Livin與STAT-5在鼻咽癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究

李樹華 鄧偉 王杰

鼻咽癌（NPC）是我國華南地區(qū)的高發(fā)疾病，其發(fā)病率高達(dá)50/10萬，是最常見的頭頸部惡性腫瘤之一[1]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程與細(xì)胞凋亡抑制有著密切的關(guān)系，已成為腫瘤研究的熱點(diǎn)[2]。Livin作為近年來凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs）家族中新發(fā)現(xiàn)的重要成員而備受關(guān)注，在細(xì)胞凋亡中有較強(qiáng)的抑制作用[3]。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducers and activators of transcription,STAT）是一類影響基因轉(zhuǎn)錄的因子，其異常激活可促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生[4]。STAT-5是該家族中重要的成員，具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活轉(zhuǎn)錄雙重功能，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖分化，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[5]。研究發(fā)現(xiàn)，STAT-5在多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)[6]。目前，關(guān)于Livin與STAT-5在鼻咽癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究尚未發(fā)現(xiàn)。本文搜集2015年1月～2017年4月我院鼻咽癌及鼻咽炎患者的樣本資料，采用SP免疫組化方法檢測Livin與STAT-的表達(dá)情況，并探討與相關(guān)臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。

資料與方法

1臨床資料

收集2015年1月～2017年4月就診于我院門診病理確診的鼻咽癌患者（78例）及慢性鼻咽炎患者（135例）。所有鼻咽癌患者均經(jīng)病理證實(shí)為鱗癌,且未行放療和化療等治療。其中鼻咽癌患者：男性57例，女性21例，年齡18～72歲，中位年齡43歲；慢性鼻咽炎患者：男性115例，女性20例，年齡10～68歲，中位年齡38歲。根據(jù)2002年AJCC對(duì)鼻咽癌診療指南中分期標(biāo)準(zhǔn)，詳細(xì)記錄患者臨床分期、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)情況。

2主要實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗人Livin多克隆抗體（武漢博士德生物工程公司,貨號(hào)：BA1743）、兔抗人STAT-5多克隆抗體（武漢博士德生物工程公司，貨號(hào)：BA1411）、SP免疫組化染色即用型快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒（福州邁新生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：KIT-5001）；DAB顯色劑（武漢博士德生物工程公司,貨號(hào)：AR1021）。

3主要步驟

所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定24小時(shí)，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，脫蠟，染色前用微波爐進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

4結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

采用雙盲法閱片，與1位病理醫(yī)師一起獨(dú)立觀察每張切片中隨機(jī)5個(gè)不重疊的視野。評(píng)分及陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)[7，8]：①按著色強(qiáng)度：無染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分；②按陽性細(xì)胞比例：＜5%為 0分，5%～25%為 1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；兩項(xiàng)相乘，0～1分為陰性，2～4分為弱陽性，5～8分為中度陽性，9分以上為強(qiáng)陽性。

5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為定性資料，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1Livin蛋白與STAT-5蛋白均主要表達(dá)于胞質(zhì)中（圖 a、b、c、d）。Livin蛋白在鼻咽癌組組中陽性表達(dá)率為64.10%，在鼻咽炎組織中陽性表達(dá)率為22.22%，兩組比較有顯著差異（P＜0.01）；STAT-5蛋白在鼻咽癌組組中陽性表達(dá)率為66.67%，在鼻咽炎組織中陽性表達(dá)率為20.00%，兩組比較有顯著性差異（P＜0.01）（見表 1）。

圖a Livin蛋白在鼻咽癌組組中表達(dá)（sp*400）

圖b Livin蛋白在鼻咽炎組組中表達(dá)（sp*400）

圖c STAT-5蛋白在鼻咽癌組組中表達(dá)（sp*400）

圖d STAT-5蛋白在鼻咽炎組織中的表達(dá)（sp*400）

表1 Livin與STAT-5在鼻咽癌組織及鼻咽炎組織中的表達(dá)

2Livin與STAT-5在鼻咽癌組組中表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

Livin與STAT-5在鼻咽癌組織中的蛋白表達(dá)與年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P＞0.05）,而與腫瘤的臨床分期、T分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見表 2）。

表2 Livin與STAT-5在鼻咽癌組織中表達(dá)與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

3Livin與STAT-5在鼻咽癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)（χ2=41.302，r=0.552）。（見表 3）

表3 Livin與STAT-5蛋白在鼻咽癌組組中表達(dá)的相關(guān)性分析

討論

鼻咽癌（NPC）在我國惡性腫瘤死亡疾病譜中位于14位[9]。目前國內(nèi)外對(duì)鼻咽癌的治療手段主要包括放療、化療、分子靶向治療、挽救性手術(shù)治療等[10]。其中放射性治療被公認(rèn)為鼻咽癌的首選治療，5年生存率達(dá)80%以上[11]。局部未控或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是鼻咽癌患者死亡的主要原因，困擾著醫(yī)務(wù)人員及患者[12]。因此,探索精準(zhǔn)的靶向治療，提高NPC患者的治愈率，增加預(yù)后效果，延長遠(yuǎn)期生存期已經(jīng)成為一種趨勢。

Livin是凋亡抑制蛋白 (Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族中新發(fā)現(xiàn)的重要成員之一，具有較強(qiáng)的凋亡抑制作用。在胚胎組織中存在高表達(dá)，而在正常成年人的大部分組織中呈現(xiàn)低表達(dá)或不表達(dá)[13]。研究發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，與胃癌、食管癌等發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[14，15]。目前認(rèn)為,Livin主要依賴兩個(gè)途徑：一是通過與天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）蛋白結(jié)合，阻斷Caspase途徑介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而抑制細(xì)胞凋亡[16]；二是Livin通過激活Janus激酶1和Janus激酶2（JNK1和JNK2），進(jìn)一步激活 TAKI/JNK1信號(hào)傳導(dǎo)途徑，從而起到凋亡抑制的作用[17]。

STAT-5是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducers and activators of transcription，STAT）家族中重要的成員之一，被認(rèn)為是細(xì)胞增殖促進(jìn)因子和凋亡抑制因子。研究發(fā)現(xiàn)，STAT-5包含兩個(gè)蛋白結(jié)構(gòu)基本相同的亞型：STAT-5a和 STAT-5b[4]。STAT-5的激活主要經(jīng)JAK2途徑，它的異常激活和過度表達(dá)均可誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生[18]。在腫瘤微環(huán)境中，許多惡性腫瘤細(xì)胞都發(fā)現(xiàn)STAT-5的異常表達(dá)，如：白血病、肺癌、乳腺癌、甲狀腺癌等[8，19]。

通過查閱文獻(xiàn)，尚無關(guān)于Livin與STAT-5在鼻咽癌中的表達(dá)研究報(bào)道。本文從蛋白水平研究Livin與STAT-5在鼻咽癌組織表達(dá)及與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系，現(xiàn)分析如下：①Livin蛋白與STAT-5蛋白在鼻咽癌組組中呈高表達(dá)，在鼻咽炎組織中呈低表達(dá)；②Livin與STAT-5在鼻咽癌組織中的蛋白表達(dá)與年齡、性別無明顯相關(guān)性，與腫瘤臨床分期、T分期、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等特征有相關(guān)性；③Livin與STAT-5在鼻咽癌組中表達(dá)呈正相關(guān)。綜上說明，Livin與STAT-5共同參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展過程，這可能是通過Livin激活JNK2，導(dǎo)致STAT-5異?；罨龠M(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移等。

綜上所述，腫瘤細(xì)胞的凋亡與鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展等密切相關(guān)，而腫瘤細(xì)胞的凋亡抑制，是導(dǎo)致放化療不敏感或耐受的原因之一。研究表明，Livin與STAT-5有望作為鼻咽癌新的治療靶點(diǎn)。此后可通過研發(fā)新型藥物抑制Livin與STAT-5蛋白表達(dá)，達(dá)到促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡目的，提高鼻咽癌的治愈率，為鼻咽癌治療的提供新思路。此后我們將繼續(xù)擴(kuò)大研究樣本數(shù)量以及患者遠(yuǎn)期生存率研究，以便更好的評(píng)估Livin與STAT-5表達(dá)對(duì)鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的意義和應(yīng)用價(jià)值，為臨床和科研工作提供更為精確的理論依據(jù)。