野八角果實(shí)化學(xué)成分的研究

王曉霞， 莊鵬宇*， 茍麗霞， 李雪琴

（1. 華北理工大學(xué)藥學(xué)院， 河北 唐山063210； 2. 華北理工大學(xué)生命科學(xué)院， 河北 唐山063210）

野八角為八角屬植物野八角Iliicium simonsii Maxim, 是常綠有毒灌木。 八角屬植物全世界共40種, 分布于南美、 墨西哥、 西印度以及亞洲東部。我國(guó)資源豐富, 有35 種, 主要分布于四川、 云南、貴州西北部至西南部[1]。 其用藥歷史悠久, 用于止痛、 治療皮膚炎癥及風(fēng)濕病等。 其葉、 果實(shí)均可入藥, 具有較好的醫(yī)療價(jià)值和開(kāi)發(fā)前景[2]。

目前, 從該屬植物的莖、 葉和果實(shí)中已分離得到的化合物包括倍半萜、 二萜及其二聚體、 三萜、C6-C3、 黃酮、 苯丙烷、 木脂素及揮發(fā)油類(lèi)[3]。 現(xiàn)代藥理研究表明, 該屬植物具有細(xì)胞毒活性、 抑菌、 中樞興奮、 鎮(zhèn)痛等作用[4], 部分C6-C3 類(lèi)化合物具有良好的神經(jīng)保護(hù)作用[5-6]。 因此, 課題組開(kāi)展其果實(shí)的化學(xué)成分研究, 期望從中尋找更多的活性較好結(jié)構(gòu)新穎的先導(dǎo)化合物。

1 材料

Varian Inova-500 M 核磁共振儀（美國(guó)Varian公司）； ThermoFisher LCQ Fleet LC/MS 型質(zhì)譜儀（美國(guó)Thermo 公司）； JASCO V650 型紫外光譜儀（日本Jasco 公司）； Nicolet 5700 型傅立葉變換紅外光譜儀（美國(guó)Nicolet 公司）； Shimadzu LC-6AD（日本島津公司）； Agilent 218 制備液相色譜儀、Agilent 1260 型高效液相色譜儀、 Agilent 7 890 A 型氣相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）。 硅膠（100 ～200目、 200～300 目, 山東青島海洋化工廠生產(chǎn)）； 薄層色譜硅膠H 及硅膠GF254（青島海洋化工廠生產(chǎn)）； 顯色劑10%及5% H2SO4乙醇溶液及三氯化鐵-鐵 氰 化 鉀 溶 液； Sephadex LH-20 （ 美 國(guó)Amersham Pharmacia Biotech AB 公司）； AB-8 型大孔吸附樹(shù)脂（安徽三星樹(shù)脂技術(shù)公司）； Cosmosil 5 C18-MS-ⅡHPLC 柱（4.6 mm × 250 mm, 5 μm, 日本Cosmosil 公 司）； Cosmosil 5 C18半 制 備 柱（10 mm×250 mm, 5μm, 日本Cosmosil 公司）。 甲醇、 乙腈（色譜純, 天津市西華特種試劑廠）； 其他試劑均為分析純（北京化工廠）。 D-Glc （葡萄糖）、 L-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽、 三甲基硅烷咪唑（美國(guó)Sigma 公司）。

野八角購(gòu)于云南大理（200908）, 經(jīng)華北理工大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室劉春艷（教授） 鑒定為植物野八角Iliicium simonsii Maxim 的干燥果實(shí)。 樣品（200908） 保存于華北理工大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室。

2 提取與分離

野八角的干燥成熟果實(shí)10 kg, 粉碎, 12 倍量95% 乙醇浸泡1 夜, 回流提取3 次, 2 h/次, 減壓濃縮, 得到浸膏（800 g）。 之后用甲醇溶解, 并吸附于2 kg 硅藻土, 干燥后裝入索氏提取器, 依次用石油醚、 乙酸乙酯、 甲醇洗脫, 減壓濃縮得石油醚部位200 g、 乙酸乙酯部位300 g、 甲醇部位300 g。

將甲醇部位300 g 經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂（AB-8） 梯度洗脫（乙醇-水, 10% ～100%）, 相同部分合并,取95%乙醇洗脫部分經(jīng)硅膠柱梯度洗脫（CH2Cl2-甲醇, 50 ∶1 ～1 ∶1） 得9 個(gè)流份（Fr.A ～Fr.I）。Fr.B （150 g） 經(jīng)ODS （800 g） 柱, 甲 醇∶ 水（10 ∶90 ～90 ∶10 ∶1） 梯度洗脫, 得10 個(gè)流份Fr.B1～Fr.B10。 Fr.B1 （16.95 g） 經(jīng)ODS 柱分離得到9 個(gè)流份（Fr.B1A ～Fr.B1I）。 Fr.B1B （2 g）經(jīng)Sephadex LH-20 柱（甲醇∶水=2 ∶1 洗脫） 得3個(gè)流份（Fr.1 ～Fr.3）, Fr.2 （300 mg） 經(jīng)pHPLC[甲醇∶水（40 ∶60） ] 得化合物1 （23 mg）、 2（5 mg）、 3 （10 mg）、 4 （10 mg）。 Fr.B1C （2 g）經(jīng)Sephadex LH-20 柱（甲醇∶水=1 ∶1） 得5 個(gè)流份（Fr.1～Fr.5）, 其中Fr.2 （500 mg） 經(jīng)硅膠柱P ∶E （50 ∶1～1 ∶1） 得化合物5～6 粗品, 再分別經(jīng)Sephadex LH-20 （甲醇∶水= 1 ∶1）、 pHPLC[甲醇∶水（30 ∶70） ] 得化合物5 （50 mg）、 6（8 mg）； Fr.3 （200 mg） 經(jīng)硅膠柱P ∶E （30 ∶1～1 ∶1） 得化合物7 粗品, 再經(jīng)Sephadex LH-20 （甲醇∶水=1 ∶1） 柱得化合物7 （50 mg）。 Fr.C （20 g） 經(jīng)反復(fù)硅膠柱、 Sephadex LH-20 得化合物8 （5 mg）； Fr.H （3 g） 經(jīng)硅膠（200 ～300 目, 50 g）柱, CH2Cl2∶甲醇（25 ∶1～10 ∶1） 梯度洗脫, 得化合物9 粗品, 再經(jīng)Sephadex LH-20 柱（甲醇∶水=1 ∶1）, 得化合物9 （50 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 無(wú)色油狀物, ESI-MS m/z： 281 [M+ H]+。 IR 譜顯示羥基（3 391 cm-1）, 共軛烯酮（1 650 cm-1） 和雙鍵（1 612 cm-1） 的存在。1HNMR （500 MHz, acetone-d6） δ： 5.50 （1H, s, H-3）, 5.47 （1H, s, H-6）, 2.46 （1H, dd, J=7.5,13.5 Hz, H-7）, 2.20 （1H, dd, J=7.5, 13.5 Hz,H-7）, 5.54 （1H, m, H-8）, 4.89 （1H, brd, J=10.0 Hz, H-9）, 4.95 （1H, brd, J=17.0 Hz, H-9）, 2.26 （1H, dd, J=7.5, 13.5 Hz, H-10）, 2.52（1H, dd, J=7.5, 13.5 Hz, H-10）, 4.91 （1H, t,J= 7.5 Hz, H-11）, 1.55 （3H, s, H-13）, 1.59（3H, s, H-14）, 5.91 （2H, s, H-15）；13C-NMR（500 Hz, acetone-d6） δ： 201.6 （C-1）, 54.4 （C-2）, 108.8 （C-3）, 145.1 （C-4）, 164.9 （C-5）,99.5 （C-6）, 45.4 （C-7）,134.5 （C-8）,117.9 （C-9）, 40.0 （C-10）, 119.8 （C-11）, 134.6 （C-12）,25.9 （C-13）, 18.0 （C-14）, 102.7 （C-15）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7] 一致, 故鑒定為illioliganone C。

化合物2： 淡黃色油狀； UV （甲醇） 光譜的最大吸收波長(zhǎng)（λmax） 在200、 255、 310 nm。 ESI-MS m/z： 247.3 [M + H]+和269.2 [M + Na]+。1HNMR （500 MHz, acetone-d6） δ： 5.50 （1H, s, H-3）, 5.47 （1H, s, H-6）, 2.46 （1H, dd, J=7.5,13.5 Hz, H-7）, 2.20 （1H, dd, J=7.5, 13.5 Hz,H-7）, 5.54 （1H, m, H-8）, 4.89 （1H, brd, J=10.0 Hz, H-9）, 4.95 （1H, brd, J=17.0 Hz, H-9）, 2.26 （1H, dd, J=7.5, 13.5 Hz, H-10）, 2.52（1H, dd, J=7.5, 13.5 Hz, H-10）, 4.91 （1H, t,J= 7.5 Hz, H-11）, 1.55 （3H, s, H-13）, 1.59（3H, s, H-14）, 5.91 （2H, s, H-15）；13C-NMR（500 Hz, acetone-d6） δ： 201.6 （C-1）, 54.4 （C-2）, 108.8 （C-3）, 145.1 （C-4）, 164.9 （C-5）,99.5 （C-6）, 45.4 （C-7）,134.5 （C-8）,117.9 （C-9）, 40.0 （C-10）, 119.8 （C-11）, 134.6 （C-12）,25.9 （C-13）, 18.0 （C-14）, 102.7 （C-15）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8] 一致, 故鑒定為4 （R） -allyl-4-（ 3-methylbut-2-enyl ） -1, 2-methylenedioxycyclohexa-2, 6-dien-5-one。

化合物3： 為無(wú)色油狀物； [α]20D+68.3 （c 0.51 甲 醇）； UV （ 甲 醇） λmax（ logε）： 265（3.19）。 IR 光譜給出羥基（3 429 cm-1） 和羰基（1 657 cm-1） 等官能團(tuán)的振動(dòng)吸收。 ESI-MS m/z：269 [M + H]+, 291 [M + Na]+, 267 [M -H]-。1H-NMR （500 MHz, acetone-d6） δ： 3.56（1H, m, H-2）, 4.15 （1H, d, J=3.0 Hz, H-3）,5.21 （1H, s, H-6）, 2.44 （1H, dd, J=7.5, 14.0 Hz, H-7）, 2.32 （1H, m, H-7）, 5.87 （1H, m, H-8）, 5.10 （1H, brd, J=17.0 Hz, H-9）,5.04 （1H,brd, J=10.0 Hz, H-9）, 2.36 （1H, dd, J=5.0,11.5 Hz, H-10）, 2.10 （1H, dd, J = 11.0, 11.5 Hz, H-10）, 4.52 （1H, dd, J=5.0, 11.0 Hz, H-11）, 1.27 （3H, s, H-13）, 1.17 （3H, s, H-14）；13C-NMR （500 Hz, acetone-d6） δ： 199.2 （C-1）,44.2 （C-2）, 72.4 （C-3）, 78.5 （C-4）, 180.4 （C-5）, 96.4 （C-6）,41.8 （C-7）,133.9 （C-8）,118.2（C-9）, 26.3 （C-10）, 93.3 （C-11）, 70.4 （C-12）,26.5 （C-13）, 25.6 （C-14）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]一致, 故鑒定為3-hydroxyillifunone B。

化合物5： 白色無(wú)定形粉末, IR 顯示存在羥基3 471 cm-1, ESI-MS m/z： 241 [M + H]+, 263[M+Na]+, 239 [M-H]-提示其分子量為240。1HNMR （500 MHz, acetone-d6） δ： 3.01 （1H, m, H-1）, 2.11 （1H, m, Hα-2）, 1.58 （1H, m, Hβ-2）,2.53 （1H, m, Hα-3）, 1.68 （1H, m, Hβ-3）, 4.19（1H, brs, H-7）, 2.46 （1H, d, J=15.0 Hz, Hα-8）, 2.05 （1H, dd, J=15.0, 3.0 Hz, Hβ-8）, 4.28（1H, s, H-10）, 0.85 （3H, s, H-12）, 0.85 （3H,s, H-13）,0.84 （3H,s,H-15）；13C-NMR （500 Hz,acetone-d6） δ： 78.2 （C-1）, 27.2 （C-2）, 39.4 （C-3）, 70.0 （C-4）, 44.5 （C-5）, 28.4 （C-6）, 72.0（C-7）, 30.0 （C-8）, 34.6 （C-9）, 38.8 （C-10）,39.0 （C-11）, 17.2 （C-12）, 17.4 （C-13）, 11.8（C-14）, 29.5 （C-15）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11] 一致, 故鑒定為1β, 4β, 7α-trihydroxyeudesmane。

化合物6： 白色無(wú)定形粉末ESI-MS m/z： 305[M + Na]+。 IR 顯示存在羥基（3 380 cm-1） 和羰基 （1 750 cm-1） 基 團(tuán)。1H-NMR （500 MHz,CD3OD） δ： 2.47 （1H, m, H-1）, 4.06 （1H, brd,J= 1.8 Hz, H-2）, 2.12 （1H, m, Hα-3）, 2.06（1H, m, Hβ-3）, 1.79 （1H, m, H-6）, 2.12 （1H,d, J=14.1 Hz, Hα-8）, 1.76 （1H, d, J=13.8 Hz,Hβ-8）, 2.84 （1H, d, J=18.3 Hz, Hα-10）, 2.56（1H, d, J=18.3 Hz, Hβ-10）, 0.96 （3H, d, J=7.2 Hz, H-12）, 0.98 （3H, s, H-14）, 1.10 （3H,d, J=7.0 Hz, H-15）；13C-NMR （500 Hz, CD3OD）δ： 55.6 （C-1）, 74.8 （C-2）, 43.8 （C-3）, 102.3（C-4）, 51.9 （C-5）, 44.3 （C-6）, 107.6 （C-7）,54.1 （C-8）, 49.6 （C-9）,41.8 （C-10）,179.5 （C-11）, 8.5 （C-12）,71.7 （C-13）,14.5 （C-14）,9.8（C-15）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12] 一致, 故鑒定為pseudoanisatin。

化合物7： 色粉末； UV 光譜（甲醇） 顯示最大吸收λmax200、 234、 275 nm。 ESI-MS m/z： 387[M + H]+, 409 [M + Na]+, 425 [M + K]+, 385[M - H]-, 421 [M + Cl]+。1H-NMR （500 MHz,CD3OD） δ： 2.47 （1H, m, H-1）, 4.06 （1H, brd,J= 1.8 Hz, H-2）, 2.12 （1H, m, Hα-3）, 2.06（1H, m, Hβ-3）, 1.79 （1H, m, H-6）, 2.12 （1H,d, J=14.1 Hz, Hα-8）, 1.76 （1H, d, J=13.8 Hz,Hβ-8）, 2.84 （1H, d, J=18.3 Hz, Hα-10）, 2.56（1H, d, J=18.3 Hz, Hβ-10）, 0.96 （3H, d, J=7.2 Hz, H-12）, 0.98 （3H, s, H-14）, 1.10 （3H,d, J=7.0 Hz, H-15）；13C-NMR （500 Hz, CD3OD）δ： 55.6 （C-1）, 74.8 （C-2）, 43.8 （C-3）, 102.3（C-4）, 51.9 （C-5）, 44.3 （C-6）, 107.6 （C-7）,54.1 （C-8）, 49.6 （C-9）,41.8 （C-10）,179.5 （C-11）, 8.5 （C-12）,71.7 （C-13）,14.5 （C-14）,9.8（C-15）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13] 一致, 故鑒定為tashironin。

化合物8： 白色粉末, UV 光譜（甲醇） 顯示最大吸收λmax200、 259 nm； IR 光譜顯示羥基（3 313 cm-1）、 羰基（1 763 cm-1）、 共軛羰基（1 687 cm-1） 和雙鍵（1 641 cm-1） 的存在。 ESI-MS m/z：335 [M + Na]+, 647 [2 M + Na]+, 623 [2 M -H]-。1H-NMR （500 MHz, CD3OD） δ： 6.15 （1H,s, H-2）, 7.89 （1H, d, J=16.5 Hz, H-4）, 6.54（1H, d, J=16.5 Hz, H-5）, 4.50 （1H, s, H-6）,1.91 （1H, dd, J=14.0, 10.0 Hz, Hax-3′）, 2.25（1H, dd, J=14.0, 6.5 Hz, Heq-3′）, 3.87 （1H,m, Hax-4′）, 1.79 （1H, dd, J = 13.5, 11.0 Hz,Hax-5′）, 1.88 （1H, dd, J=13.5,7.0 Hz, Heq-5′）,1.35 （1H,s,H-7′）,1.08 （1H,s,H-9′）；13C-NMR（500 Hz, CD3OD） δ： 167.5 （C-1）, 116.5 （C-2）,153.3 （C-3）, 129.7 （C-4）, 130.9 （C-5）, 62.4（C-6）, 82.5 （C-1′）, 88.2 （C-2′）, 42.6 （C-3′）,64.8 （C-4′）,41.1 （C-5′）,52.8 （C-6′）,18.5 （C-7′）,178.6 （C-8′）,14.6 （C-9′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14 ] 一 致, 故 鑒 定 為 8′-oxo-6-hydroxydihydrophaseic acid。

化合物9： 白色粉末, UV 光譜（甲醇） 顯示最大吸收λmax200, 259 nm； IR 光譜顯示存在羥基（3 431 cm-1）、 羰基（1 721 cm-1） 等基團(tuán)。 ESI-MS m/z： 445 [M+H]+, 467 [M+Na]+, 443 [MH]-。1H-NMR （500 MHz, CD3OD） δ： 2.08 （1H,m, H-1）,2.29 （1H, m, H-2α）,2.06 （1H, m, H-2β）, 5.88 （1H, brs, H-3）,4.22 （1H, brs, H-7）,2.24 （1H, dd, J = 20.0, 2.8 Hz, H-8α）, 2.03（1H, dd, J=20.0, 4.1 Hz, H-8β）, 4.07 （1H, s,H-10）, 1.27 （3H, s, H-12）, 3.71 （1H, d, J=10.0 Hz, H-14a）, 3.20 （1H, d, J=10.0 Hz, H-14b）,1.11 （3H, d, J=6.2 Hz, H-15）,4.18 （1H,d, J=7.8 Hz, H-1′）, 3.15 （1H, m, H-2′）, 3.22（1H, m, H-3′）, 3.25 （1H, m, H-4′）, 3.34 （1H,m, H-5′）, 3.84 （1H, brd, J=12.4 Hz, H-6′a）,3.64 （1H, brd, J = 12.4 Hz, H-6′b）；13C-NMR（500 MHz, CD3OD） δ： 46.6 （C-1）, 40.5 （C-2）,134.2 （C-3）, 144.0 （C-4）,45.4 （C-5）,74.4 （C-6）, 85.4 （C-7）, 32.7 （C-8）, 51.2 （C-9）, 73.6（C-10）, 177.6 （C-11）, 21.7 （C-12）, 21.2, （C-13）, 73.4 （C-14）, 13.6 （C-15）, 103.7 （C-1′）,74.8 （C-2′）,78.1 （C-3′）,71.4 （C-4′）,78.2 （C-5′）, 62.7 （C-6′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15] 一致,故鑒定為henrylactone D。