密花角蒿化學成分的研究

王明明， 曹 芳， 李海濤

（延安大學附屬醫(yī)院藥劑科， 陜西 延安716000）

角蒿屬植物大部分分布在喜馬拉雅山區(qū)和我國西南地區(qū)， 有一些品種在中亞、 東亞和內(nèi)蒙古地區(qū)也有分布［1-2］， 被用于治療各種疾病， 如角蒿中藥名為透骨草， 被長期用于治療風濕病和全身疼痛［3-4］。

密花角蒿Incarvillea compacta Maxim. 又稱密生波羅花， 為角蒿屬多年生草本植物， 分布于我國甘肅、 青海、 云南、 西藏地區(qū)海拔2 600 ～4 100 m之間的礫石山坡和灌木草叢中［5］， 是藏藥紅“歐曲”的來源植物之一， 作為一種治療黃疸、 胃疼、 中耳炎及化膿性中耳炎的植物在民間被廣泛應用［6］，但鮮有其化學成分報道。 本實驗通過現(xiàn)代分離技術(shù)和波譜解析方法對密花角蒿化學成分進行初步研究， 從而為該植物的進一步開發(fā)應用提供理論依據(jù)。

1 材料

AVⅢ600 MHz 核磁共振波譜儀 （TMS 為內(nèi)標）、 Bruker micro-Q-Tof 高分辨質(zhì)譜儀 （瑞士Bruker 公司）； 柱層層析硅膠、 高效硅膠GF254薄層板（青島海洋化工廠）； Agilent 1260 HPLC （美國Agilent 公司）； 半制備色譜柱（江蘇漢邦科技有限公司）； 反相Xcharge-C18色譜柱（250 mm×20 mm、250 mm×4.6 mm， 北京華譜新創(chuàng)科技有限責任公司）。 甲醇為色譜純（美國Tedia 公司）； 其他試劑均為分析純。

密花角蒿購于青海省西寧市康樂藥材市場， 經(jīng)中國科學院西北高原生物研究所盧學鋒研究員鑒定為正品。

2 提取分離

10.0 kg 干燥密花角蒿用95% 乙醇提取3 次，每次5 h， 料液比為1 ∶8， 合并提取液， 減壓濃縮， 得浸膏610.0 g， 取400.0 g 加適量水混懸分散， 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 減壓回收萃取劑， 分別得石油醚萃取物90.0 g、 乙酸乙酯萃取物102.0 g、 正丁醇萃取物105.0 g。 取100.0 g乙酸乙酯萃取物加硅膠適量拌樣， 進行硅膠柱層析， 石油醚∶乙酸乙酯（5 ∶1 ～1 ∶1） 梯度洗脫， 得7 個組分Fr.E1 ～E7， E3 經(jīng)硅膠柱用氯仿∶丙酮（20 ∶1～9 ∶1） 梯度洗脫， 得化合物1 （3.5 mg）、 2 （4.3 mg）、 5 （6.2 mg）、 10 （5.4 mg）；E4 經(jīng)硅膠柱用氯仿∶丙酮（15 ∶1 ～3 ∶1） 梯度洗脫， 得化合物6 （2.2 mg）、 9 （4.1 mg）； E5 經(jīng)高效半制備液相色譜反復純化， 得化合物3 （5.6 mg）、 4（5.1 mg）、 7（3.5 mg）、 8（7.2 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合 物1： 無 色 油 狀 液 體。 ESI-MS m／z：293.332 1 ［M ＋H］＋。1H-NMR （600 MHz， CDCl3）δ： 5.37 （6H， m， H-9 ～10， 12 ～13， 15 ～16），3.68 （3H， s， -OCH3）， 2.06 （4H， t， J ＝5.4 Hz， H-8， H-17）， 1.8 （2H， m， H-3）， 1.28 ～1.34 （8H， brs， H-4 ～7）， 0.99 （3H， t， J ＝7.5 Hz， H-18）；13C-NMR （ 150 MHz， CDCl3） δ：174.7 （ C-1）， 132.5 （ C-16）， 130.7 （ C-9），128.7 （C-11）， 128.6 （C-12）， 127.8 （C-14），127.5 （ C-10）， 51.7 （-OCH3）， 34.8 （ C-2），29.8 （C-7）， 29.6 （C-6）， 29.5 （C-5）， 29.5（C-4）， 27.6 （C-8）， 25.6 （C-11）， 25.7 （C-14）， 24.9 （C-3）， 20.9 （C-17）， 14.7 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］ 基本一致， 故鑒定為亞麻酸甲酯。

化合物2： 黃色粉末， ESI-MS m／z： 333.230 7［M＋H］＋。1H-NMR （600 MHz， DMSO-d6） δ： 3.82（6H， s， 3′， 5′-OCH3）， 6.18 （1H， d， J ＝1.2 Hz，H-6）， 6.57 （1H， d， J ＝1.2 Hz， H-8）， 6.93 （1H，s， H-3）， 7.34 （1H， m， H-2′， 6′）， 12.96 （1H， s，5-OH）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ： 181.9（C-4）， 164.3 （C-2）， 164.3 （C-4′）， 163.5 （C-7）， 161.7 （C-9）， 157.7 （C-5）， 148.3 （C-3′，5′）， 139.8 （C-1′）， 120.6 （C-10）， 104.6 （C-2′，6′）， 103.8 （C-3）， 98.7 （C-6）， 94.3 （C-8）， 56.6（3′， 5′-OCH3）. 以上數(shù)據(jù)與文獻［8］ 基本一致，故鑒定為苜蓿素。

化合物3： 白色無定型粉末（甲醇）。 ESI-MS m／z： 243.225 0 ［M ＋H］＋。1H-NMR （600 MHz，CD3OD） δ： 7.17 （1H， d， J ＝15.6 Hz， H-7）， 6.18（1H， d， J ＝15.6 Hz， H-8）， 3.77 （1H， m， H-3），2.35 （1H， dd， J ＝14.4， 5.2 Hz， H-4a）， 2.28（3H， s， H-10）， 1.68 （1H， dd， J ＝14.4， 9.2 Hz，H-4b）， 1.59 （1H， dd， J ＝12.8 Hz， 3.6 Hz， H-2a）， 1.27 （1H， dd， J ＝12.8， 10.8 Hz， H-2b），1.18 （3H， s， H-12）， 1.19 （3H， s， H-13）， 0.98（3H， s， H-11）；13C-NMR （150 MHz， CD3OD） δ：200.8 （C-9）， 145.9 （C-7）， 133.8 （C-8）， 70.7（C-6）， 68.9 （C-5）， 64.4 （C-3）， 47.6 （C-2），41.6 （C-4）， 36.5 （C-1）， 29.8 （C-12）， 27.6 （C-10），25.7 （C-11），20.5 （C-13）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［9］ 基本一致， 故鑒定為（3S， 5R， 6S， 7E） -3，5， 6-三羥基-7-香波龍大柱烯-9-酮。

化合物4： 黃色結(jié)晶。 ESI-MS m／z： 419.223 5［M ＋H］-。1H-NMR （600 MHz， CD3OD） δ： 6.61（4H， s， H-2′， 6′， 2″， 6″）， 4.66 （2H， d， J ＝4.2 Hz， H-2， 6）， 4.21 （2H， dd， J ＝6.6， 9.0 Hz， H-4a， 8a）， 3.84 （2H， dd， J ＝3.0， 9.0 Hz， H-4b， 8b）， 3.77 （12H， s， -OCH3× 4），3.09 （2H， m， H-1， 5）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD） δ： 149.5 （ C-3′， 5′， 3″， 5″）， 136.4（C-4′， 4″）， 133.3 （C-1′， 1″）， 104.6 （ C-2′，6′， 2″， 6″）， 87.7 （C-2， 6）， 72.7 （C-4， 8），56.9 （-OCH3×4）， 55.4 （C-1， 5）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［10］ 基本一致， 故鑒定為（-） -丁香酯素。

化合物5： 黃色粉末。 ESI-MS m／z： 549.321 6［M ＋Na］＋。1H-NMR （DMSO-d6） δ： 12.85 （1H， s，5-OH），7.27 （2H， s， H-2′，6′），6.97 （1H， d， J ＝1.6 Hz， H-2″）， 6.96 （1H， s， H-3）， 6.83 （1H，dd， J ＝8.2， 1.6 Hz， H-6″）， 6.68 （1H， d， J ＝8.2 Hz， H-5″）， 6.46 （1H， brs， H-8）， 6.17 （1H， brs，H-6）， 4.86 （1H， d， J ＝5.0 Hz， H-7″）， 4.27（1H， m， H-8″），3.87 （6H， s，3′，5′-OCH3），3.75（3H， s， 3″-OCH3）， 3.65 （1H， dd， J ＝11.5， 4.7 Hz，9″-CH2），3.26 （1H， dd， J ＝11.5，4.8 Hz，9″-CH2）；13C-NMR （DMSO-d6） δ：181.7 （C-4），166.1（C-7）， 162.7 （C-2）， 161.5 （C-5）， 157.6 （C-9），153.1 （C-3′， 5′）， 147.1 （C-3″）， 145.5 （C-4″），139.9 （C-4′），133.1 （C-1″），125.6 （C-1′），119.3（C-6″）， 114.6 （C-5″）， 111.3 （C-2″）， 104.6 （C-3），104.5 （C-2′，6′），103.4 （C-10），99.5 （C-6），94.6 （C-8）， 86.8 （C-8″）， 71.7 （C-7″）， 60.5 （C-9″）， 56.5 （3′， 5′-OCH3）， 55.7 （3″-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［11］ 基本一致， 故鑒定為salcolin A。

化合物6： 黃色針晶。 ESI-MS m／z： 331.221 0［M＋H］＋。1H-NMR （600 MHz， DMSO-d6） δ： 7.79（1H， d， J ＝2.0 Hz， H-2′）， 7.75 （1H， dd， J ＝2.0， 8.5 Hz， H-6′）， 6.95 （1H， d， J ＝8.5 Hz， H-5′）， 6.77 （1H， d， J ＝2.0 Hz， H-8）， 6.35 （1H，d， J ＝2.0 Hz， H-6）， 3.87 （3H， s， 3′-OCH3），3.87 （3H， s，7-OCH3）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ： 149.1 （C-2）， 136.1 （C-3）， 178.1 （C-4）， 162.4 （C-5），97.4 （C-6），165.9 （C-7），92.5（C-8）， 156.7 （C-9）， 105.4 （C-10）， 123.0 （C-1′）， 113.6 （C-2′）， 147.4 （C-3′）， 149.0 （C-4′），115.6 （C-5′），124.0 （C-6′），56.0 （-OCH3），55.9（-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［12］ 基本一致， 故鑒定為鼠李秦素。

化合 物7： 無 色 油 狀 液 體。 ESI-MS m／z：287.231 2 ［M-H］-。1H-NMR （600 MHz， CDCl3）δ： 7.76 （1H， m）， 7.64 （1H， m）， 4.28 （2H，m）， 1.46 （2H， m）， 1.76 （ 2H， m）， 0.99（3H， m）；13C-NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 169.6（C-7）， 133.8 （ C-1， 6）， 129.8 （ C-2， 5），132.5 （C-3， 4）， 66.9 （C-1′， 1″）， 31.8 （C-2′，2″）， 20.5 （C-3′， 3″）， 14.4 （C-4′， 4″）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［13］ 基本一致， 故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物8： 淡黃色粉末。 ESI-MS m／z：345.120 2［M＋H］＋。1H-NMR （600 MHz， DMSO-d6） δ： 7.57（1H， s）， 7.67 （1H， s）， 4.05 （3H， s）， 4.07（3H， s）， 4.09 （3H， s）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ： 111.24 （C-1）， 140.98 （C-2）， 140.23（C-3）， 152.66 （C-4）， 111.67 （C-5）， 112.57 （C-6）， 158.36 （C-7）， 111.98 （C-1′）， 141.48 （C-2′）， 140.86 （C-3′）， 153.84 （C-4′）， 107.48 （C-5′）， 113.38 （C-6′）， 158.55 （C-7′）， 56.76 （4′-OCH3）， 61.34 （3′-OCH3）， 61.05 （3-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［14］ 基本一致， 故鑒定為3， 3′，4′-三-O-甲基鞣花酸。

化合物9： 黃色粉末， ESI-MS m／z： 431.125 4［M-H］-。1H-NMR （600 MHz， DMSO-d6） δ： 7.75（d， 2H， J ＝8.7 Hz， H-2′， 6′）， 6.91 （d， 2H， J ＝8.7 Hz， H-3′， 5′）， 6.41 （d， 1H， J ＝1.6 Hz， H-8）， 6.21 （d，1H，J ＝1.6 Hz，H-6），5.28 （d，1H，J ＝1.3 Hz， Rha-H-1）， 0.78 （d， 3H， J ＝5.7 Hz，Rha-H-6）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ：177.7（C-4），164.5 （C-7），161.3 （C-5），159.8 （C-4′），157.2 （C-2）， 156.6 （C-9）， 134.2 （C-3）， 130.6（C-2′， 6′）， 120.6 （C-1′）， 115.5 （C-3′， 5′），104.1 （C-10）， 98.8 （C-6）， 93.8 （C-8）， 101.9（Rha-C-1）， 70.7 （Rha-C-2）， 70.4 （Rha-C-3），71.2 （Rha-C-4）， 70.1 （Rha-C-5）， 17.5 （Rha-C-6）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［15］ 基本一致， 故鑒定為阿福豆苷。

化合物10： 黃色粉末， ESI-MS m／z： 493.320 1［M ＋H］＋。1H-NMR （600 MHz， DMSO-d6） δ： 12.97（1H， s， 5-OH）， 9.42 （1H， s， 4′-OH）， 6.47（1H， d， J ＝1.9 Hz， H-6）， 6.95 （1H， d， J ＝1.9 Hz， H-8）；13C-NMR （150 MHz， DMSO-d6） δ：182.5 （C-4）， 164.6 （C-2）， 163.4 （C-7）， 161.5（C-5），157.3 （C-9），148.7 （C-3′，5′），140.5 （C-4′）， 120.7 （C-1′）， 105.8 （C-10）， 104.9 （C-2′，6′），104.3 （C-3），99.7 （C-6），95.6 （C-8）。 以上數(shù)據(jù)與文獻［10］ 基本一致， 故鑒定為苜蓿素。剩余的13C-NMR 譜信號中100.5 （C-1″）， 77.7 （C-5″）， 73.5 （C-2″）， 76.8 （C-3″）， 69.8 （C-4″），60.8 （C-6″） 為葡萄糖基的信號， 與文獻［16］ 基本一致， 故鑒定為苜蓿素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

4 討論

角蒿和四川波羅花是紫葳科角蒿屬植物中化合物研究較多的2 個品種， 生物堿、 萜類、 甾體、 黃酮及其苷類為其主要成分［17-18］。 密花角蒿中黃酮及其苷類亦為其主要成分， 研究表明［19］它們具有明顯的抗氧化應激、 抗炎等多種藥理活性， 可能是該植物治療黃疸、 胃痛、 中耳炎等病癥的物質(zhì)， 可為進一步相關(guān)研究奠定理論基礎。