銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)介導(dǎo)的呼吸道病原菌種間互作研究進(jìn)展

袁陽， 李靜， 王欣榮， 趙克雷

(成都大學(xué)四川抗菌素工業(yè)研究所，抗生素研究與再評價(jià)四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都610052)

細(xì)菌性呼吸道感染是臨床常見疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年約有350萬人死于呼吸道感染，位居所有死亡原因的第三位(Wunderink & Waterer，2014)。而在我國，每年約有250萬人罹患呼吸道感染疾病，據(jù)估算，其中每年約有12.5萬患者死于呼吸道感染相關(guān)疾病(官旭華等，2011)。越來越多的臨床證據(jù)表明，在細(xì)菌性呼吸道感染病灶中往往不是定植著一種優(yōu)勢病原菌而是多種病原菌共存(Shortetal.，2014；Yonkeretal.，2015；Pragmanetal.，2016)。2005—2014年，在全國范圍內(nèi)呼吸道標(biāo)本中共分離出229 170株細(xì)菌，其中，革蘭氏陰性菌占78.8%，革蘭氏陽性菌占18.4%。常見的致病菌有鮑曼不動(dòng)桿菌Acinetobacterbaumannii(16.7%)、銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginosa(16.5%)、肺炎克雷伯氏菌Klebsiellapneumoniae(14.8%)、金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus(11.8%)、大腸埃希氏菌Escherichiacoli(7.1%)、嗜麥芽窄食單胞菌Stenotrophomonasmaltophilia(5.8%)、陰溝腸桿菌Enterobactercloacae(3.8%)、肺炎鏈球菌Streptococcuspneumoniae(3.7%)、流感嗜血桿菌Haemophilusinfluenzae(3.1%)等(楊青等，2016)。銅綠假單胞菌的檢出率僅次于院內(nèi)感染常見致病菌鮑曼不動(dòng)桿菌。而在所有銅綠假單胞菌感染的不同組織樣本中，銅綠假單胞菌在呼吸道樣本中的檢出率最高，約占全部樣本的70.6%(張祎博等，2016)。因此，銅綠假單胞菌的定植與呼吸道感染相關(guān)疾病密切相關(guān)，對公共健康具有較大的威脅。

高等生物具有多種群體行為，細(xì)菌雖然是結(jié)構(gòu)簡單的單細(xì)胞個(gè)體，但同樣具備多種群體行為，如生物膜的形成、群集運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞外蛋白酶或鐵離子螯合官能團(tuán)的產(chǎn)生來促進(jìn)群體對營養(yǎng)物質(zhì)和空間的利用(Littleetal.，2008；Petersetal.，2012；Bruger & Waters，2015)。細(xì)菌之間的群體行為可以增加種群或個(gè)體對極端環(huán)境的耐受性，如營養(yǎng)和空間的缺乏、抗生素作用、溫度變化、pH變化和氧含量減少等(Jimenezetal.，2012)。當(dāng)這種群體行為出現(xiàn)在感染部位時(shí)，可加劇疾病的進(jìn)程并增加治療的難度(Armbrusteretal.，2010；Korgaonkaretal.，2013；Vegaetal.，2013)。細(xì)菌性呼吸道感染病灶往往能夠分離到多種病原菌，這些病原菌之間存在著復(fù)雜的物質(zhì)交換和信息交流，共同促進(jìn)疾病的發(fā)展；如果只針對某種病原菌進(jìn)行治療，往往會(huì)導(dǎo)致治 療失敗或病情反復(fù)(Petersetal.，2012；Shortetal.，2014；Pragmanetal.，2016)。群體感應(yīng)是用來描述大多數(shù)微生物生長過程中達(dá)到特定的種群密度之后，由具有種屬特異性的自誘導(dǎo)信號小分子介導(dǎo)的大規(guī)模功能基因被激活的過程(Fuquaetal.，1994；Waters & Bassler，2005)。這一概念的提出大大促進(jìn)了人們對病原菌群體行為的認(rèn)識，顯著推動(dòng)了社會(huì)微生物學(xué)的萌生和發(fā)展。

銅綠假單胞菌是一種常見的革蘭氏陰性條件致病菌，可以導(dǎo)致多種動(dòng)植物和人類多種組織感染。銅綠假單胞菌可利用不同胞內(nèi)調(diào)控機(jī)制來引發(fā)急慢性感染(Balasubramanianetal.，2013；Zhaoetal.，2019)，其群體感應(yīng)系統(tǒng)由3個(gè)層級排列的las、rhl和pqs調(diào)控系統(tǒng)組成，其中l(wèi)as和rhl具有完整的自誘導(dǎo)信號分子合成蛋白(LasⅠ/RhlⅠ)和調(diào)控蛋白(LasR/RhlR)，并且rhl系統(tǒng)的激活依附于las系統(tǒng)。而pqs系統(tǒng)則只有調(diào)控蛋白PqsR(又叫做MvfR)，需要接收其他路徑合成的信號分子PQS實(shí)現(xiàn)完整功能調(diào)控(Balasubramanianetal.，2013；Dandekar & Greenberg，2013)。las和rhl群體感應(yīng)系統(tǒng)共同調(diào)控至少384個(gè)與生長代謝、胞外蛋白酶合成、胞外毒素產(chǎn)生、信號分子合成等相關(guān)重要基因的表達(dá)激活(Schusteretal.，2003)，而pqs系統(tǒng)除了與las和rhl系統(tǒng)具有功能重疊之外，還可以影響銅綠假單胞菌鐵離子獲取、運(yùn)動(dòng)性和生物膜的形成(Diggleetal.，2007；Guoetal.，2014)。研究發(fā)現(xiàn)，銅綠假單胞菌的多種胞外產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)、脂類、吩嗪等小分子物質(zhì)能夠直接或間接影響其他呼吸道病原菌的生長，這就為細(xì)菌之間的相互作用提供了重要的物質(zhì)基礎(chǔ)(Asfahletal.，2017)。

銅綠假單胞菌與其他病原菌共同促進(jìn)呼吸道感染疾病的進(jìn)程相關(guān)研究正處于起步階段，對銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)介導(dǎo)的呼吸道病原菌種間相互作用進(jìn)行深入的了解與研究，在呼吸道感染疾病的治療及預(yù)防方面具有重要意義。本文就銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)介導(dǎo)的常見呼吸道病原菌之間的相互作用及其機(jī)制研究展開詳細(xì)綜述。

1 銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌的相互作用

目前國際上對銅綠假單胞菌與金黃色葡萄球菌種間關(guān)系的研究相對較為深入，這2種病原菌通常共存于罹患囊胞性纖維癥病人的肺臟中。金黃色葡萄球菌在臨床兒科呼吸道感染患者中最常見，也是最主要的病原菌，患者免疫系統(tǒng)功能的降低為銅綠假單胞菌的繼發(fā)性感染提供了有利條件。在銅綠假單胞菌定植后，由于其復(fù)雜而龐大的群體感應(yīng)系統(tǒng)能夠調(diào)控多種蛋白和毒力因子的分泌，該菌逐漸取代金黃色葡萄球菌成為感染引發(fā)的主導(dǎo)病原菌(Manosetal.，2013；Yonkeretal.，2015)。隨著患者年齡的增加，銅綠假單胞菌相關(guān)發(fā)病率大大升高而金黃色葡萄球菌相關(guān)發(fā)病率則顯著降低(Sageletal.，2009；Hauseretal.，2011)。研究發(fā)現(xiàn)，銅綠假單胞菌分泌多種抗金黃色葡萄球菌的產(chǎn)物和蛋白酶，如LasA、LasB、鼠李糖脂、喹啉(HAQ、HQNO、PQS)、吩嗪吡啶等物質(zhì)引起金黃色葡萄球菌生物膜分散和細(xì)胞裂解(Mashburnetal.，2005；Palmeretal.，2005；Mitchelletal.，2010；Korgaonkaretal.，2013)。而金黃色葡萄球菌則可以通過促進(jìn)生物膜的形成以及增加小菌落變異體的出現(xiàn)頻率適應(yīng)來自銅綠假單胞菌的生存脅迫(Hoffmanetal.，2006；Biswasetal.，2009；Fugèreetal.，2014)。Frydenlund等(2015)從慢性呼吸道感染病灶中分離到1株宿主適應(yīng)性銅綠假單胞菌代表菌株P(guān).aeruginosaDK2-P2M24-2003，它與野生型銅綠假單胞菌在體外與金黃色葡萄球菌相互作用時(shí)有較大的差異。與野生型銅綠假單胞菌模式菌株P(guān)AO1相比，P.aeruginosaDK2-P2M24-2003在與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)過程中產(chǎn)生極少量的綠膿菌素、鼠李糖脂、PQS等毒力因子，因此金黃色葡萄球菌的生長不會(huì)被抑制。金黃色葡萄球菌能夠在共培養(yǎng)中逆轉(zhuǎn)P.aeruginosaDK2-P2M24-2003的自溶現(xiàn)象，而P.aeruginosaDK2-P2M24-2003產(chǎn)生的HAQ類物質(zhì)能夠保護(hù)金黃色葡萄球菌免受妥布霉素(治療囊胞性纖維癥的常用藥)的清除，通過這種共生的種間關(guān)系共同存在于宿主呼吸道病灶。

Alves等(2018)發(fā)現(xiàn)在混合細(xì)菌感染生物膜形成和非附著性細(xì)菌生長的初期，金黃色葡萄球菌往往占據(jù)主導(dǎo)地位，是銅綠假單胞菌附著的先驅(qū)。Yang等(2011)在銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，銅綠假單胞菌的Ⅳ型菌毛和金黃色葡萄球菌提供的胞外DNA能夠促進(jìn)混合生物膜的形成。在混合細(xì)菌感染中，銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的混合生物膜往往會(huì)出現(xiàn)更強(qiáng)的耐藥性從而導(dǎo)致感染難以治愈(Daltonetal.，2011；Pastaretal.，2013)。當(dāng)銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌共存于同一病灶中時(shí)，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的一種可擴(kuò)散的AI-2群體感應(yīng)小分子能夠被銅綠假單胞菌接收，銅綠假單胞菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)被激活后產(chǎn)生大量的胞外產(chǎn)物，如彈性蛋白酶、鼠李糖脂、外毒素和吩嗪類物質(zhì)引起宿主的炎癥反應(yīng)并且降低、抑制宿主免疫系統(tǒng)對銅綠假單胞菌的殺傷(Jensenetal.，2007；Caldwelletal.，2009；Strateva & Mitov，2011；Lietal.，2015)。另外，革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁主要成分之一的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)能夠作為激活銅綠假單胞菌pqs群體感應(yīng)系統(tǒng)的信號分子，增強(qiáng)銅綠假單胞菌PQS系統(tǒng)控制的綠膿菌素、彈性蛋白酶、鼠李糖脂和HQNO等胞外毒力因子的表達(dá)，從而顯著推進(jìn)宿主病情的發(fā)展(Korgaonkaretal.，2013)。

2 銅綠假單胞菌與大腸埃希氏菌的相互作用

銅綠假單胞菌與大腸埃希氏菌的相互作用主要集中在混合生物膜形成的研究。Lopes等(2011)發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌的群體感應(yīng)調(diào)控產(chǎn)物能夠抑制大腸埃希氏菌的生長、生物膜的形成，但是大腸埃希氏菌的代謝產(chǎn)物能夠促進(jìn)銅綠假單胞菌生物膜以及銅綠假單胞菌和大腸埃希氏菌共培養(yǎng)時(shí)混合生物膜的形成。然而，大腸埃希氏菌在低營養(yǎng)R2A培養(yǎng)基上形成生物膜的速度較慢，但是在大腸埃希氏菌菌落上接種銅綠假單胞菌后，大腸埃希氏菌數(shù)目顯著增加并且生物膜形成速率也加快(Alessandro & Packman，2014)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在銅綠假單胞菌培養(yǎng)體系中引入大腸埃希氏菌后，銅綠假單胞菌的生物膜產(chǎn)量下降，并且銅綠假單胞菌在形成的混合生物膜中的數(shù)量也降低了，表明在這種培養(yǎng)條件下大腸埃希氏菌對銅綠假單胞菌的生長有一定的拮抗作用(Alessandro & Packman，2014)。在營養(yǎng)豐富的環(huán)境中，胞外吲哚(大腸埃希氏菌代謝產(chǎn)物)的積累曾被報(bào)道可以通過阻礙菌體運(yùn)動(dòng)來減少大腸埃希氏菌生物膜的形成(Bansaletal.，2007；Leeetal.，2007)。然而，銅綠假單胞菌的胞外代謝產(chǎn)物(如彈性蛋白酶)能夠降解吲哚，從而消除胞外吲哚對大腸埃希氏菌運(yùn)動(dòng)性和生物膜形成的抑制(Domkaetal.，2006；Chuetal.，2012)。而且銅綠假單胞菌產(chǎn)生的吡啶類化合物能夠螯合環(huán)境中的鐵離子，從而限制大腸埃希氏菌對鐵離子的吸收，進(jìn)而抑制其胞內(nèi)代謝(Keith，2003；Khare & Tavazoie，2015)。銅綠假單胞菌PQS信號小分子不僅能夠螯合鐵離子來限制大腸埃希氏菌的生長，還能誘導(dǎo)產(chǎn)生如氰化氫、鼠李糖脂、凝集素和吩嗪類物質(zhì)等多種毒力因子抑制大腸埃希氏菌的生長，其中吩嗪類是抑制大腸埃希氏菌生長的主要物質(zhì)(Jimenezetal.，2012；Khare & Tavazoie，2015)。而且大腸埃希氏菌在進(jìn)化過程中可以發(fā)生多種代謝途徑的突變以提高對銅綠假單胞菌毒力因子的耐受性。mprA基因突變可以解除mprA基因的編碼產(chǎn)物對多重耐藥外排泵EmrAB的功能抑制，促進(jìn)大腸埃希氏菌泵出進(jìn)入其胞內(nèi)的銅綠假單胞菌毒力因子；fpr超等位基因突變能夠編碼大量的Fpr蛋白促進(jìn)大腸埃希氏菌的厭氧代謝；而孔蛋白編碼基因ompC突變可以影響大腸埃希氏菌孔蛋白的功能，從而降低綠膿菌素從孔蛋白進(jìn)入胞內(nèi)的量，進(jìn)而降低綠膿菌素對大腸埃希氏菌的毒性(Khare & Tavazoie，2015)。

以上這些進(jìn)化后的病原菌形成種間共存策略的發(fā)現(xiàn)讓人非常驚訝，因?yàn)殂~綠假單胞菌具有復(fù)雜的群體感應(yīng)系統(tǒng)，并且是具有強(qiáng)大生物膜形成能力的病原菌，能夠產(chǎn)生多種毒力因子去抑制生物膜中其他微生物的生長(Heoetal.，2007；Waite & Curtis，2009)，而自然進(jìn)化使病原菌產(chǎn)生多種方式來逆轉(zhuǎn)這種抑制作用?？偟膩碚f，對于銅綠假單胞菌與大腸埃希氏菌共存現(xiàn)象的解釋有2種，一種是這2種細(xì)菌之間出現(xiàn)了營養(yǎng)利用方面的協(xié)同作用(細(xì)菌之間主要是競爭關(guān)系)，然后大腸埃希氏菌產(chǎn)生耐受性或者主動(dòng)干擾銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)，最終導(dǎo)致銅綠假單胞菌的細(xì)菌毒力和生物膜決定基因的表達(dá)降低；另一種解釋則側(cè)重于大腸埃希氏菌和銅綠假單胞菌之間可能存在的一種偶然性的生存契合，即大腸埃希氏菌為銅綠假單胞菌提供營養(yǎng)和其他物質(zhì)，而銅綠假單胞菌在進(jìn)化過程中由于種間競爭導(dǎo)致的群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控能力降低為大腸埃希氏菌的生存留有余地，從而實(shí)現(xiàn)種間共存(Venturi & Subramoni，2009；Khare & Tavazoie，2015)。

3 銅綠假單胞菌與肺炎克雷伯氏菌的相互作用

銅綠假單胞菌與肺炎克雷伯氏菌之間相互作用的研究鮮有涉足。Lee等(2013)研究發(fā)現(xiàn)，由銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌Pseudomonasfluorescens和肺炎克雷伯氏菌三者形成的混合生物膜比單菌形成的生物膜耗時(shí)長，混合生物膜內(nèi)的生物量低于單菌形成生物膜中的生物量，但是混合生物膜明顯增強(qiáng)了對SDS和妥布霉素的耐受性。最近，本課題組在關(guān)于銅綠假單胞菌與肺炎克雷伯氏菌相互作用的研究中發(fā)現(xiàn)，銅綠假單胞菌與肺炎克雷伯氏菌在非接觸性共培養(yǎng)時(shí)，肺炎克雷伯氏菌的生長不會(huì)被銅綠假單胞菌分泌到周圍環(huán)境中的毒力因子限制，但在共培養(yǎng)條件下肺炎克雷伯氏菌的生長則會(huì)被銅綠假單胞菌顯著抑制。通過共進(jìn)化實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)肺炎克雷伯氏菌的生長在初始階段受到明顯抑制，但在進(jìn)一步共培養(yǎng)過程中比例有所增加，最后肺炎克雷伯氏菌可以與銅綠假單胞菌共存于同一體系中，并在14個(gè)周期(24 h更換一次培養(yǎng)基為一個(gè)周期)后形成動(dòng)態(tài)平衡。銅綠假單胞菌與肺炎克雷伯氏菌共培養(yǎng)與銅綠假單胞菌純培養(yǎng)相比，肺炎克雷伯氏菌可以提高銅綠假單胞菌的脂質(zhì)代謝、硫代謝、抗菌物質(zhì)的生物合成和6型蛋白分泌系統(tǒng)(T6SS)的功能，但降低了銅綠假單胞菌氨基酸代謝相關(guān)基因的表達(dá)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在銅綠假單胞菌與肺炎克雷伯氏菌共進(jìn)化過程中形成動(dòng)態(tài)平衡后，銅綠假單胞菌中鞭毛編碼基因和H1-T6SS相關(guān)基因的表達(dá)量均顯著高于銅綠假單胞菌純培養(yǎng)體系，并且在共培養(yǎng)過程中銅綠假單胞菌出現(xiàn)了lasR突變體，導(dǎo)致銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控減弱，而鞭毛相關(guān)菌體運(yùn)動(dòng)性和H1-T6SS介導(dǎo)的殺菌作用可以使銅綠假單胞菌繼續(xù)控制肺炎克雷伯氏菌的比例，從而維持體系中混合菌群的動(dòng)態(tài)平衡(Zhaoetal.，2018)。

4 銅綠假單胞菌與鮑曼不動(dòng)桿菌的相互作用

鮑曼不動(dòng)桿菌是院內(nèi)呼吸道感染(配備呼吸機(jī)的患者)分離率最高的病原菌之一，同時(shí)也是最難控制和治療的病原菌之一(Michalopoulos & Falagas，2010；楊青等，2016)。這是因?yàn)轷U曼不動(dòng)桿菌形成生物膜的能力促使其能夠在多數(shù)壓力環(huán)境以及抗生素存在的環(huán)境下生存(Tomaras，2003；Nucleoetal.，2009)。在感染病灶中通常都能檢測到銅綠假單胞菌與鮑曼不動(dòng)桿菌的存在，而且銅綠假單胞菌與鮑曼不動(dòng)桿菌共同引起的感染致死率非常高(Dentetal.，2010)。Gospodarek等(2009)通過基因組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)鮑曼不動(dòng)桿菌與銅綠假單胞菌具有65%的基因組同源性，并且兩者都能通過高絲氨酸內(nèi)酯類小分子促進(jìn)群體感應(yīng)系統(tǒng)中各種毒力基因的表達(dá)。銅綠假單胞菌有2種高絲氨酸內(nèi)酯(AHL)分子，一種是由lasⅠ產(chǎn)生的3-oxo-C12HSL，一種是由rhlⅠ產(chǎn)生的C4-HSL，3-OH-C12HSL是鮑曼不動(dòng)桿菌中僅有的一種AHL分子(Niuetal.，2008)。Bhargava等(2012)發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的毒力因子不會(huì)抑制鮑曼不動(dòng)桿菌的生長。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，鮑曼不動(dòng)桿菌AHL分子能夠誘導(dǎo)lasⅠ、rhlⅠ雙突變的銅綠假單胞菌形成生物膜，并且野生型銅綠假單胞菌的培養(yǎng)液能夠促進(jìn)AHL缺陷的鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜(鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜的合成是由AHL介導(dǎo)的群體感應(yīng)系統(tǒng)調(diào)控)的形成，這也在一定程度上解釋了臨床上對鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌混合感染的難治愈性，因?yàn)樵诨旌细腥静≡钪絮U曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌混合生物膜形成的可能性增大，并表現(xiàn)出對抗生素極強(qiáng)的耐藥性(Burm?lleetal.，2006)。

5 銅綠假單胞菌與白色念珠菌Candida albicans的相互作用

白色念珠菌雖然是健康皮膚和黏膜菌群中常見的非致病性共生菌，但它也是引起呼吸道感染的病原菌之一。根據(jù)先前的研究，銅綠假單胞菌產(chǎn)生的吩嗪類物質(zhì)(如綠膿菌素)能夠抑制白色念珠菌的代謝和生物膜形成，并且銅綠假單胞菌能夠結(jié)合并殺死菌絲形態(tài)的白色念珠菌，但不會(huì)殺死酵母形態(tài)的白色念珠菌(Kerretal.，1999；Hogan，2002；Guptaetal.，2005；Kalelietal.，2010)。Hogan等(2002)研究發(fā)現(xiàn)銅綠假單胞菌群體感應(yīng)信號分子3-oxo-C12HSL及其結(jié)構(gòu)相似的分子能夠抑制白色念珠菌菌絲的生成，這可能是因?yàn)?-oxo-C12HSL與白色念珠菌酵母形態(tài)產(chǎn)生的毒力因子法尼醇(Farnesol，具有12個(gè)碳原子的倍半萜結(jié)構(gòu))結(jié)構(gòu)類似，而法尼醇能夠抑制白色念珠菌菌絲的生成(McAlesteretal.，2008)。這是因?yàn)榘咨钪榫男螒B(tài)轉(zhuǎn)變涉及2種截然不同的信號系統(tǒng)，一種是RAS-cAMP蛋白激酶A通路，另一種是激活有絲分裂的蛋白激酶通路。Davishanna等(2010)的研究認(rèn)為，法尼醇能夠抑制RAS-cAMP蛋白激酶A通路從而抑制白色念珠菌由酵母形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榫z形態(tài)，但是也有學(xué)者認(rèn)為法尼醇抑制了有絲分裂蛋白激酶通路。因此對法尼醇抑制白色念珠菌的形態(tài)轉(zhuǎn)變機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究(McAlesteretal.，2008)。

除此之外，白色念珠菌產(chǎn)生的法尼醇能夠抑制銅綠假單胞菌pqs群體感應(yīng)系統(tǒng)。法尼醇能夠抑制銅綠假單胞菌PQS信號分子的合成，從而降低了綠膿菌素、鼠李糖脂等毒力因子的合成(Cuginietal.，2010)，并顯著抑制銅綠假單胞菌的群集運(yùn)動(dòng)，這可能是因?yàn)殂~綠假單胞菌的群集運(yùn)動(dòng)主要由鼠李糖脂介導(dǎo)(McAlesteretal.，2008)。銅綠假單胞菌運(yùn)動(dòng)性的降低更容易促進(jìn)混合生物膜的形成，而混合生物膜具有更強(qiáng)的耐藥性和對惡劣環(huán)境的適應(yīng)性，從而使感染的臨床治療的難度大大增加(El-Azizietal.，2004)。白色念珠菌和銅綠假單胞菌共培養(yǎng)與銅綠假單胞菌的純培養(yǎng)相比，白色念珠菌能夠促進(jìn)銅綠假單胞菌合成大量的吡啶等鐵離子載體，能夠誘導(dǎo)3種毒力因子——外毒素A、內(nèi)肽蛋白酶和吡啶的產(chǎn)生，并且在鐵離子充足的培養(yǎng)基中，白色念珠菌的存在能夠極大促進(jìn)銅綠假單胞菌的增殖，這也反映了在白色念珠菌和銅綠假單胞菌混合感染中，銅綠假單胞菌的致病能力將顯著增加(Lamontetal.，2002；Trejo-Hernándezetal.，2014)。

6 總結(jié)與展望

過去認(rèn)為細(xì)菌性感染通常是由優(yōu)勢病原菌的毒性引起，而近代研究證明大多數(shù)感染是由多種病原菌定植造成并且其毒性發(fā)揮也是多因素的。病原菌之間存在復(fù)雜的相互作用，通過多種化學(xué)物質(zhì)或物理接觸進(jìn)行種間交流，共同促進(jìn)疾病的發(fā)展?，F(xiàn)在人們更加重視通過共培養(yǎng)的方法來模擬病灶中多種微生物共存的方式來研究病原菌之間的相互作用。這些研究初步揭示呼吸道病原菌相互作用涉及到的種間信號傳遞、代謝物交換和物理接觸等一系列分子機(jī)制，并且相互作用的結(jié)果通常是對病原菌行為的調(diào)節(jié)，包括毒力因子合成、生物膜形成和抗生素耐藥性或耐受性的改變。這些研究僅僅是停留在2種菌或3種菌之間的相互作用，對于呼吸道中更為復(fù)雜的多菌相互作用機(jī)制還不能完全被解釋。因此，還需要更多更深入更全面地基于動(dòng)物宿主或者臨床患者研究來詮釋病原菌之間相互作用影響疾病進(jìn)程的關(guān)系，為進(jìn)一步治療方案的改進(jìn)、疾病控制和新藥的研發(fā)提供參考。