實(shí)時(shí)熒光定量PCR在兒童肺炎支原體感染中的臨床價(jià)值分析

范 新

（遼寧省丹東市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 丹東118000）

兒童肺炎是兒科常見(jiàn)的疾病，是導(dǎo)致3歲以內(nèi)嬰幼兒死亡的常見(jiàn)原因[1]，支原體感染肺炎是肺炎的常見(jiàn)類(lèi)型，占全部肺炎的20%[2]。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)兒童肺炎支原體DNA，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2013年4月至2016年6月期間我院收治的382例肺炎患兒，按《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)進(jìn)行診斷，其中男201例，女181例；0～4歲77例，4～7歲121例，7～10歲占107例，10～13歲占77例；血清標(biāo)本144份，支氣管灌洗液標(biāo)本95份，痰液標(biāo)本74份，胸腔積液標(biāo)本69份。

1.2 方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肺炎支原體DNA，儀器為BI-7500型全自動(dòng)熒光定量PCR儀及配套試劑。向DNA擴(kuò)增反應(yīng)管中加入樣本上清液2 μL，離心處理后置于樣品槽中進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：50℃預(yù)熱2 min，94℃ 12 s預(yù)變性 1個(gè)循環(huán)，將此作為熒光本底信號(hào)，然后94℃ 5 s變性，60℃ 30 s退火及延伸，40個(gè)循環(huán)后，于55℃采集熒光。PCR的結(jié)果用Ct值表示，繪制曲線圖，當(dāng)Ct值＜30，且增長(zhǎng)曲線呈S型判為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行t或卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

382例患兒肺炎支原體DNA陽(yáng)性為179例（46.9%），其中男患兒占96例（53.6%），女患兒占83例（46.4%），差異無(wú)顯著性（P＞0.05）；0～4歲占28例（15.6%），4～7歲占58例（32.4%），7～10歲占57例（31.8%），10～13歲占66例（36.9%），差異具有顯著性（P＜0.05）。

血清標(biāo)本肺炎支原體DNA陽(yáng)性21份（14.6%），支氣管灌洗液標(biāo)本肺炎支原體DNA陽(yáng)性90份（94.7%），痰液標(biāo)本肺炎支原體DNA陽(yáng)性51份（68.9%），胸腔積液標(biāo)本肺炎支原體DNA陽(yáng)性17份（24.6%），差異具有顯著性（P＜0.05）。

3 討 論

肺炎是兒科常見(jiàn)呼吸道疾病，尤以2歲以下的嬰幼兒最為多見(jiàn)，該病易反復(fù)發(fā)作以及引起一些并發(fā)癥，嚴(yán)重影響小兒的身體健康及生長(zhǎng)發(fā)育，據(jù)了解，小兒肺炎是導(dǎo)致3歲以內(nèi)小兒死亡的重要原因。肺炎支原體感染是肺炎的常見(jiàn)病因，資料顯示，在全部?jī)和鐓^(qū)獲得性肺炎中，由肺炎支原體感染導(dǎo)致的肺炎超過(guò)40%[3]。多見(jiàn)于兒童和青少年，除了會(huì)引起發(fā)熱、咳嗽、氣喘等癥狀，還可能引起肺壞死及一系列肺外并發(fā)癥，如心肌炎、腦膜炎等。

肺炎支原體是一種無(wú)細(xì)胞壁的超濾過(guò)性病原微生物，屬于原核細(xì)胞中最小的微生物，常常引起性呼吸道感染和原發(fā)性非典型肺炎。資料顯示，每隔3～5年，在兒童和青少年中就會(huì)流行一次肺炎支原體感染[4]。本研究結(jié)果顯示，382例患兒中有179例檢出肺炎支原體DNA陽(yáng)性，占到46.9%，其中男患兒占53.6%，女患兒46.4%，男女無(wú)明顯差異，這與其他報(bào)道相符[5]。肺炎支原體感染可發(fā)生各個(gè)年齡階段的兒童，本研究結(jié)果顯示，0～4歲的陽(yáng)性率為5.6%，4～7歲的陽(yáng)性率為32.4%，7～10歲的陽(yáng)性率為31.8%，10～13歲的陽(yáng)性率為36.9%，發(fā)現(xiàn)4歲及以上的兒童陽(yáng)性率明顯高于4歲內(nèi)的兒童，可能與4歲以上的兒童開(kāi)始進(jìn)行學(xué)校學(xué)習(xí)，社交活動(dòng)增加，易感染性增加，加之身體素質(zhì)低下，所以容易發(fā)生肺炎支原體感染。在所有標(biāo)本中，血清標(biāo)本肺炎支原體DNA陽(yáng)性率最低，為14.6%，支氣管灌洗液標(biāo)本的陽(yáng)性率最高，為94.7%，而痰液標(biāo)本的陽(yáng)性率為68.9%，胸腔積液標(biāo)本的陽(yáng)性率為24.6%。提示用支氣管灌洗液標(biāo)本進(jìn)行肺炎支原體的檢測(cè)最為可靠。

綜上所述，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)兒童肺炎支原體感染實(shí)用、可行，其中4歲及以上患兒肺炎支原體DNA陽(yáng)性的檢出率較高，采用支氣管灌洗液標(biāo)本最為可靠，血清標(biāo)本的檢出率最低。