高效液相色譜法測定面條中過氧化苯甲酰的含量

孟 霞，丁臘梅，周 帥，阮曉玲

（長沙醫(yī)學院藥學院，湖南長沙 410219）

過氧化苯甲酰（BPO）是面粉中常見的添加劑，能抑制面粉中一些微生物生長，增強面筋彈性和增加面粉的白度，起到漂白和防止霉變的作用[1]，常被稱為面粉增白劑。BPO具有很強的氧化性，性質(zhì)極不穩(wěn)定，在面條加工的過程中絕大部分會水解成苯甲酸，其對面食具有后熟作用[2]，但苯甲酸超過限度可能導致肝、腎臟損害[3]，影響人體健康。我國食品標準GB 2760中規(guī)定了小麥粉中過氧化苯甲酰的限度為0.06 g/kg[4-5]，衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2001]159號文，以及國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布的GB/T 18415—2001均規(guī)定了面粉中過氧化苯甲酰的檢驗方法。我國已于2011年撤銷過氧化苯甲酰作為食品添加劑的許可，嚴禁在面粉生產(chǎn)中添加過氧化苯甲酰，同時加強了小麥及其產(chǎn)品的監(jiān)督力度，以保障該類食品的食用安全。

目前，過氧化苯甲酰的檢測方法包括化學分析法、光譜法[6]、色譜法[7-8]和質(zhì)譜法[9]等，其中化學分析法和光譜法由于靈敏度較低，不適用低限度過氧化苯甲酰的檢測。食品標準和多數(shù)文獻研究均采用高效液相色譜法對面粉及面食產(chǎn)品中的過氧化苯甲酰進行測定，該法又分為直接法和間接法，但是過氧化苯甲?；瘜W性質(zhì)不穩(wěn)定，易分解生成苯甲酸，將樣品中過氧化苯甲酰還原為苯甲酸后，采用間接法測定過氧化苯甲酰更為可靠。

試驗采用HPLC法測定面條中過氧化苯甲酰含量，將過氧化苯甲酰分解為苯甲酸，通過測定面條中苯甲酸的量間接測定過氧化苯甲酰的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-P600型依利特液相色譜儀、AL204型分析天平，梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品；KQ-300E型超聲儀，昆山超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

過氧化苯甲酰標準品（99.0%，B802244-250 g）、苯甲酸標準品（＞98%，B20085-250 g），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），磷酸（85%），超純水，硫代硫酸鈉（分析純），面條。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱Hedera-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；采用乙腈-0.04%磷酸（42∶58，V∶V） 作為流動相；流速為1.0 mL/min；檢測波長235 nm，進樣量為20μL。

1.2.2 苯甲酸和過氧化苯甲酰對照品溶液

精密稱取苯甲酸和過氧化苯甲酰對照品各約10 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用適量甲醇溶解并稀釋至刻度，再分別精密移取0.1 mL置于10 mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻即得10.0μg/mL的對照品儲備液。

1.2.3 供試品溶液

精密稱取8.0 g粉碎后的面條粉末，置于25 mL容量瓶中，加入10 mL無水乙醇，再加入1.0 mL 10%Na2S2O3溶液，超聲時間15 min，放置5 min后用流動相定容至刻度，混合均勻，靜置，取上清液用微孔濾膜（0.45μm）濾過，備用。

1.2.4 色譜圖

過氧化苯甲酰對照品溶液見圖1，苯甲酸對照溶液見圖2。

由圖1和圖2可知，過氧化苯甲酰在常規(guī)前處理過程中會分解為苯甲酸，很難直接測定面條中的過氧化苯甲酰。

2 結(jié)果與分析

2.1 標準曲線

精密移取苯甲酸對照品儲備液適量，分別配制質(zhì)量濃度為0.1，0.3，1.0，5.0，10.0μg/mL苯甲酸對照品溶液，分別精密吸取上述溶液20μL，注入液相色譜儀中，記錄峰面積。以苯甲酸對照品溶液質(zhì)量濃度（μg/mL） 為橫坐標、苯甲酸峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=16 332X+2 512.4，R2=0.999 7，結(jié)果表明苯甲酸的質(zhì)量濃度在0.1～10.0μg/mL的線性關系良好。

圖1 過氧化苯甲酰對照品溶液

圖2 苯甲酸對照溶液

2.2 精密度

取面條粉末8.0 g，精密稱量，置于25 mL容量瓶中，精密移取0.25 mL 10.0μg/mL過氧化苯甲酰對照溶液，然后按照“供試品溶液配制”項下方法進行處理，精密吸取上述溶液20μL進樣分析，連續(xù)進樣6次。

精密度試驗結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗結(jié)果

分析計算可得，測得的樣品中苯甲酸質(zhì)量濃度均值為0.105μg/mL（相當于0.33 mg/kg），乘以系數(shù)0.992（MBPO），即樣品中過氧化苯甲酰含量為0.104μg/mL（相當于0.32 mg/kg），RSD為5.21%，樣品精密度符合要求。

2.3 準確度

取湖南某公司生產(chǎn)的面條，粉碎后稱取約8.0 g置于25 mL容量瓶中，制備9份，分別加入0.25，0.75，2.50 mL過氧化苯甲酰對照品儲備液（10.0μg/mL），每個質(zhì)量濃度水平配制3份，按“樣品制備”項方法制備低、中、高3個質(zhì)量濃度水平的加樣回收率樣品溶液，相同色譜條件下測定。

加樣回收率試驗結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

2.4 LOD和LOQ

以信噪比（S/N） 為3和10分別計算檢測限和定量限，過氧化苯甲酰的最低檢出限和定量限分別為0.03μg/mL和0.1μg/mL。

2.5 穩(wěn)定性

配制0.1μg/mL過氧化苯甲酰溶液和苯甲酸對照溶液，2份溶液分別放置0，0.5，1.5，3.0，5.0，8.0，10.0，12.0 h后進樣分析，記錄色譜峰面積，二者的RSD分別為1.31%和1.68%，表明2種溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 樣品測定

分別取3個不同廠家的面條，按“供試品溶液項”下制備樣品溶液，分別進樣分析。3個公司生產(chǎn)的面條均不含過氧化苯甲酰添加劑，產(chǎn)品合格。

樣品測得結(jié)果見表3。

表3 樣品測得結(jié)果

3 討論

3.1 樣品前處理

與之前的研究報道相比，試驗樣品的取樣量增加較多，對前處理方法進行了優(yōu)化，文獻報道的前處理方法包括振蕩、渦旋和超聲[10-12]等，比較這3種前處理方法對過氧化苯甲酰生產(chǎn)苯甲酸的轉(zhuǎn)化率，稱取8.0 g面條粉末，分別制備含有0.1μg/mL和10.0μg/mL的過氧化苯甲酰樣品溶液進行考查，加入相同量的硫代硫酸鈉溶液，常溫條件下反應時間也相同。

3種前處理方法過氧化苯甲酰的轉(zhuǎn)化率結(jié)果比較見表4。

由表4可知，硫代硫酸鈉溶液與過氧化苯甲酰反應，超聲的前處理方法比渦旋和振蕩的轉(zhuǎn)化率明顯要高，超聲處理15 min后，反應時間對過氧化苯甲酰的轉(zhuǎn)化率的影響不大，最終選擇過氧化苯甲酰與硫代硫酸鈉溶液在常溫條件下超聲處理15 min作為試驗前處理方法。

表4 3種前處理方法過氧化苯甲酰的轉(zhuǎn)化率結(jié)果比較

3.2 Na2S2O3用量

稱取8.0 g面條粉末，分別制備含有0.1μg/mL和10.0μg/mL的過氧化苯甲酰樣品溶液，其中分別加入不同體積（0.5，1.0，1.5，2.0 mL） 的10%硫代硫酸鈉溶液進行還原，通過比較過氧化苯甲酰生成苯甲酸的轉(zhuǎn)化率，最終選擇1.0 mL 10%硫代硫酸鈉溶液作為還原劑。

3.3 過氧化苯甲酰的限度

我國食品添加劑使用衛(wèi)生標準GB 2760—1996規(guī)定了過氧化苯甲酰在小麥粉中的限度為0.06 g/kg[4-5]；許秀敏等人[13]采用HPLC同時測定小麥粉及其制品中過氧化苯甲酰和苯甲酸，BPO的檢出限可達到0.10 mg/kg；張艷等人[14]采用高效液相色譜法同時測定面粉中的過氧化苯甲酰和苯甲酸，BPO的最低檢出限為0.14 mg/kg；邢文[15]在小麥粉中過氧化苯甲酰檢測色譜法改進中，BPO的檢出限為0.005 g/kg；晏龍等人[10]在HPLC法測定面粉中曲酸和過氧化苯甲酰的含量中，BPO的檢出限為0.5μg/g；試驗也采用HPLC法測定面條中過氧化苯甲酰的含量，最低檢測限為0.093 7 mg/kg，遠遠低于食品添加劑使用衛(wèi)生標準的0.06 g/kg，也低于其他文獻報道的限度，方法靈敏度更高，適用于面條中低限度過氧化苯甲酰含量的測定。

4 結(jié)論

研究針對不同生產(chǎn)廠家加工的面條，通過優(yōu)化樣品前處理條件，建立了間接測定面條中過氧化苯甲酰的高效液相色譜方法。該方法操作簡單快捷、靈敏度和準確度高，適用于實際工作中面條中過氧化苯甲酰的測定，方法具有一定的優(yōu)勢。