中草藥對奶牛臨床型乳腺炎病原菌的體外抑菌試驗研討

摘要：奶牛乳腺炎作為一種比較常見的奶牛疾病，會影響奶牛產(chǎn)奶量，導致奶牛養(yǎng)殖經(jīng)濟效益不斷降低，會喪失泌乳功能而被迫淘汰奶牛，且會對牛奶品質(zhì)造成影響，不利于人們的身體健康。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)生率大約控制在25-60%之間，每年所造成的經(jīng)濟損失高達20億美元。

關(guān)鍵詞：中草藥;奶牛;臨床型乳腺炎病原菌;體外抑菌試驗

臨床上關(guān)于奶牛乳腺炎的治療，主要是藥物療法，即采用抗生素、激素與化學合成藥，其中抗生素發(fā)揮了主要作用，但是也帶來各種問題，如造成內(nèi)分泌紊亂、增加耐藥菌株、殘留過多的抗生素與獸藥等，進而會對人類身體健康造成嚴重威脅。按照國家相關(guān)衛(wèi)生指標，要求牛奶中不殘留任何抗生素，因此這對于治療奶牛乳腺炎提供了一定挑戰(zhàn)。當下，關(guān)于該病的治療，中藥治療已經(jīng)引起國內(nèi)外專家的高度重視，其除了具有一系列特點之外還具有藥物、營養(yǎng)的雙重功能，如消炎、抗菌、無毒或低毒、低殘留或無殘留等。我國積極的研究了中藥治療效果，認為該病的產(chǎn)生與濕、痰、氣、血郁結(jié)不散，化而為炎造成的，因此本文在分析中草藥的體外抗菌活性時本著清熱解毒、消腫止痛、通經(jīng)活絡(luò)等原則，為疾病的治療提供科學的理論依據(jù)。

一、材料與方法

（一）菌種來源與中藥

本次研究選取2個牛場中的6個供試奶牛場臨床型乳腺炎奶羊，在此基礎(chǔ)上積極的開展乳腺病原學鑒定，將7種致病菌保存下來。

麻黃、桔梗、大貝、蒲公英、白花蛇草、甘草、板藍根、半枝蓮等。

（二）方法

（1）中藥制備

水提法：取一定量的單味中草藥，用去離子水進行半個小時的浸泡，然后加熱到沸騰狀態(tài)后用文火進行半個小時的煎煮，過濾時使用8層紗布，反復進行2次煎煮，合并濾液，濃度控制為1g/ml，放在100℃的流通蒸汽上進行15分鐘滅菌，然后保存在4℃的冰箱中備用。

（2）培養(yǎng)基制備

①關(guān)于固體、液體培養(yǎng)基的配制需要采用常規(guī)方法。鋪板時，采用高壓滅菌的方式處理培養(yǎng)基，降低溫度到50-60℃之間，將板趁熱鋪到無菌超凈工作臺內(nèi)，導入12cm直徑的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)（21個），將蓋子蓋上并保存在無菌超凈臺內(nèi)備用。

②鏈球菌的培養(yǎng)，即需要將2%小牛血清加入到部分固體、液體培養(yǎng)基中，普通瓊脂基經(jīng)過高壓滅菌后進行冷卻，溫度維持在50℃左右，然后將2%的新鮮小牛血清加入后均勻的混合，同樣需要趁熱完成鋪板工作，倒入9cm直徑的滅菌培養(yǎng)平皿（7個），保存在無菌超凈工作臺內(nèi)待用。

③關(guān)于酵母菌的培養(yǎng)，需要通過制作馬鈴薯培養(yǎng)基的方式。即鋪板時，高壓滅菌培養(yǎng)基，降低溫度在50-60攝氏度，趁熱做好鋪板工作，倒入7個直徑12cm的滅菌培養(yǎng)平皿中，蓋蓋保存在無菌超凈臺內(nèi)。

（3）1.2.3接種物制備

在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上取正在生長的試驗菌，使用接種環(huán)挑取3-5個形態(tài)具有相似性的待檢菌落，在水溶酪蛋白肉湯4-5ml中接種，在35℃的條件下進行2-6小時的孵化，涂菌時使用生理鹽水或MH肉湯校正菌液濃度。

（4）涂菌

取滅菌平皿培養(yǎng)基20個，直徑為12cm，編號分為5組，分別接種0.15ml的金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌以及綠膿桿菌，領(lǐng)取一個AE平皿不進行涂菌處理，僅作為空白對照。

取平皿培養(yǎng)基5個，直徑9cm，接種0.25ml稀釋的鏈球菌，編寫F1-F5，其中空白對照的為F5、不涂菌;在培養(yǎng)基表面使用涂菌棒均勻的涂抹菌液。

取平皿培養(yǎng)基5個，直徑12cm，接種0.25ml稀釋的酵母菌，編號G1-G5，其中G5不涂菌、為空白對照。

（5）打孔

在涂菌瓊脂培養(yǎng)基上使用3cm打孔器均勻打孔，編號，其中空白對照為AE、F5和G5，保證孔徑大小與深度一致，在酒精燈上略微的加熱打好的孔，熔化局部培養(yǎng)基使其重新凝固并緊密結(jié)合平皿底壁，避免底部縫隙中流出加入的藥液而影響試驗結(jié)果[3]。

（6）加藥

將3種藥加入到平皿中，每種藥液加入兩孔為平行樣，每孔加入藥液20ul，為保證結(jié)果的準確性需要平放平皿避免溢出藥液，在37℃恒溫箱中放置進行24小時的培養(yǎng)。

（7）觀察與記錄

對抑菌圈直徑大小進行觀察、測量，每孔不同方向進行2次測量，最終取4次結(jié)果的平均值。

（8）判定標準

根據(jù)《中藥制備經(jīng)驗錄》中關(guān)于“中草藥抑菌作用實驗”中提出的方法。

二、結(jié)果

對于不同菌株抑制效果而言，盡管采用同樣的中草藥但是會取得不同效果，詳情如下表1：

三、討論

當下，臨床上關(guān)于中草藥對病原菌的體外抑菌試驗研究報道較多，采用多種研究方法，如紙片抑菌法、管碟法、平皿稀釋法等，對于中草藥抑菌活性主要定性分析居多。本次研究在定量分析中草藥體外抗菌活性時采用試管2倍稀釋法，能夠提供一定理論依據(jù)來制定科學的中草藥制劑組方。同時，抗生素是治療、預防各種感染性疾病的主要藥物，能夠?qū)Σ≡⑸锂a(chǎn)生強烈的殺傷作用，且對人體產(chǎn)生的毒副作用較大，甚至會威脅到生命安全。基于此，需要在掌握適應(yīng)癥的基礎(chǔ)上，對抗生素進行正確、合理的使用呢，在天然藥物中尋找理想的抗菌藥物，即極具抗菌作用和毒副作用小的，在傳統(tǒng)中醫(yī)藥藥物中對于新型抗菌藥物的尋找是一種良好的途徑。

縱觀流行病學的調(diào)查結(jié)果可知，臨床型乳腺炎奶牛的表現(xiàn)以乳房炎癥反應(yīng)為主，如發(fā)病、疼痛、腫脹、觸診腫塊等，嚴重者會出現(xiàn)全身癥狀、乳汁不正常，存在不同程度的凝塊、絮片，重者會出現(xiàn)黃色漿液性物質(zhì)。同時，疾病的產(chǎn)生受各種因素的影響，如環(huán)境衛(wèi)生、飼養(yǎng)管理、季節(jié)、胎數(shù)、泌乳月等，其中發(fā)生率最高的當屬第三季度、三胎，頭胎發(fā)生率低;牛易感性最強的泌乳月當屬3-4月、第9月。根據(jù)藥敏試驗結(jié)果，對于臨床經(jīng)常使用的抗菌藥物所分離菌株所產(chǎn)生的耐藥性較強，且抗生素殘留會造成較大的食品安全隱患，為此人們需高度重視抗生素濫用，在免疫預防時積極的接種疫苗。但是，基于乳腺病原比較復雜，不利于有效的研制與選擇疫苗，為此在今后的工作中應(yīng)該重視消毒、飼養(yǎng)管理共組，對疫苗、抗生素進行正確合理的選擇，制定綜合防治措施積極有效的預防奶牛乳腺炎。

結(jié)語：

在奶牛場中作為常見、危害最大的一種疾病為奶牛乳腺炎，由此會導致產(chǎn)乳量不斷降低，還會對乳品質(zhì)造成嚴重影響，尤其是隱性乳腺炎，因在臨床上變化不明顯而很難被發(fā)現(xiàn)。由于長期使用藥物治療，促使致病菌產(chǎn)生的耐藥性很強，如大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、青霉素類、頭孢類、喹諾酮類藥物，為此本文專門探究了中草藥對奶牛臨床型乳腺炎病原菌的體外抑菌試驗。

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作者簡介：

吳姣，女，漢族，陜西渭南人，碩士，助教。