表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑聯(lián)合化療促進食管癌細胞凋亡的研究

程效良　江峰　黃建　何枝生　彭亞瓊

[摘要]目的 探討西妥昔單抗聯(lián)合化療的最佳抗瘤效應及分子機制，以期為食管癌靶向治療的臨床應用提供一定的理論依據。方法 選取2017年1月～2018年12月在我院接受治療的60例食管癌患者作為研究對象，按照隨機數字表法將其分為對照組和觀察組，每組各30例。對照組患者接受紫杉醇+順鉑新輔助化療，觀察組患者接受西妥昔單抗聯(lián)合紫杉醇+順鉑新輔助化療。比較兩組患者化療前后的轉錄因子叉頭框蛋白A1（FOXA1）、ATP結合盒轉運子E1（ABCE1）、泛素化特異性蛋白酶39（USP39）、神經巢蛋白mRNA（Nestin mRNA）促增值基因表達量和硝酸戊四醇酯（PETN）、鋅指轉錄因子4（KLF4）、肺癌腫瘤抑制物1（TSLC1）、膜聯(lián)蛋白A2（ANXA2）抗增殖基因表達量。結果 化療前，兩組患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;化療后，兩組患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量均低于化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），觀察組患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestinm RNA表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。化療前，兩組患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;化療后，兩組患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量均高于化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05），觀察組患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論 西妥昔單抗聯(lián)合化療可有效抑制食管癌細胞的惡性程度，抑制其增殖侵襲。

[關鍵詞]表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑;食管癌;細胞凋亡;抑制

[中圖分類號] R735.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）11（b）-0004-04

Study on promoting apoptosis of esophageal carcinoma cells induced by epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor combined with chemotherapy

CHENG Xiao-liang1? ?JIANG Feng1? ?HUANG Jian1? ?HE Zhi-sheng1? ?PENG Ya-qiong2

1. Department of Thoracic Surgery， Jiangxi Cancer Hospital， Nanchang? ?330000， China; 2. Department of Medical Records， Jiangxi Provincial Tumor Hospital， Nanchang? ?330000， China

[Abstract] Objective To investigate the optimal anti-tumor effect and molecular mechanism of Cetuximab combined with chemotherapy， in order to provide a theoretical basis for the clinical application of targeted therapy for esophageal cancer. Methods Sixty patients with esophageal cancer who were treated in our hospital from January 2017 to December 2018 were selected as subjects in the study. According to the random number table method， they were divided into control group and observation group， with 30 cases in each group. In the control group， Paclitaxel plus Cisplatin neoadjuvant chemotherapy was used， while in the observation group， Cetuximab was added besides Paclitaxel plus Cisplatin neoadjuvant chemotherapy. The expression quantity of gene proliferation of transcription factors such as forkhead box protein A1 （FOXA1）， ATP binding cassette E1 （ABCE1）， ubiquitin-specific protease 39 （USP39）， and nestin mRNA （Nestin mRNA） and the expression quantity of gene anti-proliferation of pentaerythritol nitrate （PETN）， zinc finger transcription factor 4 （KLF4）， lung cancer tumor suppressor 1 （TSLC1）， annexin A2 （ANXA2） were compared before and after chemotherapy in the two groups. Results Before chemotherapy， there were no significant differences in FOXA1， ABCE1， USP39， and Nestin mRNA between the control group and the observation group （P>0.05）. The levels of FOXA1， ABCE1， USP39 and Nestin mRNA were lower compared with those before chemotherapy， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of FOXA1， ABCE1， USP39 and Nestin mRNA in the observation group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Before chemotherapy， there were no significant differences in PETN， KLF4， TSLC1 and ANXA2 between the control group and the observation group （P>0.05）. After chemotherapy， the expression of PETN， KLF4， TSLC1 and ANXA2 were all higher than those before chemotherapy， the differences were statistically significant （P<0.05）. The expression of PETN， KLF4， TSLC1 and ANXA2 in the observation group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion Cetuximab combined with chemotherapy can effectively inhibit the malignant degree of esophageal cancer cells as well as their proliferation and invasion.

[Key words] Epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor; Esophageal cancer; Apoptosis; Inhibition

食管癌是我國常見的惡性腫瘤，預后極差，會對患者的生命安全構成直接性的威脅。近年來，受到人口老齡化加劇、人們飲食習慣改變等因素的影響，食管癌的發(fā)病率有了明顯上升，臨床防治形勢不容樂觀。既往研究表明，食管癌的預后與多種因素有關，其中與表皮生長因子受體表達的關系密切。因此，對于食管癌的治療，應該注重對表皮生長因子受體表達的改善。西妥昔單抗是特異性針對表皮生長因子受體IgG1單克隆抗體，能與表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）的配體結合，從而阻斷下游信號傳導通路[1]。研究表明，在EGFR表達陽性的惡性腫瘤治療過程中，單藥治療或聯(lián)合化療，抗腫瘤活性均有良好的效果[2]。目前尚不明確西妥昔單抗與化療以何種順序給藥效果最佳。因此，本研究選取在我院接受治療的60例食管癌患者作為研究對象，對EGFR酪氨酸激酶抑制劑（selective tyrosine kinase inhibitor，TKIs）聯(lián)合化療促進食管癌細胞凋亡的相關情況展開探究，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年1月～2018年12月在我院接受治療的60例食管癌患者作為研究對象，按照隨機數字表法將其分為對照組和觀察組，每組各30例。對照組中，男18例，女12例;年齡37～78歲，平均（65.32±2.37）歲;病程3～10年，平均（5.61±0.78）年;腫瘤分期：Ⅲ期17例，Ⅳ期13例。觀察組中，男20例，女10例;年齡35～76歲，平均（64.97±2.41）歲;病程3～11年，平均（5.52±0.69）年;腫瘤分期：Ⅲ期18例，Ⅳ期12例。兩組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

納入標準：①患者經病理診斷確診為原發(fā)性食管癌;②患者均為首次確診，入院前未接受系統(tǒng)治療;③患者均知曉本研究內容和目的，并簽署知情同意書;④本研究經我院醫(yī)學倫理委員會審核及同意。排除標準：①有既往食管癌手術史者;②合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者;③合并心、肝、腎等器質性嚴重病變者;④對本研究使用藥物過敏者;⑤有神經系統(tǒng)疾病及認知障礙者;⑥臨床資料不完整者。

1.2方法

對照組患者接受紫杉醇（寧波綠之健藥業(yè)有限公司，國藥準字H20053622）+順鉑（廣東嶺南制藥有限公司，國藥準字H20143124）新輔助化療?；煼桨福鹤仙即?35 mg/m2，靜脈滴注30 min，每天1次;順鉑75 mg/m2，靜脈滴注30 min，每天1次。21 d為1個療程，連續(xù)化療2個療程。

觀察組患者接受西妥昔單抗（Boehringer Ingelheim Pharma Gmb H Co. KG，批準文號S20050095）聯(lián)合紫杉醇+順鉑新輔助化療。①化療方案：同對照組。②西妥昔單抗用量：首劑靜脈滴注負荷劑量400 mg/m2西妥昔單抗，于120 min內滴注完成;然后每周給予250 mg/m2（靜脈滴注60 min）。

1.3觀察指標

觀察比較兩組患者化療前后的轉錄因子叉頭框蛋白A1（foxhead box A1，F(xiàn)OXA1）、ATP結合盒轉運子E1（ATP-binding cassette trans-porter E1，ABCE1）、泛素化特異性蛋白酶39（ubiquitin-specific protease，USP39）、神經巢蛋白mRNA（nestin messenger ribouncleic acid，Nestin mRNA）促增值基因和硝酸戊四醇酯（pentaerythritol tetranitrate，PETN）、鋅指轉錄因子4（krtippel-like factor，KLF4）、肺癌腫瘤抑制物1（tumor suppressor in lung cancer 1，TSLC1）、膜聯(lián)蛋白A2（annexin A2，ANXA2）抗增殖基因表達情況。

化療前胃鏡取患者的食管腫瘤組織標本、化療后留取患者的術中腫瘤組織標本，并將標本經裂解細胞→沉淀總RNA→RNA洗滌干燥→RNA純度及濃度測定→反轉錄合成樣品cDNA→熒光定量PCR目標基因擴增等步驟處理。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗;計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組患者化療前后食管癌組織中促增殖基因表達量的比較

兩組患者化療前的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;兩組患者化療后的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量均低于化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;觀察組患者化療后的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2兩組患者化療前后食管癌組織中抗增殖基因表達量的比較

兩組患者化療前的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;兩組患者化療后的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量均高于化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;觀察組患者化療后的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表2）。

3討論

臨床惡性腫瘤中，食管癌屬于常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率和致死率均位居惡性腫瘤的前列[3]。食管癌的嚴重程度較高，預后性較高，一旦診治不及時，將直接威脅到患者的生命安全，因此早期食管癌進行手術治療可獲得更高的治愈率。晚期食管癌的主要治療手段是聯(lián)合化療及放療，化療藥物主要包括順鉑加氟尿嘧啶、順鉑加多西紫杉醇、順鉑加紫杉醇及奧沙利鉑加氟尿嘧啶等，但各方案治療的完全緩解率低，緩解期短，目前尚無標準化療方案[4-5]。

腫瘤分子靶向治療是近年來腫瘤治療研究領域的熱點，它以腫瘤細胞的某個基因特性改變?yōu)樽饔冒悬c，在發(fā)揮更強的抗腫瘤活性同時，減少對正常細胞的毒副作用，成為腫瘤治療新的方向[6-7]。EGFR，也被稱為HER-1或cerbB-1，對細胞生長和分化、血管生成和凋亡均有著相應的調控作用。目前，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后的相關因素中，EGFR的信號通路的變化已被明確為其中之一[8-9]。在上皮來源惡性腫瘤患者中，絕大部分的患者EGFR的表達存在過度現(xiàn)象。文獻報道顯示，食管癌患者存在EGFR高表達的占比40%～80%[10-11]。EGFR-TKIs是EGFR激酶區(qū)（TK）的激酶活性抑制劑，相當一部分屬于小分子喹唑啉類衍生物，其與ATP競爭性結合胞外配體，對ATP與TK的結合起到抑制作用，從而阻斷酪氨酸自身磷酸化，最終對EGFR的激活實現(xiàn)抑制，間接地促進癌細胞凋亡，達到抑制腫瘤浸潤或者遠期轉移的目的[12-13]。

西妥昔單抗是為IgG1單克隆抗體，具有干擾EGFR及下游信號激活，從而抑制細胞分化和血管生成的作用[14-17]。臨床對于西妥昔單抗在惡性腫瘤中的應用研究并不少見，對其在惡性腫瘤中的應用效果也表現(xiàn)出了認可。國內一項針對西妥昔單抗治療惡性腫瘤的研究[18]發(fā)現(xiàn)，低分化食管腺癌EGFR的表達為57.0%，低惡性腫瘤則為13.0%，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），同時對于低分化食管腺癌患者而言，其中位存活時間結果為：EGFR陰性患者35個月，陽性患者16個月。有研究者在EGFR陽性的低位食管癌和胃癌的Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗中，應用西妥昔單抗聯(lián)合表柔比星、順鉑、卡培他濱，結果提示，患者的反應率達53%，療效高于單純化療組[19]。本研究結果提示，化療后，兩組患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量均低于化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），觀察組患者的FOXA1、ABCE1、USP39、Nestin mRNA表達量低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），化療后，兩組患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量均高于化療前，差異有統(tǒng)計學意義（P>0.05），觀察組患者的PETN、KLF4、TSLC1、ANXA2表達量均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示在實施不同的干預方案后，觀察組患者的促增殖基因表達均低于對照組，抗增殖基因表達均高于對照組，說明了西妥昔單抗聯(lián)合化療食管癌的有效性，對細胞凋亡具有重要的促進意義。

綜上所述，西妥昔單抗聯(lián)合化療可有效抑制食管癌細胞的惡性程度，抑制其增殖侵襲，達到促進癌細胞凋亡的目的。

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（收稿日期：2019-04-15? 本文編輯：孟慶卿）