竹根七化學成分的研究

李玉澤，梁小飛，王西林，宋 蓓，張化為，黃文麗，郭東艷，崔九成，宋小妹?

（1.陜西中醫(yī)藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046；2.西北大學生命科學學院，陜西 西安 710069）

竹根七為百合科開口箭屬植物開口箭Tupistra chinensisBaker.的根及根莖，屬于“太白七藥”之一，在陜西、湖北等地分布較廣泛，多作為民族民間用藥，具有清熱解毒、祛風除濕、散瘀止痛等功效，用于治療頭痛咳嗽、咽喉腫痛、跌打損傷等［1］。目前從該植物中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)甾體皂苷類、黃酮類、強心苷類等化合物［2］，甾體皂苷類是其主要成分［3］，為了有效利用竹根七資源，進一步開發(fā)秦巴山區(qū)特色藥用植物資源［4-5］，本課題對其化學成分進行系統(tǒng)研究，從中分離得到15 個化合物，其中甾體類14 個，化合物15 為首次從該屬植物中分離得到，化合物9～12 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

AVANCE 型核磁共振波譜儀（德國Burker 公司）；WFH-203 三用紫外分析儀（上海精科實業(yè)有限公司）；YMC-Pack Pro C18半制備色譜柱、ODS柱層析填料（日本YMC 公司）；LC-6AD 型半制備液相色譜儀（日本島津公司）；D-101 大孔吸附樹脂（天津南開大學化工廠）；柱色譜硅膠、薄層色譜用硅膠G（青島海洋硅膠干燥劑廠）；Sephadex LH-20 柱填料（美國Pharmacia 公司）。色譜甲醇和乙腈（美國Fisher 公司）；其他試劑均為分析純；水為超純水。

竹根七購自陜西眉縣，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學藥學院王繼濤高級實驗師鑒定為正品。

2 提取與分離

取干燥竹根七粗粉2 kg，8 倍量60%乙醇回流提取3 次，1.5 h／次，提取液合并減壓回收至無醇味，蒸餾水溶解至19 L，采用D-101 大孔吸附樹脂柱色譜，依次用水、20%、60%、95% 乙醇洗脫，得到的浸膏量分別為89、97、45 g。95%乙醇部位浸膏和等量硅膠粉干法拌樣后，8 倍樣品量的硅膠裝柱，經(jīng)硅膠柱色譜，三氯甲烷-甲醇（100∶0～50∶50）梯度洗脫，得6 個餾分Fr.1～9。Fr.2 反復采用硅膠柱色譜三氯甲烷-甲醇（100∶0～80∶20）和Sephadex LH-20 柱 色 譜 三 氯 甲 烷-甲 醇（50∶50）得化合物1（16 mg）、2（21 mg）、3（18 mg）、4（35 mg）；Fr.4 經(jīng)過硅膠柱色譜，用三氯甲烷-甲醇（100∶0～60∶40）梯度洗脫后，得3個餾分Fr.4-1～Fr.4-3；Fr.4-3 采用硅膠柱色譜三氯甲烷-甲醇（100∶0～60∶40）和結晶方法得化合物5（10 mg）、6（15 mg）、7（26 mg）、14（21 mg）。Fr.8 經(jīng)硅膠柱色譜三氯甲烷-甲醇（100∶0～50∶50）梯度洗脫，得4 個餾分Fr.8-1～Fr.8-4。Fr.8-2 采用ODS 柱色譜水-甲醇（100∶0～0∶100）和Sephadex LH-20 柱色譜水-甲醇（50∶50）洗脫得化合物8（15 mg）、9（23 mg），F(xiàn)r.8-3 和Fr.8-4 采用半制備液相方法水-甲醇（77∶23）等度洗脫得化合物10（11 mg）、11（16 mg）、12（22 mg）、13（16 mg）、15（11 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：白色針晶（甲醇），ESI-MSm／z：501.3 ［M+Na］+，分子式C27H42O7。1H-NMR（Pyrd5，600 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.88（3H，s，H-18），1.91（3H，s，H-19），1.08（3H，d，J=6.8 Hz，H-21），1 對末端烯氫δ4.83（1H，s，H-27a），4.79（1H，s，H-27b）；13C-NMR（Pyr-d5，150 MHz）δ：75.3（C-1），33.5（C-2），71.4（C-3），69.9（C-4），79.6（C-5），69.9（C-6），35.5（C-7），30.6（C-8），46.0（C-9），45.8（C-10），21.6（C-11），40.3（C-12），41.0（C-13），56.4（C-14），32.6（C-15），81.8（C-16），63.4（C-17），16.9（C-18），16.7（C-19），42.3（C-20），15.4（C-21），109.8（C-22），33.5（C-23），29.3（C-24），144.8（C-25），65.4（C-26），109.1（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］基本一致，故鑒定為tupichigenin B。

化合物2：白色針晶（甲醇），ESI-MSm／z：531.2 ［M+Na］+，分子式C27H40O9。1H-NMR（Pyrd5，500 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.88（3H，s，H-18），1.44（3H，s，H-19），1.06（3H，d，J=6.8 Hz，H-21），1 對末端烯氫δ4.83（1H，s，H-27a），4.75（1H，s，H-27b）；13C-NMR（Pyr-d5，125 MHz）δ：76.9（C-1），68.3（C-2），75.9（C-3），71.6（C-4），86.7（C-5），211.5（C-6），75.2（C-7），41.3（C-8），38.4（C-9），50.6（C-10），22.4（C-11），39.8（C-12），41.1（C-13），49.7（C-14），31.9（C-15），81.8（C-16），63.3（C-17），16.7（C-18），13.4（C-19），42.5（C-20），15.3（C-21），109.9（C-22），33.4（C-23），29.4（C-24），144.9（C-25），65.4（C-26），109.1（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］基本一致，故鑒定為1β，2β，3β，4β，5β，7α-hexahydroxy-spirost-25（27）-ene-6-one。

化合物3：白色針晶（甲醇），ESI-MSm／z：533.3 ［M+Na］+，分子式C27H42O9。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.93（3H，s，H-18），1.95（3H，s，H-19），1.05（3H，d，J=6.9 Hz，H-21），1 對末端烯氫δ4.76（1H，s，H-27a），4.74（1H，s，H-27b）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：80.1（C-1），67.6（C-2），76.1（C-3），70.2（C-4），78.7（C-5），74.1（C-6），72.2（C-7），35.1（C-8），40.0（C-9），46.2（C-10），21.8（C-11），40.2（C-12），40.8（C-13），50.5（C-14），32.4（C-15），82.0（C-16），63.5（C-17），16.7（C-18），16.0（C-19），42.5（C-20），15.4（C-21），109.9（C-22），33.6（C-23），29.4（C-24），144.9（C-25），65.4（C-26），109.0（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］基本一致，故鑒定為spirost-25（27）-ene-1β，2β，3β，4β，5β，6β，7α-heptol。

化合物4：白色無定型粉末，ESI-MSm／z：615.4 ［M+Na］+，分子式C33H52O9。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.84（3H，s，CH3-18），1.25（3H，s，CH3-19），1.23（3H，d，J=6.9 Hz，CH3-21），1 對末端烯氫δ4.82（1H，brs，H-27a），4.87（1H，brs，H-27b），1 個糖端基氫δ5.29（1H，d，J=7.7 Hz，H-Glc-1）；13CNMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：25.9（C-1），28.8（C-2），67.3（C-3），35.7（C-4），81.6（C-5），29.7（C-6），31.8（C-7），34.7（C-8），43.4（C-9），41.7（C-10），21.7（C-11），40.5（C-12），41.2（C-13），56.8（C-14），32.6（C-15），82.0（C-16），63.5（C-17），17.0（C-18），18.1（C-19），42.4（C-20），15.5（C-21），110.0（C-22），33.7（C-23），29.5（C-24），144.9（C-25），65.5（C-26），109.3（C-27），97.8（C-Glc-1），75.9（C-Glc-2），79.4（C-Glc-3），72.3（C-Glc-4），79.1（CGlc-5），63.5（C-Glc-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻 ［8］基本一致，故鑒定為（20S，22R）-3β，5β-diolspirost-25（27）-en-5-O-β-D-glucopyranoside。

化合物5：白色無定形粉末，ESI-MSm／z：453.3 ［M+Na］+，分子式C27H42O4。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括4 個甲基氫δ0.96（3H，s，H-18），1.38（3H，s，H-19），1.11（3H，d，J=6.7 Hz，H-21），0.68（3H，d，J=5.6 Hz，H-27），1 個烯氫δ5.64（1H，d，J=5.6 Hz，H-6）；13CNMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：75.2（C-1），40.7（C-2），66.3（C-3），40.8（C-4），139.9（C-5），124.4（C-6），32.2（C-7），31.6（C-8），51.1（C-9），44.4（C-10），24.2（C-11），40.4（C-12），40.0（C-13），56.8（C-14），32.2（C-15），80.8（C-16），62.9（C-17），16.4（C-18），13.1（C-19），41.8（C-20），14.8（C-21），109.0（C-22），32.7（C-23），29.0（C-24），30.4（C-25），66.6（C-26），17.1（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］基本一致，故鑒定為3-epiruscogenin。

化合物6：白色針晶（甲醇），ESI-MSm／z：485.1 ［M+Na］+，分子式C27H43O6。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.87（3H，s，H-18），1.63（3H，s，H-19），1.12（3H，d，J=7.3 Hz，H-21），1 對末端烯氫δ4.77（1H，s，H-27a），4.86（1H，s，H-27b）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：74.0（C-1），33.8（C-2），71.5（C-3），68.4（C-4），78.7（C-5），30.8（C-6），28.8（C-7），35.4（C-8），46.0（C-9），45.8（C-10），21.8（C-11），40.4（C-12），41.1（C-13），56.6（C-14），32.5（C-15），81.8（C-16），63.4（C-17），17.0（C-18），14.3（C-19），42.4（C-20），15.4（C-21），109.8（C-22），33.6（C-23），29.3（C-24），144.8（C-25），65.4（C-26），109.1（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻［6］基本一致，故鑒定為ranmogenin A。

化合物7：白色無定形粉末，ESI-MSm／z：711.3 ［M+Na］+，分子式C33H52O15。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.92（3H，s，H-18），1.45（3H，s，H-19），1.33（3H，d，J=6.9 Hz，H-21），1 對末端烯氫δ4.95（1H，s，H-27a），4.93（1H，s，H-27b），1 個糖端基氫δ4.74（1H，brs，H-Glc-1）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：76.3（C-1），67.6（C-2），75.1（C-3），70.9（C-4），86.1（C-5），211.0（C-6），75.3（C-7），37.7（C-8），40.8（C-9），50.0（C-10），21.7（C-11），39.2（C-12），40.7（C-13），49.0（C-14），31.5（C-15），80.9（C-16），63.6（C-17），16.1（C-18），12.9（C-19），40.5（C-20），16.2（C-21），110.5（C-22），37.7（C-23），28.2（C-24），147.0（C-25），71.9（C-26），110.2（C-27），103.7（C-Glc-1），75.0（C-Glc-2），78.4（C-Glc-3），70.9（C-Glc-4），78.4（C-Glc-5），62.6（C-Glc-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻 ［10］基本一致，故鑒定為5βfurost-Δ25（27）-en-1β，2β，3β，4β，5β，7α，22ξ，26-octaol-6-one-26-O-β-D-glucopyranoside。

化合物8：白色無定形粉末，ESI-MSm／z：673.3 ［M+Na］+，分子式C33H54O14。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.74（3H，s，H-18），1.96（3H，s，H-19），1.55（3H，s，H-21），1 對末端烯氫δ5.24（1H，s，H-27a），5.36（1H，s，H-27b），1 個糖端基氫δ4.86（1H，brs，H-Glc-1）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：79.6（C-1），67.2（C-2），75.2（C-3），69.8（C-4），78.2（C-5），73.6（C-6），72.0（C-7），34.4（C-8），37.5（C-9），45.9（C-10），21.5（C-11），39.6（C-12），43.3（C-13），48.5（C-14），31.1（C-15），84.7（C-16），64.7（C-17），15.5（C-18），14.2（C-19），104.0（C-20），11.8（C-21），151.7（C-22），34.3（C-23），24.6（C-24），146.2（C-25），71.7（C-26），111.7（C-27），103.8（C-Glc-1），75.6（C-Glc-2），78.6（C-Glc-3），71.7（CGlc-4），78.5（C-Glc-5），62.9（C-Glc-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻 ［11］基本一致，故鑒定為tupisteroide B。

化合物9：白色無定形粉末，ESI-MSm／z：615.4 ［M+Na］+，分子式C33H52O9。1H-NMR（Pyrd5，600 MHz）譜中，包括4 個甲基氫δ0.93（3H，s，H-18），1.27（3H，s，H-19），1.17（3H，d，J=6.7 Hz，H-21），0.67（3H，d，J=5.5 Hz，H-27），1 個烯氫δ5.65（1H，d，J=5.4 Hz，H-6），1 個糖端基氫δ4.97（1H，d，J=7.9 Hz，H-Glc-1）；13CNMR（Pyr-d5，150 MHz）δ：75.3（C-1），37.1（C-2），74.3（C-3），41.0（C-4），140.1（C-5），124.6（C-6），32.2（C-7），32.7（C-8），51.0（C-9），44.6（C-10），24.6（C-11），39.7（C-12），40.5（C-13），57.3（C-14），32.6（C-15），81.4（C-16），63.5（C-17），17.0（C-18），13.6（C-19），42.0（C-20），15.4（C-21），109.6（C-22），32.9（C-23），29.5（C-24），30.9（C-25），66.8（C-26），17.7（C-27），103.3（C-Glc-1），75.1（C-Glc-2），79.1（C-Glc-3），72.0（C-Glc-4），78.8（CGlc-5），63.2（C-Glc-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］基本一致，故鑒定為25（R）-1β-hydroxy-spirost-5-en-3α-ylO-β-D-glucopyranoside。

化合物10：白色無定形粉末，ESI-MSm／z：663.3 ［M+Na］+，分子式C33H52O12。1H-NMR（Pyrd5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ0.87（3H，s，CH3-18），1.06（3H，d，J=6.8 Hz，CH3-21），1.75（3H，s，CH3-19），1 對末端烯氫δ4.79（1H，s，H-27a），4.83（1H，s，H-27b），1 個糖端基氫δ5.25（1H，d，J=7.7 Hz，H-Glc-1）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：77.6（C-1），67.4（C-2），76.0（C-3），67.8（C-4），87.2（C-5），24.7（C-6），28.7（C-7），34.4（C-8），46.5（C-9），46.0（C-10），21.5（C-11），39.7（C-12），40.3（C-13），55.7（C-14），31.9（C-15），81.2（C-16），62.8（C-17），16.2（C-18），13.5（C-19），41.7（C-20），14.7（C-21），109.2（C-22），33.0（C-23），28.2（C-24），144.2（C-25），64.8（C-26），108.5（C-27），97.3（C-Glc-1），75.6（C-Glc-2），78.6（C-Glc-3），71.7（C-Glc-4），78.4（C-Glc-5），62.6（C-Glc-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］基本一致，故鑒定為aspidoside A。

化合物11：白色粉末，ESI-MSm／z：457.4［M+H］+，分子式C30H48O3。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）譜中，包括7 個甲基氫δ0.75（3H，s，H-23），0.77（3H，s，H-24），0.86（3H，s，H-25），0.88（3H，s，H-26），0.92（3H，s，H-29），0.95（3H，s，H-30），1.13（3H，s，H-27）；3.25（1H，dd，J=10.9，4.3 Hz，H-3），5.26（1H，t，J=3.3，3.8 Hz，H-12）；13C-NMR（100 MHz，CDCl3）δ：38.6（C-1），27.4（C-2），79.3（C-3），39.0（C-4），55.4（C-5），18.5（C-6），32.7（C-7），39.5（C-8），47.9（C-9），37.3（C-10），23.1（C-11），122.8（C-12），143.8（C-13），41.8（C-14），27.9（C-15），23.6（C-16），46.1（C-17），41.2（C-18），46.8（C-19），30.9（C-20），34.0（C-21），32.8（C-22），28.3（C-23），15.5（C-24），15.8（C-25），17.3（C-26），26.2（C-27），183.6（C-28），23.8（C-29），33.3（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14-15］基本一致，故鑒定為齊墩果酸。

化合物12：白色粉末，ESI-MSm／z：373.2［M+H］+，分子式C23H32O4。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）譜中，包括3 個甲基氫δ0.83（3H，s，18-CH3），1.87（3H，s，19-CH3），0.95（3H，d，J=6.8 Hz，21-CH3）；3.84（1H，d，J=12.2 Hz，H-26a），4.26（1H，d，J=12.4 Hz，H-26b），4.47（1H，m，16-H），4.75（1H，brs，H-27a），4.78（1H，brs，H-27a），6.19（1H，s，烯醇羥基）；13CNMR（100 MHz，CDCl3）δ：144.7（C-5），193.5（C-6），45.3（C-7），41.5（C-8），39.9（C-9），134.3（C-10），25.8（C-11），38.8（C-12），42.0（C-13），55.3（C-14），32.3（C-15），81.4（C-16），62.8（C-17），16.9（C-18），13.6（C-19），42.7（C-20），15.7（C-21），109.8（C-22），33.3（C-23），28.9（C-24），144.6（C-25），65.8（C-26），109.1（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］基本一致，故鑒定為1β，2β，3β，4β，5β，7α-hexahydroxy-spirost-25（27）-ene-6-one 衍生物Ⅱ。

化合物13：無色油狀物，ESI-MSm／z：493.3［M+H］+，分子式C27H40O8。1H-NMR（Pyr-d5，400 MHz）譜中，包括3 個甲基氫δ1.04（3H，s，H-18），1.33（3H，s，H-19），2.25（3H，s，H-21），2個烯氫δ5.66（1H，d，J=5.2 Hz，H-6），5.96（1H，d，J=5.9 Hz，H-16），1 個糖端基氫δ4.22（1H，d，J=7.2 Hz，H-Glc-1）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：75.8（C-1），37.5（C-2），75.6（C-3），39.8（C-4），140.4（C-5），124.3（C-6），32.8（C-7），31.3（C-8），51.9（C-9），46.1（C-10），24.1（C-11），36.2（C-12），44.7（C-13），57.1（C-14），33.3（C-15），145.7（C-16），156.9（C-17），16.8（C-18），13.6（C-19），196.5（C-20），27.9（C-21），和1 個葡萄糖（δ103.8，74.9，79.6，72.5，78.6，63.7）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］基本一致，故鑒定為tupichinin A。

化合物14：白色粉末，ESI-MSm／z：575.4［M+H］+，分子式C35H58O6。1H-NMR（Pyr-d5，400 MHz）δ：5.43（1H，m，H-6），2.51（1H，m，H-17），0.68（3H，s，H-18），0.95（3H，s，H-19），0.96（3H，d，J=6.5 Hz，H-21），0.89（3H，d，J=6.9 Hz，H-27），0.92（3H，t，J=7.4 Hz，H-29），4.88（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-1）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：37.6（C-1），30.4（C-2），78.3（C-3），39.5（C-4），141.1（C-5），122.1（C-6），32.2（C-7），32.3（C-8），50.5（C-9），37.1（C-10），21.4（C-11），40.0（C-12），42.6（C-13），57.0（C-14），24.7（C-15），29.4（C-16），56.2（C-17），12.7（C-18），19.2（C-19），40.9（C-20），21.6（C-21），139.0（C-22），129.6（C-23），51.6（C-24），32.2（C-25），21.4（C-26），20.1（C-27），25.8（C-28），12.7（C-29），102.7（C-Glc-1），75.5（C-Glc-2），78.8（CGlc-3），71.9（C-Glc-4），78.6（C-Glc-5），63.0（C-Glc-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻［18-20］基本一致，故鑒定為β-豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物15：白色粉末，ESI-MSm／z：577.4［M+H］+，分子式C35H52O8。1H-NMR（Pyr-d5，400 MHz）譜中，包括4 個甲基氫δ0.85（3H，s，CH3-18），1.03（3H，s，CH3-19），1.17（3H，d，J=7.2 Hz，CH3-21），0.73（3H，d，J=5.8 Hz，CH3-27），1 個糖端基氫δ4.95（1H，d，J=7.9 Hz，H-Glc-1），1 個烯氫δ5.43（1H，dd，J=2.8，4.8 Hz，H-6）；13C-NMR（Pyr-d5，100 MHz）δ：33.4（C-1），27.0（C-2），74.3（C-3），39.2（C-4），140.5（C-5），121.9（C-6），32.5（C-7），31.6（C-8），50.2（C-9），37.9（C-10），21.3（C-11），40.6（C-12），41.2（C-13），57.5（C-14），32.4（C-15），81.7（C-16），63.4（C-17），16.6（C-18），19.4（C-19），42.6（C-20），15.7（C-21），109.6（C-22），33.5（C-23），29.6（C-24），32.1（C-25），67.5（C-26），17.9（C-27）和1 個葡萄糖（δ103.3，75.7，79.2，72.5，79.3，63.6）。以上數(shù)據(jù)與文獻［21］基本一致，故鑒定為3-epi-diosgenin-3-β-Dglucopyranoside。

4 討論與結論

從竹根七中分離鑒定了15 個化合物，其中甾體類化合物14 個，化合物15 為首次從開口箭屬中分離得到，化合物9～12 為首次從該植物中分離得到。本實驗進一步豐富了竹根七的化學成分，為后續(xù)的質(zhì)量標準和藥理研究提供了基礎。

竹根七中甾體類化合物在A 環(huán)一般具有多個羥基，導致其與糖苷類化合物極性相近，在分離上有一定難度。采用反相柱層析分離時，乙腈-水作為流動相時分離度較高，峰型好，然而化合物對其極性變化極為敏感，在操作中要精確兩者比例。對于糖鏈相同呋甾皂苷元上羥基數(shù)目有差別的化合物，在正相色譜中不能分離開，而在HPLC 上的保留時間卻有明顯差別，表明多羥基甾體皂苷采用反相填料分離效果較好。

竹根七中的甾體皂苷類化合物在結構上有明顯特征，一般在A 環(huán)和B 環(huán)上連有多個羥基，并且大多數(shù)含有Δ25（27）雙鍵。對于螺甾皂苷，若有Δ25（27）雙鍵，27 位碳上的烯氫化學位移一般為4.81±0.5（H-27a，s）和4.84±0.5（H-27b，s）；對于呋甾皂苷，若有Δ25（27）雙鍵，27 位碳上的烯氫化學位移一般為5.3±0.5（H-27a，s）和5.1±0.5（H-27b，s）。