在乳品污染型微生物、致病型微生物及環(huán)境微生物檢測中具有重要作用,具有較好的應(yīng)用前景。但該方法容易出現(xiàn)假陰性的結(jié)果,故應(yīng)用時需要改進樣品處理技術(shù)、去除食品抑制因子干擾,同時與其他技術(shù)整合應(yīng)用。
2.5.3 實時熒光定量PCR技術(shù)
實時熒光定量PCR(Real-time fluomgenetic quantitative PCR)也可應(yīng)用到乳品微生物的檢測中。Graber[29]等采用實時熒光定量PCR成功檢測了患乳房炎奶牛的牛乳中致病菌金黃色葡萄球菌的數(shù)量。Paul[30]等人將該技術(shù)用于檢測生乳中大腸桿菌O157,并且在總測定時間3小時內(nèi)獲得1 CFU/mL的檢測極限。熒光定量PCR技術(shù)的發(fā)明比定性PCR技術(shù)晚出現(xiàn)10年,相對于定性PCR來說,其具備熒光定量重復(fù)性好、穩(wěn)定性能高、特異性強的特點。缺點是容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果且儀器和試劑成本相對較高,當(dāng)然,實時熒光定量PCR技術(shù)的發(fā)展,不能與其他傳統(tǒng)和分子學(xué)方法相脫離,而應(yīng)與它們結(jié)合起來以實現(xiàn)優(yōu)勢互補。有些學(xué)者將多重PCR和實時定量PCR結(jié)合進行相關(guān)檢測,Hyeon[31]等開發(fā)了一種快速靈敏的多重實時PCR檢測方法,用于同時檢測嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌和沙門氏菌,將建立的多重實時PCR系統(tǒng)應(yīng)用于人為污染的嬰幼兒配方奶粉時,沙門氏菌和阪崎腸桿菌的檢測限為103CFU/mL,富集24小時后,可以在約0.1 CFU/mL的初始接種水平檢測沙門氏菌和阪崎腸桿菌。
電化學(xué)生物傳感器是一種由分子識別元件和轉(zhuǎn)換元件組成,以電勢、電流等為特征檢測信號的傳感器。其中,分子識別元件可以是生物體成分或者生物體,而轉(zhuǎn)換元件為電極。Zelada[32]等人將電位測定與核酸適配體結(jié)合在生物傳感器中以檢測半脫脂牛奶中的大腸桿菌,核酸適配體共價結(jié)合單壁碳納米管修飾的電極,與牛奶樣品中的大腸桿菌O 157∶H 7相互作用產(chǎn)生電壓的變化,從而間接地檢測出牛奶中細(xì)菌的含量,快速檢測線性響應(yīng)達到104CFU/mL,響應(yīng)時間為2分鐘。Avila[33]等制備了基于功能化磁珠和金絲網(wǎng)印刷電極的一次性安培型磁電免疫傳感器,用于特異性檢測和定量葡萄球菌蛋白A以及金黃色葡萄球菌,所建立的方法顯示出非常低的檢測限1 CFU/mL,分析時間為2小時,并且對來自牛奶的最常見的食源性病原體具有良好的選擇性。電化學(xué)生物傳感器是生物傳感器中使用最為廣泛的一類傳感器,它優(yōu)點是換能器便宜,受檢測樣品的濁度影響較小,傳感器檢測過程輸出的電信號可直接在電路中轉(zhuǎn)換,降低了儀器的復(fù)雜性,有利于儀器的微型化和集成化,常用于現(xiàn)場快速檢測。當(dāng)然電化學(xué)生物傳感器尚存在一些缺陷,目前傳感器制作的不夠均一,使設(shè)置空白和標(biāo)準(zhǔn)品對照檢測的作用降低,并且其識別元件的壽命、穩(wěn)定性和非特異性結(jié)合方面依舊存在一定的局限性,不能完全實現(xiàn)對乳品等復(fù)雜體系的實時、在線、超靈敏自動化檢測。
基因芯片(Gene chip)技術(shù)通常采用原位合成或顯微打印手段,將數(shù)以萬計的DNA探針固化于支持物表面,得到DNA探針陣列,然后與標(biāo)記的樣品分子進行雜交,通過雜交信號強度來實現(xiàn)對生物樣品的檢測。Jin[34]等人構(gòu)建了基于多重微珠的生物芯片系統(tǒng),針對乳品中較為常見的八種不同致病菌進行同時檢測,將來自乳品微生物的基因片段泵入芯片系統(tǒng)并與特定的寡核苷酸修飾的微珠雜交,由雜交反應(yīng)產(chǎn)生的熒光信號在30分鐘內(nèi)即可獲得,檢測范圍為500-6×103CFU/mL。Chiang[35]等開發(fā)設(shè)計了一種新型塑料基因芯片,用于同時檢測乳品中較常出現(xiàn)的八種葡萄球菌,結(jié)果表明該方法不僅快速、靈敏,而且特異性較高。應(yīng)用基因芯片技術(shù)可以達到高通量、微型化、自動化檢測,相比于傳統(tǒng)單一的檢測方法,生物芯片的優(yōu)勢更加顯著,靈敏度高、特異性強、操作簡便,可同時檢測多種微生物。我國國家生物芯片中心等單位已開發(fā)并生產(chǎn)了用于食源性致病菌檢測、食源性病毒檢測的生物芯片技術(shù)平臺,包括儀器和試劑盒[36]。然而基因芯片檢測技術(shù)仍面臨著一些問題,樣品制備過程復(fù)雜,芯片制作昂貴,檢測結(jié)果不具有標(biāo)準(zhǔn)化等。相信隨著芯片制作及雜交條件的不斷升級換代,基因芯片技術(shù)必將得到更廣闊的發(fā)展空間。
乳品安全問題一直以來都是人們關(guān)注的焦點,乳品受微生物污染的問題日益凸顯,成為威脅乳品質(zhì)量安全的重要原因,乳品微生物檢測技術(shù)能有效的避免和預(yù)防食源性疾病的發(fā)生。乳品中微生物的檢測方法是多種多樣的,且各種方法都有其自身的特點??傮w來說,如傳統(tǒng)檢測方法檢測設(shè)備簡單,成本較低,但實驗操作復(fù)雜,不利于現(xiàn)場檢測;PCR檢測技術(shù)特異性強,靈敏度高,卻易受到樣品影響,出現(xiàn)假陽性、假陰性的結(jié)果;流式細(xì)胞檢測技術(shù)操作簡單、快速,但儀器昂貴,成本較高;基因芯片技術(shù)的興起,從根本上改變了微生物的檢測方法,實現(xiàn)了高通量檢測,卻也存在著樣品制作復(fù)雜、芯片昂貴等問題。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,一些新的微生物檢驗方法和技術(shù)不斷涌現(xiàn),各項檢測技術(shù)來到一個新紀(jì)元,它們的結(jié)合使用、融合發(fā)展成為未來乳品微生物檢測的趨勢。現(xiàn)如今的乳品檢測中,人們對智能化、小型化和便攜式檢測儀器的需求與日俱增,這些小型儀器可實現(xiàn)對乳品的現(xiàn)場檢測,它們的生產(chǎn)和研制成了今后乳品微生物檢測技術(shù)中的另一發(fā)展方向。乳品的質(zhì)量安全與人們的身體健康和生命安全緊密相關(guān),因此需要建立更加高效、靈敏、可靠的微生物檢測技術(shù),也是保證中國乳品安全的前提[37]。