非洲豬瘟流行病學特點、病理過程與解決思路

余 剛，劉自逵，，4*，張運強，劉輝旺

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，湖南 長沙 410128；2 湖南加農(nóng)正和生物技術有限公司，湖南 瀏陽 410329；3.湖南省獸藥工程技術研究中心，湖南 長沙 410128；4.北京精免大觀生物科技研究院有限公司，北京 100096）

1 非洲豬瘟（ASF）的流行病學特點與病理過程

臨床上可觀察到患非洲豬瘟的豬會發(fā)生特大的敗血脾、肝臟的脂肪變性、大葉性肺炎，胸腔與腹腔積液、紅染，淋巴結(jié)特別是頸部淋巴結(jié)變黑、出血，全身廣泛性出血與炎癥等。

ASF 是直接接觸性、惡性傳染病，不接觸無傳染。非洲豬瘟病毒（ASFV）為非洲豬瘟屬的唯一成員、唯一的蟲媒DNA 雙股螺旋病毒，其本身缺乏核蛋白體、線粒體、代謝酶系統(tǒng)和能量等，病毒自身不能在環(huán)境中增殖，必須侵入宿主的細胞才能進行復制，用PCR 檢測出核酸陽性豬只并不一定具有感染性。2018 年8 月3 日我國首次報道，后確定其毒株為格魯吉亞Ⅱ型強毒株，它傳染性低但致死率非常高，初次感染可達100%，隨著時間的推移病毒毒力有下降的趨勢，目前在廣東省發(fā)生的非洲豬瘟的情況，致死率沒有100%，有一部分豬會存活下來，但在廣西發(fā)生的情況有所區(qū)別，其致死率還能達到100%。

鼻腔和口腔是主要的感染門戶，消化道和呼吸道黏膜的完整以及共同黏膜免疫屏障對防控非洲豬瘟是有幫助的。有人做了一個試驗，通過口腔注射102HAD50（半數(shù)紅細胞吸附量）病毒量豬只不感染，但鼻腔注射102HAD50則出現(xiàn)顯著感染現(xiàn)象，說明經(jīng)鼻感染比經(jīng)口感染要容易得多；還有人驗證，在飼料中的最小感染量為104TCID50（半數(shù)組織培養(yǎng)感染量），而在水中的最小感染量只為100TCID50，說明該病毒喜歡潮濕的環(huán)境，干燥對防控非洲豬瘟是非常有效的，而要通過飼料途徑感染非洲豬瘟的可能性比較小，是安全的。

非洲豬瘟病毒首先感染咽峽的扁桃體并刺激產(chǎn)生抗體，并建立起病毒復制點（ASFV 主要在宿主單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等中復制，借助巨噬細胞的內(nèi)吞作用而入侵宿主細胞，并借助宿主細胞本身的代謝環(huán)境、原料、能量和復制場所進行繁殖子代病毒）。然后侵入豬頭部與頸部的淋巴結(jié)如咽后淋巴結(jié)、下頜淋巴結(jié)、腮腺淋巴結(jié)、氣管支氣管淋巴結(jié)等，并在此繼續(xù)產(chǎn)生抗體。由于抗體的調(diào)理作用導致了ASFV 感染肺部大量的巨噬細胞，經(jīng)過右淋巴導管或左氣管干進入頸靜脈、前腔靜脈，并隨心臟運送到全身毛細血管，建立血管內(nèi)皮細胞的持續(xù)感染和頑固性的病毒血癥。ASFV 隨血液循環(huán)進入肺臟、心臟、肝臟和脾臟后，會引發(fā)心肌炎、肝臟脂肪變性與硬化、大葉性肺炎等，導致胸腔、心包與腹腔積液、紅染。大量病毒隨血液侵入脾臟并刺激B 細胞產(chǎn)生大量抗體，在血管內(nèi)形成大量可溶性Ag-Ab 復合物，堆積在血管內(nèi)皮表面，引發(fā)內(nèi)皮細胞損傷，使得炎癥趨化因子IL-1、IL-6 和TNF-α 大 量 表 達， 引發(fā)毛細血管末梢微血栓形成、多種器官組織的微血管損傷與破裂和Ⅲ型超敏反應，病豬迅速開始表現(xiàn)發(fā)病與死亡。

ASFV 的終末宿主為豬和疣豬，唯一的中間宿主為鈍緣軟蜱。終末宿主和中間宿主相對來說比較單一。其他各種媒介如蒼蠅、蚊子、老鼠、飛鳥、人體、土壤、水源及各種用具等只能攜帶病毒，并不能復制和增殖病毒。

2 非洲豬瘟的防控思路

2.1 降低環(huán)境病毒載量來減少病毒與宿主的接觸

ASFV 只能在宿主細胞內(nèi)存活與增殖，在非宿主細胞內(nèi)、其他物體的表面及內(nèi)部或已經(jīng)死亡的宿主細胞內(nèi)都不能增殖，并且其感染性也會逐漸消失，因此，ASFV 在死豬、豬肉制品如臘肉、熟肉、香腸、血腸和肉丸等、糞便、泔水等處只能停留、不能增殖。有必要對所有用具、物品、車輛、人員、飼料和水源等進行嚴格清洗、消毒或駐留足夠長的時間來降低病毒攜帶量，在接觸中間宿主和終末宿主之前讓其完全喪失致病力。

2.1.1 消毒是降低環(huán)境病毒載量的最有效方式

消毒劑的選擇與消毒方式、消毒濃度、消毒溫度、作用時間、環(huán)境的清潔度、環(huán)境中有機物質(zhì)的含量、水質(zhì)等因素，對消毒的效果影響非常大。因此，有必要對各種消毒劑、消毒方式等在不同環(huán)境中確實的消毒效果進行調(diào)查，不可盲目使用。同時，還應避免過度消毒對環(huán)境、水源、飼料的污染破壞等，更應避免帶豬消毒如濕度增加、溫度變化、潔度和刺激度的變化。消毒作用主要體現(xiàn)在兩個方面：1）使病毒蛋白質(zhì)發(fā)生變性，利用強酸如甲酸、醋酸、苯甲酸、磷酸、乳酸、丁酸、富馬酸及其鹽類，強堿如火堿、生石灰及其鹽類；2）與病毒蛋白進行不可逆的結(jié)合，各種鄰苯基苯酚，醛如甲醛、乙醛、戊二醛、苯扎溴銨和十二烷基磺酸鈉等，還有各種陽離子表面活性劑如洗滌劑、雙鏈季胺鹽、次氯酸鹽和碘化合物等，也對ASFV 敏感。在不同環(huán)境中，評估消毒藥的具體效果。消毒的程序也很重要，各種用具、欄舍最好是先水洗，利用洗滌劑如速清泡洗至物見本色，再用速清1:100 消毒，最后再進行清洗后干燥；對于欄舍周圍2 m 范圍內(nèi)先將所有雜物、雜草、糞便、廢棄的用具進行嚴格清理，防止蚊蠅滋生、雜草叢生，然后用3% ～5% 燒堿或20% 的生石灰乳進行嚴格噴涂；對生產(chǎn)區(qū)的道路、欄舍過道和護欄等先進行清掃、水洗和干燥，然后用3% ～5% 的燒堿、20% 的生石灰如噴灑路面或過道、墻壁等。消毒的頻率和強度也要把控好，既要達到徹底消毒的目的、又要防止過度消毒，避免對豬場內(nèi)外環(huán)境的生態(tài)造成嚴重破壞,如對水源和土壤的嚴重污染。對風險區(qū)、道路、走道、護欄和耐燃用具等用火焰消毒，是一種非常安全、有效的消毒方式；對飼料庫房、藥品儲存室、實驗室和空欄等也可以采用熏蒸消毒。沒有感染的豬場嚴禁帶豬消毒和飼料消毒，因為帶豬消毒、飼料消毒可能破壞豬的第一道皮膚屏障、消化道和呼吸道黏膜屏障等，加快ASFV 的傳播速度。

2.1.2 建立有效的隔離屏障和緩沖帶，有利于阻擋ASFV 入侵豬場

有許多安全等級非常高的豬場，也感染了非洲豬瘟，并且逐步提高安全等級也無法幸免，這一點讓養(yǎng)豬人感覺到非常恐怖。這是怎么一回事？讓人無法理解。但細想一下，再完善的生物安全和消毒措施都有漏洞，所謂 “百密一疏” 嘛！同時單純的打打殺殺也不是一個事，即使每天都對豬場的每一個角落都進行徹底消毒，其實也做不到100% 殺死細菌和病毒，只要有移動的媒介存在就有可能把新的病毒帶入豬場。而移動的媒介如蒼蠅與蚊子、老鼠、飛鳥甚至是一陣風也可能把新病毒帶入豬場，更不用說飛馳的車輛（五類車：拉豬車、拉料車、拉糞車、私家車、無公害處理車）、移動的人（五類人：殺豬人、拉豬人、養(yǎng)豬人、豬場主、獸醫(yī)）、移動的掃帚和高壓的清洗槍等。在南方來說，即使你做得再好，一場雨就可以使你的所有努力全部都白費。因此，有必要在豬場周圍建立起一個有效的隔離屏障和緩沖帶，如筑高墻，修建一個至少2 m高圍繞整個豬場的隔離圍墻，同時在高墻內(nèi)外各修建一個2 m 寬的隔離帶，可以有效阻擋大部分病毒進入豬場，因為ASFV 沒長腿走不過2 m，也沒有長翅膀飛不過2 m。清除所有雜草、處理所有雜物，防止蚊蠅滋生，并對高墻和內(nèi)外隔離帶嚴格進行的消毒處理，同時在高墻外圍鋪上1 m 寬的尖碎石防止老鼠進入豬場，還要防止雨水往豬場內(nèi)流動，只允許水往外流。

2.2 提高感染閾值來保護易感動物

2.2.1 維護豬消化道和呼吸道完整有利于防控非洲豬瘟

黏膜免疫在非洲豬瘟防控上也發(fā)揮重要的作用。黏膜系統(tǒng)是機體與外界直接接觸、病原體侵入的門戶，而非洲豬瘟侵入的門戶首選呼吸道和消化道，因此，維護消化道、呼吸道黏膜的完整、維護共同黏膜免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能完整非常關鍵。不同部位黏膜免疫反應相關聯(lián)形成共同黏膜免疫屏障（CMIS）。SIgA 作用于黏膜局部，是黏膜中關鍵因子，對維護黏膜上皮細胞之間的緊密連接，對由于食物攝入或由空氣吸入的某些抗原物質(zhì)具有封閉作用；SIgA 與病毒結(jié)合，可阻擋病毒粘附于宿主細胞、中和病毒和病毒產(chǎn)生的毒素，增加黏液蛋白酶對抗原降解等免疫清除作用，避免抗原進入機體，從而避免某些超敏反應發(fā)生。SIgA 所具有的超高產(chǎn)量、超高免疫清除率，超出了其他所有Ig，能有效防御疾病、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和防止某些超敏反應與自身免疫病。ASFV 通過鼻、口侵入呼吸道和消化道黏膜后，引發(fā)黏膜炎癥，SIgA 由SC 介導轉(zhuǎn)運到消化道、呼吸道和泌尿生殖道，應防止轉(zhuǎn)運SIgA 的能力下降，造成CMIS 受損。因此，維護消化道和呼吸道完整有利于防控非洲豬瘟。

飼料熟化對非洲豬瘟防控的效果需要進一步的研究與評估，但飲水的酸化有利于防控非洲豬瘟。有人在大談特談顆粒熟化料一定比自配料安全，討論85 ℃ 3 min、10 min 和20 min 熟化哪個更安全？要說飼料的安全問題，作者的觀點是自配料更安全，主要有這幾個方面的原因：1）自配料現(xiàn)配現(xiàn)用，營養(yǎng)物質(zhì)的損耗相對來說比較小，生產(chǎn)過程和原材料質(zhì)量比較好把控，可以杜絕豬源性動物蛋白如血粉、腸膜蛋白和肉骨粉等使用；2) 自配料的原料粉碎粒徑比較大，一般不會引發(fā)豬的胃潰瘍和嘔吐現(xiàn)象，而從實際使用顆粒料飼喂母豬的情況來看，嘔吐現(xiàn)象比較多見，這與顆粒料原料粉碎粒徑過細容易誘發(fā)胃潰瘍有一定關系；3）長期飼喂顆粒料的母豬容易發(fā)生便秘，而便秘對于防控非洲豬瘟是極為不利的；4）長期飼喂顆粒料更容易引發(fā)代謝紊亂，特別在非洲豬瘟防控的關鍵節(jié)點上，飼料要在倉庫放置一個月的時間會比較安全，這樣自配料就有優(yōu)勢，我們可以考慮將原材料放置一個月時間，而不是把飼料放置一個月時間，而顆粒料的保質(zhì)期一般為45 d，對于一些氧化活性成分如維生素、抗氧化劑、脂肪等長期保存有巨大的挑戰(zhàn)。飼料熟化再加上放置一定時間，飼料中維生素的破壞或損耗可能比較大，因此，長期飼喂這樣的飼料有可能引發(fā)非常嚴重的代謝紊亂；5）顆粒料由于熟化的原因，往往在飼喂過程中更容易招蚊子，根據(jù)目前的流行病學調(diào)查來看，蒼蠅、蚊子有傳播非洲豬瘟病毒的風險。從以上情況來看，飼料熟化可能加重了豬消化道和呼吸道的破壞，增加了其炎癥，對非洲豬瘟防控極為不利，臨床觀察到一些豬場飼喂豬顆粒料發(fā)生非洲豬瘟情況要多一些，也可以為證。凡是造成豬黏膜損傷的因素，必將對非洲豬瘟防控產(chǎn)生不利影響。

2.2.2 提高機體的非特異性免疫功能，有利于提高豬的抗ASFV 感染閾值

ASF 屬于免疫亢奮性疾病，機體巨噬細胞的吞噬能力越強、體液免疫產(chǎn)生抗體的能力愈大，病毒的復制、病毒血癥和Ⅲ型超敏反應愈強烈，病豬的發(fā)病和死亡更快。ASFV 在宿主細胞內(nèi)建立起各種各樣的逃避機制來規(guī)避和操縱宿主免疫應答的能力，由于病毒顆粒比較大，吸引巨噬細胞的內(nèi)吞作用感染豬。在抗體和補體共同作用下促進了其吞噬作用，形成了細胞內(nèi)病毒顆粒和細胞外病毒顆粒。ASFV 通過干擾Th1 細胞產(chǎn)生干擾素-γ，限制了感染巨噬細胞的活化、抑制其凋亡和自噬作用，不讓巨噬細胞產(chǎn)生抗病毒活性并在其周圍吸附大量紅細胞，確保其存活與加快病毒復制增殖，還阻礙來支援的淋巴細胞。被感染的細胞被血液和淋巴轉(zhuǎn)運至扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟和骨髓等處產(chǎn)生免疫應答，產(chǎn)生大量非中和抗體，感染后4 ～8 d 往往出現(xiàn)持續(xù)性的病毒血癥；即使有了中和抗體，其與補體一道也只能識別并中和細胞外游離的病毒顆粒，而對于已經(jīng)進入細胞內(nèi)病毒顆?；蛞验_始復制的病毒則完全無效。持續(xù)性的病毒血癥與微血管內(nèi)皮細胞堆積大量可溶性抗原抗體復合物，引發(fā)Ⅲ型超敏反應。病毒隨著體液、血液排到環(huán)境中，病豬成為了活動的風險源，排毒可持續(xù)63 ～70 d。

ASFV 的滅活苗對防控非洲豬瘟無效。主要是因為滅活疫苗更多地激活Th2 型體液免疫應答、提高抗體滴度。Th2 細胞分泌IL-4，不分泌IL-2 及IFN-γ，加快病毒的復制、持續(xù)性病毒血癥和微循環(huán)障礙，引發(fā)局部組織水腫、壞死、瘀血、大出血和快速死亡。因而組織滅活苗對非洲豬瘟防控不但沒有控制作用，反而會加快病毒的傳播、加快生豬死亡。其致死的主要機理，是ASFV 感染豬肺血管內(nèi)巨噬細胞的活化造成肺泡水腫，血液回流受阻，血液中氧氣被耗竭而嚴重缺氧死亡。

在非洲豬瘟防控上，非特異性免疫或細胞免疫應答占主導，如大豬的胸腺萎縮或保育豬藍耳病不穩(wěn)定加速了胸腺功能的退化，無法產(chǎn)生足量的T 細胞或有活性的T 細胞，細胞毒性T 細胞（CTL）多為CD8+T 細胞，通過來攻擊被ASFV感染的細胞膜，釋放穿孔素、顆粒酶攻擊靶細胞形成跨膜孔道，引起細胞破裂而死亡；還攻擊感染細胞的胞核，通過活化核酸酶，破壞靶細胞和病毒DNA，同歸于盡而凋亡（即程序性死亡）。Th1 細胞針對細胞內(nèi)入侵的宿主細胞誘導干擾素的產(chǎn)生，分泌IL-2、IFN-γ( Ⅱ型，遇酸變性) 及IFN-β(I 型，遇酸穩(wěn)定)，不分泌IL-4，主要參與細胞免疫及炎癥反應，抗病毒、抗胞內(nèi)寄生菌等作用，為易感染動物的早期保護提供幫助。

總之，在非洲豬瘟防控方面，維護胸腺功能防止胸腺過早退化、提高T 細胞和SIgA 的活性、維護呼吸道和消化道黏膜的完整可有效提高豬的感染閾值，同時也需要通過嚴格的生物安全來降低環(huán)境病毒載量，只有雙管齊下，才能有效防控非洲豬瘟。