黃藥子黃獨素B活性、毒性及配伍減毒

李軍 劉晨 王君明,2陳榮幸 蔡泓 崔瑛,2

(1河南中醫(yī)藥大學，河南 鄭州 450046；2河南中醫(yī)藥大學呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心)

黃藥子為薯蕷科薯蕷屬植物黃獨(Dioscorea bulbiferaL.)的干燥塊莖，主產(chǎn)于湖北、湖南、江蘇等地，藥性苦、寒，有小毒，歸肺、肝、心經(jīng)，具有化痰散結(jié)消癭、清熱涼血解毒之功效，常用于治療癭瘤、瘰疬、瘡腫、血熱出血等病證〔1〕。研究表明，黃藥子具有防治宮頸癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌、直腸癌、乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、上頜竇癌、膀胱癌、甲狀腺疾病、心肌缺血、心肌梗死、獲得性免疫缺陷綜合征、糖尿病等廣泛的生物活性〔2～10〕。然而，黃藥子在使用過程中也可引起毒性尤其是肝毒性〔11〕，一定程度上限制了其療效的發(fā)揮和應(yīng)用?，F(xiàn)代研究表明，以黃獨素B(DB)為代表的二萜內(nèi)酯類成分，既是黃藥子的活性成分，又是其毒性成分〔12〕。本文就黃藥子DB的研究進展進行綜述，旨在闡釋近年來關(guān)于DB的活性、毒性及配伍減毒的研究現(xiàn)狀及對策，以期為促進DB安全有效應(yīng)用的現(xiàn)代研究提供文獻依據(jù)。

1 DB活性研究

1.1 抗腫瘤活性 Wang等〔13〕在小鼠S180和H22兩種實體瘤腫瘤模型上，考察了黃藥子活性部位及單體化合物DB的抗腫瘤活性，結(jié)果顯示，黃藥子乙醇提取物及其乙酸乙酯活性部位、DB分別在200、40、2～16 mg/kg劑量下，灌胃給藥14 d，均呈現(xiàn)出了良好的抗腫瘤活性，且DB的活性呈現(xiàn)出良好的劑量依賴性關(guān)系；進一步根據(jù)提取物和部位中DB的含量與DB抗腫瘤活性的相關(guān)分析，證實了DB為黃藥子抗腫瘤的主要活性成分。此外，Gao等〔14〕通過體外實驗考察了DB對12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)刺激下的JB6細胞的致瘤性的影響，結(jié)果表明，DB明顯抑制了TPA刺激下的JB6細胞的致瘤性，其半數(shù)抑制濃度(IC50)為91.0 μg/ml。

1.2 抗炎活性 李俊萱等〔15〕在大鼠角叉菜膠所致足腫脹及棉球所致肉芽腫兩種炎癥模型上，考察了DB的抗炎活性，結(jié)果顯示，阿司匹林對照組、DB組分別在200、200 mg/kg劑量下，灌胃給藥5 d后，均呈現(xiàn)出了良好的抗炎活性，即DB對大鼠角叉菜膠所致的足腫脹及棉球肉芽腫均有顯著的抑制作用，其分別在致炎后0.5～6 h、0.5～4 h時均能顯著抑制大鼠足腫脹，且對棉球肉芽腫抑制率分別為75%、104%。

綜上可知，關(guān)于DB生物活性的研究，目前主要體現(xiàn)在抗腫瘤、抗炎活性方面，然而其抗腫瘤、抗炎活性機制，目前均不太清楚。此外，DB對其他腫瘤細胞有無抗腫瘤活性，DB在抗腫瘤和抗炎之外的活性如何，目前均為未知。

2 DB毒性研究

DB是一種呋喃化合物，其肝毒性主要在其結(jié)構(gòu)的呋喃部分表現(xiàn)出來〔16〕。Li等〔16〕通過用DB呋喃環(huán)的化學氫化替代了其呋喃與四氫呋喃團的方法考察了DB產(chǎn)生肝毒性的主要部位，結(jié)果顯示，呋喃部分能誘導動物的肝損傷，即在給予相同劑量的四氫-DB的動物中沒有出現(xiàn)肝損傷。

以下為DB引起肝損傷的分子作用機制。國外有學者通過“肝毒性當量組合標記物”的篩查策略及指紋圖譜相關(guān)性模型考察了黃藥子中潛在的毒性成分，結(jié)果顯示二萜內(nèi)酯類成分DB存在潛在的肝毒性〔17〕。Yang等〔18〕將通過體外實驗考察了DB對小鼠血清miRNAs表達的影響，miRNAs芯片分析結(jié)果顯示，DB產(chǎn)生顯著的肝毒性，明顯使血清miRNA-122-3p和miRNA-194-5p的表達顯著增加，并且有37個血清miRNAs發(fā)生明顯改變。Qu等〔19〕通過Western印跡和PCR實驗考察了DB對小鼠肝膽轉(zhuǎn)運蛋白和mRNA水平表達的影響，結(jié)果表明，DB存在肝毒性并使膽紅素主要轉(zhuǎn)運子Mrp2的表達發(fā)生明顯下調(diào)。Ma等〔20〕將通過體外實驗考察了DB對小鼠肝細胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)，銅/鋅-超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)，錳-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和過氧化氫酶(CAT)含量的影響，結(jié)果表明，DB產(chǎn)生氧化應(yīng)激肝損傷從而引起小鼠肝細胞中MDA含量增加，而GPX、GST、CuZn-SOD、Mn-SOD和CAT含量均下降。Xu等〔21〕通過體外實驗考察了DB對小鼠膽汁酸中?；撬崦撗跄懰?TUDCA)，?；巧窠?jīng)脫氧膽酸(TCDCA)，牛磺膽酸(TCA)，牛磺脫氧膽酸(TDCA)，膽酸(CA)的影響，結(jié)果顯示，DB有明顯的肝毒性，膽汁酸較對照組之間的差異性十分顯著(P<0.01)。這幾項實驗為進一步探索黃藥子致肝毒性的機理和評價提供文獻依據(jù)。

3 DB的配伍減毒研究

3.1 阿魏酸對DB的減毒研究 阿魏酸為藥用植物當歸的主要活性成分。Niu等〔22〕等通過實驗考察了阿魏酸對DB的減毒作用機制，結(jié)果顯示，阿魏酸分別在20、40、80 mg/kg劑量下，灌胃給藥6 d，在第7天灌胃給藥劑量為250 mg/kg的DB后，呈現(xiàn)出了良好的減毒作用，其可以通過抑制肝內(nèi)炎癥和肝細胞凋亡來防止DB誘導的急性肝損傷，即能夠顯著降低DB誘導的小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT/AST)、堿性磷酸酶(ALP)血清水平的升高，降低DB增加的MDA的量，也降低了DB增加的血清腫瘤壞死因子(TNF)-α、干擾素γ和肝髓過氧化物酶的活性。有學者發(fā)現(xiàn)阿魏酸不僅能夠抑制DB誘導的肝損傷，還能增強其抗腫瘤作用〔23〕。

3.2 燈盞花乙素(SC)對DB的減毒研究 SC為藥用植物黃芩中的主要活性成分。Niu等〔23〕在S180荷瘤小鼠實體模型上考察了SC的減毒作用機制，結(jié)果顯示，SC能減輕核因子(NF)-κB介導的肝臟炎癥和改善肝臟氧化應(yīng)激損傷來抑制DB引起的肝損傷，其顯著降低DB誘導的肝臟的過氧化物酶(MPO)活性增加、MDA的含量增加、血清TNF-α、白細胞介素(IL)-6和干擾素(IFN)-γ的升高，并且降低MPO陽性染色細胞數(shù)量，逆轉(zhuǎn)了DB誘導的NF-κB抑制劑表達下調(diào)和NF-κB p65從細胞質(zhì)向細胞核的轉(zhuǎn)位，同時也能增加肝臟谷胱甘肽(GSH)水平。

3.3 酮康唑?qū)B的減毒研究 酮康唑?qū)儆谶量╊惪拐婢?。Wang等〔24〕通過體外實驗考察了酮康唑?qū)B(200 μm)刺激下小鼠肝微粒體(1 mg/ml)的影響及機制，結(jié)果表明，酮康唑能夠抑制其親電反應(yīng)中間體的蛋白質(zhì)共價結(jié)合從而對DB誘導的肝毒性產(chǎn)生顯著的抑制作用，其可減少DB誘導的半胱氨酸(Cys)和賴氨酸(Lys)殘基與中間體反應(yīng)形成三種類型的蛋白質(zhì)修飾即Cys加合、Schiff堿和Cys/Lys交聯(lián)的形成。Jiang等〔25〕也通過體外實驗考察了酮康唑?qū)B誘導的原代大鼠肝細胞、無CYP的NIH3T3細胞、高CYP3A4表達的HepG2和LO2細胞所致毒性的影響及機制，結(jié)果表明，酮康唑明顯抑制了DB對原代大鼠肝細胞、CYP3A4轉(zhuǎn)染的HepG2和LO2細胞的毒性。

綜上所述，關(guān)于DB的活性、毒性及配伍減毒的現(xiàn)代研究已取得些許進展，主要體現(xiàn)在：①DB具有抗腫瘤、抗炎等生物活性，但同時具有肝毒性。②肝毒機制涉及氧化應(yīng)激性損傷、炎癥反應(yīng)、上調(diào)血清miRNA的表達、下調(diào)MRP2的表達、增加MDA含量而降低GPX、GST、CuZn-SOD、Mn-SOD和CAT含量、改變膽汁酸的含量等。③阿魏酸、SC、酮康唑?qū)B所致的肝毒性均有一定的減毒作用，其減毒機制可能涉及抑制肝臟炎癥、細胞凋亡、氧化應(yīng)激損傷、細胞色素P450 3A4酶(CYP3A4)轉(zhuǎn)染等。盡管關(guān)于DB的現(xiàn)代研究已取得以上諸多進展，但依然存在較多問題，突出表現(xiàn)在研究不夠深入、研究面太窄、研究不夠系統(tǒng)等方面。例如，對于DB抗腫瘤和抗炎活性的作用機制、作用靶點的研究均尚未涉及，研究不夠深入；又如，目前活性研究主要集中在抗腫瘤和抗炎兩個方面，而對于其他方面的活性的研究罕見，毒性研究也主要集中在肝毒性的研究，而對于可能的腎毒性或其他臟器毒性的研究少見，因此研究面尚比較窄。再如，毒性和活性的相關(guān)性、安全窗口的制定、藥(毒)代動力學等研究少見，研究不夠系統(tǒng)。因此，下階段加強對其廣度、深度和系統(tǒng)性的研究，將會是DB重要的研究方向。