二極管陣列檢測器在食品檢測中的應(yīng)用探討

適量的食品添加劑為防腐或者加工工藝所需，并且還能夠賦予食品色、香、味。超量使用食品添加劑會損害消費者的身體機能，合理膳食不但要關(guān)注營養(yǎng)組成，更要關(guān)注食品中的添加劑是否過量。大多數(shù)食品成分復(fù)雜，待檢物質(zhì)為微量甚至痕量，如果在食品前處理過程中處理不當(dāng)，極易造成分析過程中，雜質(zhì)成分對待測物質(zhì)的干擾。本實驗采用HPLC法，運用二極管陣列檢測器對疑似出現(xiàn)的苯甲酸峰進(jìn)行了確定，對熟肉中可能含有的食品添加劑苯甲酸、山梨酸兩種成分同時進(jìn)行含量測定。

儀器與試藥

儀器LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津，包括SPD-M20A檢測器，LCSolution工作站）；KT-250W型超聲波清洗器（濟(jì)寧科特超聲電子有限責(zé)任公司）；AB104-N型電子天平（梅特勒--托尼多儀器(上海)有限公司）；TG16-WS型高速臺式離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）

試 藥 苯 甲 酸 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液（GBW(E)100006，批號：11003，1.00mg/mL）和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（GBW(E)100007，批號：12001，1.00mg/mL）均購自中國計量科學(xué)研究院；甲醇（色譜純）；水（超純水）；其余均為分析純。

方法與結(jié)果

色譜條件 色譜柱：Agilent C18柱，150*4.6mm，5μm；流動相：甲醇-乙酸銨溶液（5：95）；柱溫：25.0℃ ；流速：1.00mL/min ；檢測波長：230nm。

對照品溶液的制備 分別取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用水將其稀釋成苯甲酸、山梨酸含量分別為0.00mg/mL、0.02mg/mL、0.04mg/mL、0.08 mg/mL、0.16mg/mL、0.32mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

樣品溶液的制備 稱取粉碎均勻樣品（鹵豬耳，本地餐館）于小燒杯中，用20mL水分?jǐn)?shù)次清洗小燒杯，將樣品移入25mL容量瓶中，超聲振蕩提取10min，取出后加2mL亞鐵氰化鉀溶液，搖勻，再加入2mL乙酸鋅溶液，搖勻，用水定容至刻度。移入離心管中，4000r/min離心5min，吸出上清液，用微孔濾膜 （ 0.45μm，水相）過濾，即得。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)混合使用液精密進(jìn)樣10 μ L，分別以苯甲酸和山梨酸濃度為橫坐標(biāo)，以響應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，計算得苯甲酸線性回歸方程：Y=4749431303.52X(R2=1)，山梨酸線性回歸方程：Y=7081586158.65X(R2=1)。范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。0.02mg/mL濃度色譜圖見圖1。

精密度試驗 將0.02mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，每次 1 0μL ，測定，結(jié)果苯甲酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.28%，山梨酸峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.36%，表明儀器精密度良好。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖

圖2 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液掃描圖譜

圖3 供試品溶液掃描圖譜

表1 熟肉中苯甲酸、山梨酸的含量測定結(jié)果

圖4 供試液HPLC色譜圖

最低檢出限 將0.02mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋后測定，在信噪比為3時測得苯甲酸檢出限為2ng。

目標(biāo)峰的確定 分別取供試液及0.02mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣 1 0μL，用二極管陣列檢測器進(jìn)行全波段掃描，掃描結(jié)果見圖2。

樣品的含量測定 精密稱取樣品2份，按“2.3”項下方法制備供試液，每份供試液分別進(jìn)樣2次，進(jìn)樣10 μ L,將數(shù)據(jù)代入相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定結(jié)果見表1，分析圖譜見圖4。

討論

超聲提取時間的優(yōu)化 本實驗對超聲的時間進(jìn)行了優(yōu)選，試驗中對樣品超聲處理5、10、15分鐘的提取效果進(jìn)行了考察，結(jié)果超聲5分鐘提取不完全，而超聲10分鐘和15分鐘結(jié)果相差不大，因此在樣品前處理過程中，超聲處理10分鐘最佳。

目標(biāo)物質(zhì)的甄別 食品檢驗過程中，在定位峰的保留時間附近，經(jīng)常會出現(xiàn)其它的峰，難以判定究竟是雜質(zhì)峰還是待測物質(zhì)峰。試驗中通過標(biāo)準(zhǔn)溶液定位可知苯甲酸保留時間5.527min，而供試品溶液在5.573min有峰出現(xiàn)，鑒于保留時間有細(xì)微差別，難以通過HPLC色譜圖確定待測物質(zhì)是否存在。本試驗運用二極管陣列檢測器的全波段掃描功能，在180nm至800nm范圍內(nèi)，分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液5.527min出峰物質(zhì)和供試品溶液5.573min出峰物質(zhì)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示兩者在波段范圍內(nèi)吸收趨勢一致，并且均在225nm處有最大吸收，表明兩者同為苯甲酸。

檢測波長的選擇 國家標(biāo)準(zhǔn)（食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分㈠）推薦苯甲酸的檢測波長為230nm。通過二極管陣列全波段掃描發(fā)現(xiàn)，苯甲酸在225nm處有最大吸收，食品檢驗過程中，是否應(yīng)該根據(jù)實際情況選擇最佳吸收波長進(jìn)行檢測，尚需更深入的研究。