中華小苦荬化學(xué)成分的研究

梁 爽， 盧森華， 吳秀彩， 朱 華*

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧530022；2.廣西民族大學(xué)，廣西 南寧530006；3.玉林市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，廣西 玉林537000）

中華小苦荬為菊科小苦荬屬中華小苦荬Ixeriduim chinese（Thunb.） Tzvel.的全草。具有清熱解毒、涼血消腫等功效，用于治療肺癰、乳癰、痢疾腸炎及無名腫痛等多種疾?。?］，是1 種重要的民間藥物，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明中華小苦荬具有抗炎保肝、抗氧化、抗菌等生物活性［2］，植物化學(xué)研究顯示其主要含有二萜、黃酮、木脂素、鞣質(zhì)和有機(jī)酸類［3-12］。為進(jìn)一步研究其化學(xué)成分，尋找新的具有較好活性的抗炎、抗氧化、抗腫瘤先導(dǎo)化合物以及為定量測(cè)定研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)中華小苦荬的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，從中分離13 個(gè)化合物，其中化合物2、5、8、11～13 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Waters Autospec Premier 776 質(zhì)譜儀（瑞士Waters 公 司）； Bruker Avance Ⅲ800 MHz、 Drx-600 MHz、Drx-500 MHz、AV-400 MHz 核磁共振儀（德國(guó)Bruke 公司）；TD 電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；XT4-100A 顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（北京科儀電光儀器廠）；Agilent 1100 高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司）。葡聚糖凝膠Sephadex LH-20（美國(guó)GE 公司）；薄層色譜硅膠GF254、柱層析硅膠（青島海洋化工廠）。試劑（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；豆甾醇對(duì)照品（批號(hào)83-48-7）、β-谷甾醇（批號(hào)83-46-5）、β-胡蘿卜苷（批號(hào)474-58-8） 均購(gòu)自上海廣銳生物科技有限公司。

中華小苦荬購(gòu)自廣西玉林藥材市場(chǎng)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授鑒定為菊科植物中華小苦荬Ixeriduim chinese（Thunb.） Tzvel.的干燥全草，標(biāo)本（SKM20161009） 存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心。

2 提取與分離

中華小苦荬藥材粗粉13.8 kg，加10 倍量95%乙醇滲漉提取3 周，合并提取液，減壓回收溶劑得醇提物，依次用石油醚、乙酸乙酯、氯仿萃取，得相應(yīng)部位浸膏分別為105.7、102.3、78.5 g。氯仿部位70 g 經(jīng)硅膠柱分離，以氯仿-丙酮梯度洗脫（100 ∶0、80 ∶1、60 ∶1、50 ∶1、30 ∶1、15 ∶1、10 ∶1、8 ∶1、5 ∶1、1 ∶1、0 ∶1），得15 個(gè)組分A～O。組分B 經(jīng)硅膠柱， 氯仿-丙酮梯度洗脫，Sephadex LH-20 柱色譜純化，重結(jié)晶，得化合物1（17 mg）、3 （14.4 mg）、4 （9.2 mg）、5 （16.3 mg）。 組分G 經(jīng)硅膠柱， 氯仿-丙酮梯度洗脫，Sephadex LH-20 柱色譜純化，甲醇重結(jié)晶得化合物7（6.7 mg）、9（7.1 mg）。組分H 經(jīng)硅膠柱，氯仿-丙酮洗脫，Sephadex LH-20 柱色譜純化，甲醇反復(fù)重結(jié)晶得化合物10 （16.6 mg）、11 （9.6 mg）。乙酸乙酯部位100 g 經(jīng)硅膠柱分離，氯仿-甲醇梯度洗脫 （100 ∶0、80 ∶1、60 ∶1、50 ∶1、30 ∶1、15 ∶1、10 ∶1、8 ∶1、5 ∶1、1 ∶1、0 ∶1），得8 個(gè)組分A～H。組分C 經(jīng)硅膠柱，甲醇-水梯度洗脫，得化合物2（6.5 mg）、8（10.3 mg）、13（12.9 mg）。組分G 經(jīng)硅膠柱，甲醇-水梯度洗脫，得化合物6（9.7 mg）、12（11.8 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MS m／z：303.26［M＋H］＋，mp 315～316 ℃。與三氯化鋁反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，紫外光下觀察為黃綠色熒光，推測(cè)所得的物質(zhì)為黃酮類。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz） δ：12.48（1H，s，5-OH），7.66（1H，d，J ＝11.8 Hz，H-2′），7.53 （1H， d， J ＝7.8 Hz，H-6′），6.88 （1H， d， J ＝7.8 Hz， H-5′），6.41（1H，d，J ＝1.8 Hz， H-8），6.17 （1H， d， J ＝1.8 Hz， H-6）， 譜 中δ： 8.08 （1H， s）， 8.44（1H，s），8.67（1H，s），9.91（1H，s），12.18（1H，s） 分別為3′-OH、3-OH、4′-OH、7-OH、5-OH 的 信 號(hào)；13C-NMR （100 Hz， DMSO-d6） δ：145.5 （C-2）， 136.1 （C-3）， 176.2 （C-4），158.2（C-5），98.5 （C-6），164.3 （C-7），93.6（C-8），159.8 （C-9） 103.4 （C-10） 122.3 （C-1′），115.7 （C-2′）， 146.9 （C-3′）， 148.1 （C-4′），115.3（C-5′），120.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］ 基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物2：黃色針晶（丙酮），mp 262～264 ℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性。ESI-MS m／z：331.42［M＋H］＋。1H-NMR （DMSO-d6， 500 MHz） δ： 12.79（1H，s） 歸屬于5 位上羥基信號(hào)；10.41（2 H，brs，7， 4′-OH）； 7.88 （2H， d， J ＝8.9 Hz），6.83（2H，d，J ＝8.9 Hz） 2 個(gè)雙重峰分別歸屬2′、6′和3′、5′的質(zhì)子信號(hào)；6.76（1H，s） 為3位質(zhì)子信號(hào)；3.82（3H，s，-OCH3），3.76（3H，s，-OCH3） 為2 個(gè)-OCH3的質(zhì)子信號(hào)；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：163.2（C-2），109.4（C-3），182.7 （C-4），156.2 （C-5）， 96.5 （C-6），159.0（C-7），128.9（C-8），149.6（C-9），104.4（C-10），125.9（C-1′），146.8（C-2′），116.9（C-3′）， 124.5 （C-4′）， 122.9 （C-5′）， 61.8 （6-OCH3），57.0（8-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為5，7，4′-三羥基-6，8-二甲氧基黃酮。

化合物3：淡黃色粉末，mp 328 ～329 ℃。鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陰性，ESI-MS m／z：287.36［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.58（1H，s，3-H），12.94（1H，s，5-OH），6.10（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-6），6.36（1H，d，J ＝2.1 Hz，H-8），可以肯定H 中有2 個(gè)為鄰位，而δ 6.10 和δ 6.36 可知為6 位和8 位的；6.85（1H，d，J ＝8.2 Hz，H-5′），7.36（1H，dd，J ＝8.9，2.2 Hz，H-6′），7.38（1H，d，J ＝2.2 Hz，H-2′） 表示B 環(huán)為ABX 自旋系統(tǒng)，存在3′，4′-二羥 基；13C-NMR （DMSO-d6） δ： 164.1 （C-2），102.8（C-3），181.7（C-4），116.9（C-5），99.9（C-6），167.0 （C-7），94.7 （C-8），157.9 （C-9）， 103.2 （C-10）， 121.2 （C-1′）， 113.2 （C-2′），146.2 （C-3′）， 151.3 （C-4′）， 116.4 （C-5′），119.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］ 基本一致，故鑒定為木犀草素。

化合物4： 白色粉末 （氯仿）， Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)呈陰性。與β-谷甾醇對(duì)照品薄層色譜鑒定，用3 種不同極性的溶劑系統(tǒng)展開，結(jié)果二者Rf 值及顯色行為一致［16］，并且與對(duì)照品混合后熔點(diǎn)不降低，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物5： 無色針晶 （石油醚-氯仿-甲醇），mp 224 ～225 ℃。EI-MS m／z：426.35［M］＋，408［M-H2O］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ：5.59（1H，dd，J ＝8.0，3.0 Hz， H-15），3.28 （1H，dd，J ＝11.0，4.0 Hz，H-3），2.09（1H，dt，J ＝13.0， 3.5 Hz， H-16b）， 1.95 （1H， dd， J ＝15.0，3.0 Hz，H-16a）， 其中1.11 （3H， s， H-26）， 0.99 （3H， s， H-23）， 0.97 （3H， s， H-28）， 0.93 （3H， s， H-25）， 0.92 （3H， s， H-27）， 0.91 （3H， s， H-30）， 0.95 （3H， s， H-28），0.85（3H，s，H-24） 為8 個(gè)CH3中H 的信號(hào)，且結(jié)構(gòu)中有1 個(gè)羥基和1 個(gè)雙鍵；13C-NMR（100 MHz，CDCl3） δ：38.2（C-1），28.3（C-2），80.1（C-3）， 37.9 （C-4）， 55.8 （C-5）， 18.5（C-6），41.1（C-7），40.0（C-8），48.7（C-9），38.2（C-10），17.7（C-11），32.9（C-12），35.4（C-13）， 157.8 （C-14）， 117.4 （C-15）， 37.2（C-16），35.5（C-17），48.1 （C-18），36.6 （C-19），29.1（C-20），33.5（C-21），35.3（C-22），28.3（C-23），15.6（C-24），15.5（C-25），26.2（C-26），21.6（C-27），30.2 （C-28），33.5 （C-29），30.2（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］ 基本一致，故鑒定為蒲公英萜醇。

化合物6：黃色粉末（甲醇）。鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽性，Molish 反應(yīng)為陽性，提示該化合物為黃酮苷類，EI-MS m／z：432.38［M］＋。1H-NMR（DMSOd6，500 MHz） δ： 6.81 （1H， s， H-3）， 6.43（1H，d， J ＝2.1 Hz， H-6），6.84（1H， d， J ＝2.1 Hz，H-8）；7.92（2H，d，J ＝8.0 Hz），6.91（2H，d，J ＝8.7 Hz） 2 個(gè)雙重峰分別歸屬為2′、6′和， 3′、 5′位 的 質(zhì) 子 信 號(hào)； 12.5 （1H， s， 5-OH）， 10.42 （1H， s， 4′-OH）， 5.08 （1H， d，J ＝6.1 Hz，Glc-H-1″），3.75 ～3.31 （6H，m，糖基 質(zhì) 子）；13C-NMR （DMSO-d6， 100 MHz） δ：161.2 （C-2）， 102.8 （C-3）， 181.9 （C-4），163.3（C-5），100.2（C-6），159.5（C-7），91.9（C-8），160.8（C-9），105.1（C-10），121.4（C-1′），129.3 （C-2′）， 115.8 （C-3′）， 156.9 （C-4′），117.1（C-5′），129.1（C-6′）。糖區(qū)碳信號(hào)δ： 99.8 （C-1″）、 72.9 （C-2″）、 77.1 （C-3″）、69.4（C-4″）、76.7（C-5″）、61.2（C-6″） 提示該糖是葡萄糖，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］ 基本一致，故鑒定為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化 合 物7： 白 色 粉 末， mp 290 ～292 ℃。Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽性， Molish 反應(yīng)呈陽性，經(jīng)酸水解，用PC 檢出含有葡萄糖，表明該化合物為甾體苷類。硅膠薄層色譜檢識(shí)，3 種不同極性的溶劑系統(tǒng)展開，結(jié)果二者Rf 值及顯色行為一致［18］，并且與對(duì)照品混合后熔點(diǎn)不降低，故鑒定為β-胡蘿卜苷。

化合物8：無色粉末， 硫酸香草醛顯紅色，mp190 ～193 ℃，ESI-MS m／z：426.32［M］＋。1HNMR（300 MHz，CDCl3） δ：4.69（1H，brs，H-30a），4.56（1H，brs，H-30b） 顯示1 個(gè)雙鍵質(zhì)子信號(hào)，表明該化合物具有不飽和基團(tuán)。3.18（1H，dd，J ＝11 Hz，5.4 Hz，H-3），其中1.68（3H， s， H-30）， 1.01 （3H， s， H-26）， 0.95（3H， s， H-27）， 0.91 （3H， s， H-23）， 0.88（3H， s， H-25）， 0.78 （3H， s， H-28）， 0.76（3H，s，H-24） 為7 個(gè)角甲基信號(hào)，符合三萜類氫譜 高 場(chǎng) 區(qū) 的 信 號(hào) 特 征；13C-NMR （75 MHz，CDCl3） δ：37.8 （C-1），28.5 （C-2），76.9 （C-3）， 39.2 （C-4）， 55.6 （C-5）， 17.8 （C-6），35.8（C-7）， 41.2 （C-8）， 51.4 （C-9）， 36.7（C-10），21.7（C-11），25.6 （C-12），38.7 （C-13），42.5（C-14），28.3（C-15），38.2（C-16），35.6 （C-17）， 47.8 （C-18）， 39.7 （C-19），154.2 （C-20）， 26.5 （C-21）， 41.8 （C-22），28.2（C-23），15.8（C-24），16.6（C-25），16.9（C-26），16.2（C-27），21.2（C-28），109.4（C-29），26.8（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］ 基本一致，故鑒定為蒲公英甾醇。

化合物9：淺黃色粉末（丙酮），鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈陽性， ESI-MS m／z：270.24［M］＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz） δ：12.99（1H，s，5-OH），10.81（1H， brs， 7-OH）， 10.46 （1H， brs， 4′-OH），7.93（2H，d，J ＝8.7 Hz），6.95（2H，d，J ＝8.7 Hz） 分別為2′、6′和3′、5′位的質(zhì)子信號(hào)；6.8（1H，s， H-3），6.51（1H， d， J ＝2.0 Hz，H-8），6.20（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-6），可以看出B 環(huán)上單輕基取代；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：165.4（C-2），104.9（C-3），182.9（C-4），162.6（C-5），99.87（C-6），164.10（C-7），96.1 （C-8）， 157.8 （C-9）， 104.8 （C-10），121.76（C-1′），128.4（C-2′，6′），117.9（C-3′，5′），163.5（C-4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［18］ 基本一致，故鑒定為芹菜素。

化合物10：無色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)145～146 ℃。醋酐-濃硫酸反應(yīng)陽性，香草醛-濃硫酸反應(yīng)顯色為紫紅色，提示該化合物可能為甾體。與豆甾醇對(duì)照品共薄層色譜鑒定，用3 種不同極性的溶劑系統(tǒng)展開，結(jié)果二者Rf 值及顯色行為一致［20］，并且與對(duì)照品混合后熔點(diǎn)不降低，故鑒定為豆甾醇。

化合物11：無色粉末，mp 213 ～215 ℃，硫酸香草醛顯紅色； ESI-MS m／z： 468.35［M］＋。1HNMR（300 MHz，CDCl3）δ：4.69 （1H，brs，H-29a），4.52（1H，brs，H-29b），4.45（1H，dd，J ＝ 5.5 Hz， 11 Hz， H-3）， 2.12 （3H， s，-CH3CO），其中1.11（3H，s，H-30），1.05（3H，s，H-26），0.94（3H，s，H-27），0.86（3H，s，H-23），0.83（3H，s，H-25），0.82（3H，s，H-28），0.81（3H，s，H-24） 為7 個(gè)角甲基信號(hào)；δ 2.12 為乙?；系募谆鶜湫盘?hào)；13C-NMR （75 MHz，DMSO-d6） δ：39.3 （C-1）， 27.9 （C-2），80.1（C-3）， 37.5 （C-4）， 54.6 （C-5）， 19.1（C-6），33.2（C-7），40.9（C-8），50.1（C-9），38.2（C-10），21.6（C-11），24.8（C-12），39.1（C-13），41.1（C-14），27.3 （C-15），38.7 （C-16），37.1（C-17），50.2（C-18），40.1（C-19），152.3 （C-20）， 25.8 （C-21）， 38.3 （C-22），28.2（C-23），17.3（C-24），16.1（C-25），16.4（C-26），14.9（C-27），20.1（C-28），107.7（C-29）， 25.1 （C-30）， 171.2 （COCH3）， 21.4（COCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［21］ 基本一致，故鑒定為蒲公英甾醇乙酸酯。

化合物12：黃綠色粉末（甲醇），mp 236～238 ℃，ESI-MS m／z：448.38［M］＋，分子式C12H20O11，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯紅色提示為黃酮類。鋯鹽-枸椽酸反應(yīng)，加酸后黃色減退，提示結(jié)構(gòu)中有5-OH 但無3-OH。1H-NMR （500 MHz， DMSO-d6） δ： 12.88（1H， s，5-OH），7.39 （1H， dd， J ＝8.4，2.2 Hz），7.42（2H，d，J ＝2.2 Hz），7.10（1H，d，J ＝8.4 Hz） 分別分6′、2′、5′位的質(zhì)子信號(hào)，6.82（1H，d，J ＝2.1 Hz，H-8），6.75（1H，s，H-3），6.51（1H，d，J ＝2.1 Hz，H-6），5.09（1H，d，J ＝ 7.5 Hz， Glc-H-1″）；13C-NMR （125 MHz，DMSO-d6） δ：164.6（C-2），103.9（C-3），179.8（C-4），157.1 （C-5），100.3 （C-6），163.5 （C-7），96.7（C-8），161.2（C-9），105.3 （C-10），120.4 （C-1′）， 113.5 （C-2′）， 149.7 （C-3′），146.5 （C-4′）， 116.8 （C-5′）， 121.2 （C-6′），99.8（Glc-C-1″）， 73.1 （Glc-C-2″）， 76.3 （Glc-C-3″），70.2（Glc-C-4″），77.1 （Glc-C-5″），61.6（Glc-C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［22］ 基本一致，故鑒定為木犀草苷。

化合物13：白色針晶（石油醚-丙酮）。ESIMS m／z：279［M ＋Na］＋，相對(duì)分子質(zhì)量256。1HNMR（600 MHz， CDCl3） δ：2.37 （2H， t， J ＝7.7 Hz， H-2）， 1.63 （2H， m， H-3） 推 測(cè) 為-CH2CH2COO-結(jié)構(gòu) 片 段； 1.18 ～1.29 （24H， m，H-4～H-15），提示為12 個(gè)-CH2-信號(hào)；0.94（3H，t，J ＝6.4 Hz，H-16） 為1 個(gè)甲基信號(hào)；13C-NMR（150 MHz， CDCl3） δ：180.2 （C-1），33.2 （C-2），31.4（C-3），29.2～30.1（C-4 ～C-13），32.4（C-14），22.5（C-15），14.3 （C-16），13.8 （C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［22］ 基本一致，故鑒定為棕櫚酸。