miRNA與動脈粥樣硬化炎癥機制研究進(jìn)展①

顧燕妮 謝春毅

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心內(nèi)科，上海200082)

非特異性炎癥是為防御其他有機體侵襲導(dǎo)致細(xì)胞損傷的一種自我防御機制。但慢性炎癥反應(yīng)通常是有害的，慢性炎癥性疾病(Chronic inflammatory diseases，CID)往往造成社會和經(jīng)濟的重大損失，如動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)、代謝綜合征、神經(jīng)退行性病變和腫瘤等。AS是CID中主要的疾病之一[1]。此外大量研究證明，單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)和中性粒細(xì)胞參與血管壁的免疫反應(yīng)，細(xì)胞免疫、體液免疫及非特異性免疫應(yīng)答均參與AS的形成和發(fā)展[2]。

microRNA(miRNA)是長度在21～25 nt的內(nèi)源性非編碼RNA，廣泛存在于真核生物中，是一類重要的調(diào)控蛋白質(zhì)生物合成的非編碼RNA。成熟的miRNA 5′端為磷酸基團，3′端為羥基，它通過RNA聚合酶Ⅱ生成較長的具有莖-環(huán)結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄體前體miRNA (pri-miRNA)，在體內(nèi)pri-miRNA被特異性 RNase Ⅲ類核酸內(nèi)切酶(Drosha酶)切割，產(chǎn)生約70 nt大小具有發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)的RNA前體(pre-miRNA)。在細(xì)胞質(zhì)中，pre-miRNA 經(jīng)過 Dicer酶加工生成約22 nt雙螺旋結(jié)構(gòu)的雙鏈RNA，隨后指導(dǎo)鏈(Guide chain)與特定的蛋白質(zhì)(Agonate)組裝成miRNA誘導(dǎo)的靜默復(fù)合體(miRNA-induced silencing complex,miRISC)，與mRNA結(jié)合從而抑制蛋白質(zhì)翻譯表達(dá)。miRNA在細(xì)胞增殖、發(fā)育和組織重塑中有重要作用。近年來研究顯示，miRNA參與了AS病變，同樣AS病變也造成了體內(nèi)miRNA譜系改變，miRNA既是臨床可檢測的病變指標(biāo)，也是今后可開發(fā)的治療新靶點?，F(xiàn)將近期相關(guān)研究綜述如下。

1 miR-21

最新研究顯示，AS的miRNA表達(dá)譜中miR-21表達(dá)顯著增高[3]。miR-21在冠狀動脈疾病中過度表達(dá)，與冠心病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，與斑塊穩(wěn)定性呈負(fù)相關(guān)[4]。Jin等[5]報道，載脂蛋白-E/miR-21(ApoE-/-miR-21-/-)雙基因敲除小鼠與ApoE-/-單基因敲除小鼠相比，前者AS血管壁更容易形成泡沫細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤，而miR-21高表達(dá)時具有穩(wěn)定斑塊的作用，可避免斑塊受到免疫系統(tǒng)的攻擊。miR-21作為促血管新生因子，調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells，VSMCs)的凋亡和增殖，促進(jìn)血管新生[6]；Canfrán-Duque等[7]研究顯示，miR-21在巨噬細(xì)胞中表達(dá)最豐富。巨噬細(xì)胞中若缺乏miR-21可加劇AS進(jìn)展，包括斑塊壞死和血管炎癥。miR-21表達(dá)可影響泡沫細(xì)胞形成、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)凋亡的敏感性和吞噬細(xì)胞清除能力。該研究從機制上闡明，巨噬細(xì)胞缺乏miR-21可以增加靶基因MKK3表達(dá)，促進(jìn)誘導(dǎo)p38-CHOP和JNK信號。這兩條通路促進(jìn)了巨噬細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)錄后ABCG1降解(一種調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞膽固醇流出的轉(zhuǎn)運體)。脂質(zhì)沉積和炎癥反應(yīng)是AS發(fā)生的重要觸發(fā)因素，有研究表明，miR-21通過TLR4和NF-κB通路降低IL-6水平，同時升高IL-10水平，以減少LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞脂質(zhì)沉積，miR-21可逆轉(zhuǎn)因細(xì)菌感染誘導(dǎo)的AS病理過程；同時有研究認(rèn)為提高miR-21表達(dá)可預(yù)防和治療心腦血管性病變[8]。上述多個研究結(jié)論似乎并不一致，說明miR-21在AS病變過程中的作用仍具有不確定性，有待深入研究?？傊?，大多數(shù)研究認(rèn)為，miR-21主要通過對巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞(Endothelial cells,ECs)及炎癥信號通路的調(diào)節(jié)在AS中發(fā)揮抑制脂質(zhì)沉積和穩(wěn)定斑塊等保護(hù)作用；而另一方面，miR-21作為炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物又可促進(jìn)免疫細(xì)胞執(zhí)行炎癥清除功能。miR-21的差異表達(dá)可能和AS所處的不同炎癥階段有關(guān)。

2 miR-146

miR-146家族包括miR-146a和miR-146b，分別位于人類第5和第10號染色體。在EC和巨噬細(xì)胞中都有豐富的miR-146表達(dá)。miR-146a參與了包括AS和細(xì)菌感染等多種疾病的發(fā)病機制。氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)水平與miR-146a的表達(dá)呈正相關(guān)，巨噬細(xì)胞中oxLDL增高，miR-146a表達(dá)也相應(yīng)增加，oxLDL通過JNK與NF-κB信號通路激活巨噬細(xì)胞，而miR-146a通過降低巨噬細(xì)胞成熟過程中CD80和CD86表達(dá)，從而阻止oxLDL造成炎癥反應(yīng)。因此，miR-146a可能是AS的治療新靶點[9]。Cheng等[10]研究表明，激活EC炎癥信號通路會導(dǎo)致AS。miR-146可以抑制EC炎癥。體外實驗用敲低miR-146a/146b或?qū)iR-146采用鎖核苷酸 (Locked-nucleic acid,LNA)方法處理小鼠均會激活促炎信號通路 NF-κB、MAPK和其下游的轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致EC炎癥發(fā)生。該研究首次發(fā)現(xiàn)miR-146的靶點之一是RNA結(jié)合蛋白HuR，miR-146增高能抑制HuR蛋白，減少EC一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)產(chǎn)生，從而阻止EC前炎癥因子活化。Del Monte等[11]研究報道，造血細(xì)胞缺乏miR-146可升高血漿膽固醇水平，但并不會促進(jìn)AS進(jìn)展，miR-146的靶點在LDL受體(Ldlr-/-)上，給予miR-146可增加該基因敲除小鼠動脈壁脂質(zhì)沉積。有國內(nèi)研究團隊在大鼠VSMCs體外培養(yǎng)中使用miR-146a干擾技術(shù)進(jìn)行研究，該研究采用了基因表達(dá)譜芯片篩選miR-146a作用的靶點和信號通路。miR-146a上調(diào)了p53信號通路中的關(guān)鍵分子cyclin D1的基因和蛋白水平，促進(jìn)了VSMCs的增殖，該研究認(rèn)為miR-146a可能與AS和球囊損傷后再狹窄的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[12]。綜上所述，miR-146a 被認(rèn)為是調(diào)節(jié)免疫功能的主要miRNA之一，它可負(fù)調(diào)控炎癥和免疫反應(yīng)，避免過度炎癥發(fā)生。通過在巨噬細(xì)胞、EC、造血細(xì)胞和VSMCs中表達(dá)miR-146，均可抑制AS炎癥。外源性的miR-146補充可能對AS是一個有效的免疫調(diào)節(jié)劑。

3 miR-155

有研究證明，oxLDL是引起AS病變的主要原因之一，泡沫細(xì)胞中miR-155的表達(dá)與oxLDL的劑量和時間呈正相關(guān)，同時AS患者的血漿和AS斑塊中miR-155表達(dá)也是增高的。在巨噬細(xì)胞中TNF-α誘導(dǎo)激活的NF-κB使得miR-155表達(dá)增加，而miR-155表達(dá)增加可抑制鈣調(diào)節(jié)熱穩(wěn)定蛋白1(Calcium-regulated heat stable protein 1,CARHSP1)負(fù)反饋下調(diào)TNF-α，從而抑制巨噬細(xì)胞炎癥應(yīng)答和對脂質(zhì)的吞噬。因此，AS相關(guān)的泡沫細(xì)胞形成過程中，miR-155起到了調(diào)節(jié)和抑制炎癥反應(yīng)的作用[13]。Yan等[14]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)oxLDL處理的DCs中miR-155表達(dá)增加，miR-155通過抑制JNK信號通路減少清道夫受體A(Scavenger receptor A,SRA)表達(dá)，該研究闡明了oxLDL對DCs存在miR-155-JNK-SRA-miR-155負(fù)反饋回路。細(xì)胞自噬與AS發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我國青島大學(xué)首次報道了oxLDL誘導(dǎo)人臍帶靜脈EC自噬過程中miR-155的研究，過度表達(dá)miR-155可促進(jìn)oxLDL誘導(dǎo)的EC自噬活性，低表達(dá)miR-155可抑制自噬，miR-155具有調(diào)節(jié)血管EC穩(wěn)定性的作用[15]。另有研究報道，ApoE-/-基因敲除小鼠高脂飲食12周后，主動脈壁上miR-155表達(dá)顯著增高，miR-155表達(dá)降低可抑制AS形成；而ApoE-/-和miR-155-/-雙基因敲除小鼠僅表現(xiàn)為肥胖、脂肪細(xì)胞肥大和脂肪肝，不產(chǎn)生AS。這個研究結(jié)果提示，單一miRNA缺乏(miR-155)可以解釋肥胖與AS病變產(chǎn)生的悖論，即肥胖個體伴有miR-155表達(dá)可導(dǎo)致AS和相關(guān)代謝紊亂；反之，缺乏miR-155表達(dá)的單純肥胖者僅伴有脂肪肝，可不伴有AS和相關(guān)代謝紊亂等病變[16]?？傊琺iR-155在炎癥狀態(tài)下表達(dá)增高，過度表達(dá)miR-155又具有抑制SRA和炎癥因子、減少泡沫細(xì)胞形成、細(xì)胞自噬以及維持EC完整等多方面作用，同時是否表達(dá)miR-155可能是鑒別代謝綜合征與單純性肥胖的生物學(xué)指標(biāo)。

4 miR-126

血管EC和內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)富含miR-126，它主要調(diào)節(jié)生理性血管生成。在胚胎血管形成期，miR-126可誘導(dǎo)血管生成信號，促使胚胎干細(xì)胞向EPC和EC方向分化，并促進(jìn)EC成熟。在成熟EC和成人EPC中，miR-126具有抑制血管生成和維持EC表型穩(wěn)定性的作用，以維護(hù)血管完整性和良好血流動力學(xué)。血管損傷和缺氧時，miR-126可上調(diào)EC和EPC的活性，以修復(fù)血管和形成新的血管。因此，miR-126具有維護(hù)血管EC和抗AS特性[17]。有研究證實，與正常對照組比較，冠心病患者miR-126表達(dá)是降低的。研究認(rèn)為外周血單個核細(xì)胞miR-126檢測對冠心病危重程度具有良好的診斷價值，它的表達(dá)與高敏CRP、TNF-α、IL-6和ICAM-1呈負(fù)相關(guān)，與IL-10呈正相關(guān)。該研究表明miR-126與冠心病炎癥細(xì)胞因子有關(guān)[18]。血管EC凋亡和自噬是AS病變的特征，采用oxLDL激發(fā)培養(yǎng)人臍靜脈EC方法，觀察miR-126在EC潛在的自噬作用。經(jīng)oxLDL誘導(dǎo)的EC中miR-126表達(dá)顯著下降，給予miR-126模擬物可顯著終止oxLDL造成EC的損傷，反映在EC細(xì)胞活力下降、LDH釋放和EC細(xì)胞凋亡增加以及caspase-3酶活性增強等多個方面，miR-126可以抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路，恢復(fù)細(xì)胞自噬功能，研究認(rèn)為miR-126是逆轉(zhuǎn)AS病變潛在的治療靶點[19]。miR-126表達(dá)在血管EC，參與了AS的炎癥過程，并可抑制炎癥因子，促進(jìn)EC細(xì)胞自噬，從而維護(hù)血管完整性起到抗AS的作用。外源性補充miR-126有望成為潛在的抑制AS炎癥的治療手段和策略，同時外周血檢測miR-126也是可動態(tài)反映AS炎癥和疾病嚴(yán)重程度的一個生物學(xué)指標(biāo)。

5 let-7家族

let-7家族是炎癥應(yīng)答中起重要作用的一類miRNA，AS重要的病理機制是VSMCs增殖和EC功能失調(diào)。臨床糖尿病相關(guān)AS病變和ApoE-/-基因敲除小鼠模型中，主動脈斑塊的let-7表達(dá)是降低的。體外實驗采用血小板生長因子和TNF-α誘導(dǎo)VSMC和EC活化過程中，let-7表達(dá)降低。而小鼠尾靜脈注射外源性let-7能對抗脂氧素A4(Lipoxin A4)引起的炎癥反應(yīng)，包括抑制炎癥應(yīng)答、細(xì)胞增殖和遷移，同時單核細(xì)胞黏附能力和NF-κB活性降低[20]。AS典型病理改變之一是巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，臺灣國立大學(xué)Wang等[21]研究表明，let-7g可減少巨噬細(xì)胞的這種轉(zhuǎn)化，并減少泡沫細(xì)胞的凋亡，研究證實let-7g同時抑制了NF-κB經(jīng)典和非經(jīng)典途徑。NF-κB與let-7g表達(dá)之間存在負(fù)反饋機制。let-7g的高表達(dá)可抑制巨噬細(xì)胞中的NF-κB過度活化，可預(yù)防AS病變發(fā)生。因此，let-7家族通過抑制NF-κB信號通路、減少炎癥發(fā)生以及維護(hù)血管完整性，具有AS治療作用?？傮w上let-7家族具有負(fù)調(diào)節(jié)作用，抑制巨噬細(xì)胞NF-κB炎癥信號通路是已明確的機制。let-7家族是高度保守的miRNA，包括let-7a～let-7g等成員，其編碼基因分屬第3、9和21號染色體上，但目前尚未明確AS病變過程中l(wèi)et-7家族成員的各自作用，以及其對NF-κB信號通路上、下游信號的調(diào)節(jié)，這些問題有待于進(jìn)一步深入研究。

6 miR-145

AS形成中的一個重要環(huán)節(jié)是VSMCs過度增殖和遷移。人VSMCs高糖條件體外培養(yǎng)實驗中，缺乏miR-145將導(dǎo)致VSMCs過度增殖和遷移，外源性補充miR-145則可有效抑制VSMCs的增殖和遷移。研究結(jié)果表明，miR-145通過下調(diào)ROCK1(一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶)活性對高糖條件下VSMCs增殖和遷移有抑制作用，為糖尿病AS提供了一個治療靶點[22]。在VSMCs培養(yǎng)中，miR-145和CD40分別作用于TNF-α、TGF-β和同型半胱氨酸并誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，實驗采用過表達(dá)miR-145或小干擾性RNA(small interference RNA,siRNA)介導(dǎo)敲低CD40的方法進(jìn)行研究,對AS合并腦?；颊卟捎贸曈^察頸動脈內(nèi)膜中層厚度方法評估VSMCs增殖狀況。Guo等[23]研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α、TGF-β和同型半胱氨酸均能顯著增加CD40和其mRNA的表達(dá)，同時誘導(dǎo)VSMCs增殖；過度表達(dá)miR-145可顯著抑制CD40表達(dá)以及VSMCs的分化，同時VSMCs培養(yǎng)上清液中IL-6降低。AS伴腦梗死患者miR-145低表達(dá)與頸動脈內(nèi)膜中層厚度增厚以及血漿IL-6水平升高相關(guān)。因此，該研究認(rèn)為miR-145/CD40通路涉及VSMCs增殖表型轉(zhuǎn)換(包括TNF-α、TGF-β和同型半胱氨酸)，增強miR-145表達(dá)可能是一種有用的AS治療策略。近期我國山東學(xué)者研究了AS發(fā)生發(fā)展過程中miR-145的作用。該研究采用ApoE-/-基因敲除并給予高脂飲食后小鼠模型體內(nèi)、外實驗，觀察oxLDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。體內(nèi)、外實驗研究均顯示，高表達(dá)miR-145 可通過促進(jìn)NF-κB、p-IκBα、p-STAT3和ac-p65 表達(dá)增加IL-1β、TNF-α、CCL-2、CCL-4和CCL-7水平。低表達(dá)miR-145可緩解主動脈竇損害，增加VSMCs細(xì)胞數(shù)量并減少巨噬細(xì)胞炎癥。該研究認(rèn)為，miR-145通過活化NF-κB信號通路加劇了AS炎癥反應(yīng)[24]。雖然該文獻(xiàn)與上述兩個研究結(jié)論不一，但研究具有一個共同點，即miR-145均可抑制VSMCs增殖。VSMCs細(xì)胞的增殖在什么程度上有益于血管炎癥修復(fù)，抑或可引起血管狹窄，以及AS患者miR-145表達(dá)的閾值仍有待于今后研究闡明。

7 miR-19

Chen等[25]用微陣列分析方法檢測到AS患者血清中高表達(dá)miR-19a，miR-19a的靶基因是HMG盒轉(zhuǎn)錄因子1(HMG-Box transcription factor 1,HBP-1)，miR-19a通過抑制HBP-1增加巨噬細(xì)胞遷移抑制因子(Macrophage migration inhibiting factor,MIF)表達(dá)，由此提高TNF-α和IL-6水平，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)吸收形成泡沫細(xì)胞。ApoE-/-基因敲除并給予高脂飲食小鼠尾靜脈注射miR-19a拮抗劑，其AS斑塊和脂質(zhì)負(fù)荷有所下降，因此，抑制miR-19a的表達(dá)可減少AS炎癥反應(yīng)。參與AS病變損傷的各種類型細(xì)胞均可表達(dá)缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)，HIF-1α與炎癥反應(yīng)損害相關(guān)。少量oxLDL刺激EC即可增高miR-19a表達(dá)，這種現(xiàn)象是由CXCL1上調(diào)介導(dǎo)產(chǎn)生的，并導(dǎo)致單核細(xì)胞黏附能力增強。研究表明，抑制EC的HIF-1α/miR-19a 通路可能是治療AS的方法[26]。miR-19b與ATP結(jié)合轉(zhuǎn)錄子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)的mRNA 3′UTR緊密結(jié)合，抑制了巨噬細(xì)胞膽固醇流出，促進(jìn)形成泡沫細(xì)胞，導(dǎo)致主動脈斑塊變大以及脂質(zhì)含量增高，促進(jìn)AS加劇[27]?？傊?，miR-19a/b的表達(dá)均促進(jìn)了AS發(fā)生發(fā)展，可作為AS的臨床進(jìn)展和預(yù)后的實驗室檢測指標(biāo)之一。

8 miR-221/222

miR-221/222參與調(diào)控VSMCs功能，促進(jìn)血管重塑，以應(yīng)對血管損傷。AS斑塊破裂與斑塊纖維帽肩部區(qū)miR-221/222的表達(dá)減少和p27Kip1 (是一種細(xì)胞周期依賴的酶抑制劑)mRNA增加有關(guān)，而p27Kip1增加則VSMCs增殖減少。因此，降低miR-221/222的表達(dá)可增加AS斑塊破裂發(fā)生的可能性[28]。Jia等[29]報道m(xù)iR-221與AS疾病呈負(fù)相關(guān)，外周血低表達(dá)miR-221是AS危險因素之一。近期研究表明AS小鼠斑塊中高表達(dá)長鏈非編碼RNA(lncRNA)GAS5，GAS5作為內(nèi)源性分子海綿直接與miR-221結(jié)合抑制其表達(dá)，可誘導(dǎo)促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α及MMP的水平增高，導(dǎo)致AS斑塊表面纖維帽降解并且加劇斑塊不穩(wěn)定性[30]。土耳其近期臨床研究提示，伴有冠狀動脈粥樣斑塊(Coronary artery atherosclerotic plaques,CAAP)患者血漿中miR-221表達(dá)比健康對照組高8.94倍，血漿中miR-221表達(dá)水平增高的為單純高膽固醇血癥、高血壓和有冠心病家族史的患者，與正常對照組比較差異均存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義；但各組患者血漿中miR-222的表達(dá)并無統(tǒng)計學(xué)意義[31]。土耳其的研究與上述各研究結(jié)果不同，小鼠AS模型斑塊局部miR-221/222的表達(dá)和患者外周血表達(dá)不一，而目前比較公認(rèn)的是miR-221/222在機體脂質(zhì)形成和累積過程中表達(dá)是降低的，對于miR-221/222在血管炎癥反應(yīng)各階段和疾病部位的診斷意義尚待進(jìn)一步研究。

9 miR-10a

最新臨床研究顯示，在冠心病患者外周血單個核細(xì)胞中miR-10a表達(dá)下調(diào)，miR-10a與血清IL-6和TNF-α水平呈負(fù)相關(guān)，與IL-10水平呈正相關(guān)，但該研究提出miR-10a與AS的潛在炎癥相關(guān)機制有待進(jìn)一步研究[32]。我國臺灣臺北科技大學(xué)Lee等[33]研究認(rèn)為，miR-10a 是特異性調(diào)節(jié)AS易感區(qū)域EC的血管振蕩剪切力(Oscillatory shear stress,OS)的miRNA。給予ApoE-/-基因敲除小鼠維甲酸受體-α(Retinoic acid receptor-α,RARα)/視黃醇類X受體-α(Retinoid X receptor-α,RXRα)的特異性激動劑，可增加EC內(nèi)的miR-10a表達(dá)，從而減少AS主動脈EC損害。研究提出miR-10a是通過RARα組蛋白去乙?；瘡?fù)合物抑制了下游GATA6/VCAM-1(Vascular cell adhesion molecule 1)信號通路，從而阻止了炎癥級聯(lián)效應(yīng)。該研究認(rèn)為，RARα/RXRα特異性激動劑可提高EC的miR-10a表達(dá)，有望成為血流動力學(xué)意義上治療AS的潛在藥物。Wei等[34]研究發(fā)現(xiàn)，在AS發(fā)病過程中，泡沫細(xì)胞可加劇巨噬細(xì)胞內(nèi)Dicer酶缺乏，損害了線粒體脂肪酸氧化代謝,miR-10a通過抑制配體依賴性核受體共抑制因子(Ligand-dependent nuclear receptor co-repressor,Lcor)修復(fù)Dicer活性，促進(jìn)線粒體脂肪酸氧化，緩解AS進(jìn)展。促進(jìn)巨噬細(xì)胞的Dicer酶/miR-10a通路和代謝重編程可能是AS治療的潛在靶點。

10 miR-195

巨噬細(xì)胞是AS斑塊的主要組成部分，其中M1型巨噬細(xì)胞促進(jìn)AS的發(fā)生，而M2型巨噬細(xì)胞具有穩(wěn)定斑塊的作用。此外，TLR信號通路參與了AS斑塊形成、進(jìn)展和消退。有研究采用LPS和IFN-γ刺激巨噬細(xì)胞THP-1細(xì)胞株，過表達(dá)miR-195可使TLR-2水平下降，巨噬細(xì)胞中JNK p54、JNK p46 和 MAPK p38磷酸化下降，并且細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-6 和 TNF-α前炎癥因子顯著下降。miR-195削弱了M1巨噬細(xì)胞所致的平滑肌細(xì)胞募集和遷移分布的功能。該研究認(rèn)為，miR-195參與了巨噬細(xì)胞極化，并通過抑制TLR2炎癥通路炎性介質(zhì)，緩解心血管疾病炎癥過程[35]。我國廈門大學(xué)最新研究顯示，miR-195和miR-582可調(diào)節(jié)EC釋放一氧化氮(Nitric oxide,NO)，它們與eNOS3 mRNA 3′UTR直接結(jié)合，導(dǎo)致EC NO減少的釋放，同時避免觸發(fā)血小板的活化、黏附和凝聚，增加血管EC對NO生物利用度，阻止血栓形成[36]。另有研究表明，皮質(zhì)類固醇可誘導(dǎo)間質(zhì)干細(xì)胞分化，被誘導(dǎo)出的巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞高表達(dá)miR-195[37]。miR-195在AS病理作用機制方面研究尚少，有待進(jìn)一步深入研究。

總之，AS是以脂質(zhì)和炎癥細(xì)胞在動脈壁堆積浸潤為特征的慢性炎癥性疾病。miRNA對AS病理生理過程尤其是慢性炎癥具有調(diào)控作用。miRNA在體內(nèi)主要起RNA干擾(RNA interference，RNAi)作用。對miRNA的研究一方面是為了闡明AS炎癥信號通路RNAi的作用機制，如大部分miRNA通過抑制或促進(jìn)TLR、NF-κB、JNK、MAPK以及eNOS等信號通路調(diào)節(jié)炎癥的發(fā)生和發(fā)展，同時影響泡沫細(xì)胞形成以及斑塊穩(wěn)定性等；miRNA也參與黏附分子介導(dǎo)、EC增殖、分化及遷移等過程調(diào)控血管炎癥，此外miRNA對膽固醇流出和細(xì)胞自噬等也有重要作用；另一方面，隨著近期國際上第一個RNAi藥物的誕生[38]，更多的此類藥物將很快進(jìn)入各種疾病的治療領(lǐng)域[39]，包括心血管疾病的治療；其三，中藥是我國以及亞洲等區(qū)域使用數(shù)千年的藥物，也已廣泛應(yīng)用于AS的臨床治療中。中藥除動物藥和礦物藥外，絕大部分是植物藥，已被研究的含有miRNA的中藥種類均為我國常用的植物藥，包括人參、黃芪、甘草和地黃等，其安全性方面與化學(xué)分子設(shè)計合成的miRNA類藥物比較有著先天的優(yōu)勢，一般而言，中藥是已經(jīng)過人類長期食用后篩選出來的安全食物和藥物。如我院沈朝斌等[40]研究團隊采用二代深度高通量測序方法測定了黃芪水煎劑的miRNA表達(dá)譜，實驗結(jié)果鑒定了黃芪中1個保守的miRNA和9個新發(fā)現(xiàn)的miRNA。經(jīng)進(jìn)一步生物學(xué)信息分析，發(fā)現(xiàn)12種Ⅰ類siRNA序列，它的5′端對熱力學(xué)不穩(wěn)定，在3′端種子區(qū)域?qū)崃W(xué)高度穩(wěn)定。該研究證明了植物藥存在熱力學(xué)意義上穩(wěn)定的siRNA，同時也建立了單味黃芪飲片完整的miRNA譜系。這些中藥的miRNA均有望在AS發(fā)病機理研究和新藥開發(fā)方面嶄露頭角。