TP-光激化學(xué)發(fā)光、TPPA、TRUST試驗(yàn)的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)

陶春妃

摘要：目的? 通過(guò)對(duì)TP-光激化學(xué)發(fā)光、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）的臨床應(yīng)用進(jìn)行評(píng)價(jià)，為臨床醫(yī)生在不同情況下選擇梅毒螺旋體抗體檢測(cè)方法提供依據(jù)。方法? 選取2019年4月1日～7月31日我院11619例住院患者、2458例門(mén)診患者及2983例健康體檢者進(jìn)行TP-光激化學(xué)發(fā)光和TRUST檢測(cè)，將TP-光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)陽(yáng)性或TRUST檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行TPPA法檢測(cè)，比較TP-光激化學(xué)發(fā)光及TRUST檢測(cè)結(jié)果，TP-光激化學(xué)發(fā)光、TRUST檢測(cè)及TPPA法檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的診斷價(jià)值，TP-光激化學(xué)發(fā)光、TRUST檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的診斷價(jià)值及TP-光激化學(xué)發(fā)光法S/CO值與TPPA結(jié)果。結(jié)果? TP-光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)門(mén)診陽(yáng)性率為6.18%，住院陽(yáng)性率為3.46%，體檢陽(yáng)性率為0.67%;TRUST檢測(cè)門(mén)診陽(yáng)性率為3.42%，住院陽(yáng)性率為1.11%，體檢陽(yáng)性率0.27%。對(duì)557例TP-光激化學(xué)發(fā)光陽(yáng)性和222例TRUST檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行TPPA法檢測(cè)，TPPA法陽(yáng)性率為79.73%，TP-光激化學(xué)發(fā)光陽(yáng)性率為98.30%，TRUST陽(yáng)性率為37.82%，三種方法檢測(cè)結(jié)果兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。TRUST檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的敏感度低于TP-光激化學(xué)發(fā)光，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以TPPA結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)對(duì)TP-光激化學(xué)發(fā)光結(jié)果的S/CO值分段分析，結(jié)果顯示S/CO值越高，與TPPA的陽(yáng)性符合率越高。結(jié)論? TP-光激化學(xué)發(fā)光靈敏度高，適用于梅毒的感染篩查及輔助診斷;TPPA法檢測(cè)適用于梅毒感染的確診，能有效排除TP-光激化學(xué)發(fā)光和TRUST假陽(yáng)性的問(wèn)題;TRUST檢測(cè)靈敏度較低，對(duì)梅毒螺旋體的篩查結(jié)果準(zhǔn)確性不及TP-光激化學(xué)發(fā)光和TPPA法檢測(cè)，不適合用于梅毒感染的篩查，可聯(lián)和使用TP-光激化學(xué)發(fā)光以提高診斷梅毒的準(zhǔn)確率。

關(guān)鍵詞：梅毒;梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn);TP-光激化學(xué)發(fā)光;甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：R446.1? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.23.052

文章編號(hào)：1006-1959（2019）23-0164-03

Clinical Application Evaluation of TP-photoexcited Chemiluminescence，TPPA and TRUST Test

TAO Chun-fei

（Department of Clinical Laboratory，the Third People's Hospital of Chengdu，Chengdu 610031，Sichuan，China）

Abstract：Objective? To evaluate the clinical application of TP-photochemiluminescence， treponema pallidum gelatin aggregation test （TPPA） and toluidine red non-heated serum test （TRUST）， and provide a basis for clinicians to choose the detection method of Treponema pallidum under different conditions. Methods? From April 1st to July 31st， 2019， 11619 inpatients， 2458 outpatients and 2983 physical examination patients in our hospital underwent TP-photochemiluminescence and TRUST test， and TP-photochemiluminescence detection was positive or TRUST Detecting positive samples by TPPA method， comparing TP-photoexcited chemiluminescence and TRUST detection results， TP-photoexcited chemiluminescence， TRUST detection and TPPA detection results and detection of syphilis antibody diagnostic value， TP-photochemical chemiluminescence ， TRUST test the diagnostic value of Treponema pallidum antibody and TP-photochemiluminescence S/CO value and TPPA results.Results The positive rate of TP-photochemiluminescence detection was 6.18%， the hospitalization positive rate was 3.46%， the positive rate of physical examination was 0.67%; the positive rate of TRUST test was 3.42%， the hospitalization positive rate was 1.11%， and the positive rate of physical examination was 0.27%. 557 cases of TP-photoexcited chemiluminescence and 222 positive samples were tested by TPPA. The positive rate of TPPA was 79.73%， the positive rate of TP-photochemiluminescence was 98.30%， and the positive rate of TRUST was 37.82%. The results of the three methods were compared，the difference was statistically significant （P<0.05）. The sensitivity of the TRUST test for Treponema pallidum was lower than that of TP-photochemiluminescence，the difference was statistically significant （P<0.05）. Based on the TPPA results， the S/CO value of the TP-photoexcited chemiluminescence results was analyzed by segmentation. The results showed that the higher the S/CO value， the higher the positive coincidence rate with TPPA.Conclusion? TP-photosensitive chemiluminescence sensitivity is high， suitable for syphilis infection screening and auxiliary diagnosis; TPPA method is suitable for syphilis infection confirmation， can effectively eliminate TP-photoexcited chemiluminescence and TRUST false positive problem; TRUST detection sensitivity low， the screening results of Treponema pallidum are less accurate than TP-photochemiluminescence and TPPA detection， not suitable for screening for syphilis infection， and can be combined with TP-photochemiluminescence to improve the accuracy of diagnosis of syphilis.

Key words：Syphilis;Syphilis spirogel gel particle agglutination test;TP-photoexcited chemiluminescence;Toluidine red unheated serum test

梅毒（syphilis）是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。由于梅毒螺旋體無(wú)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，且針對(duì)其病原體的檢測(cè)較為困難（兔接種試驗(yàn)要求時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，而暗視野顯微鏡檢測(cè)螺旋體方式需在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行）[1，2]。但由于多數(shù)梅毒感染者為無(wú)癥狀或皮損癥狀為一過(guò)性，因此梅毒的血清學(xué)檢測(cè)應(yīng)用更加迫切。我院梅毒血清學(xué)檢測(cè)流程，特異性梅毒螺旋體血清試驗(yàn)選用TP-光激化學(xué)發(fā)光，血清非特異性梅毒螺旋體血清試驗(yàn)選用甲苯胺紅不加熱血清試（TRUST）。所有標(biāo)本選用TP-光激化學(xué)發(fā)光和TRUST進(jìn)行初篩，對(duì)于TP-光激化學(xué)發(fā)光和TRUST陽(yáng)性的標(biāo)本加做TPPA試驗(yàn)。TPPA是目前公認(rèn)的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”[3]，常用于新方法、新試劑的參照標(biāo)準(zhǔn)。本研究通過(guò)對(duì)不同試驗(yàn)方法的敏感度、特異度及準(zhǔn)確度進(jìn)行分析，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值，為臨床醫(yī)生在不同情況下合理選擇梅毒螺旋體抗體檢測(cè)方法及結(jié)果的判讀提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料? 收集2019年4月1日～7月31日成都市第三人民醫(yī)院共17132例患者，其中住院患者11691例、門(mén)診患者2458例、健康體檢者2983例;男性8863例，女性8269例。均行梅毒螺旋體抗體相關(guān)檢測(cè)。

1.2試劑? TP-光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒購(gòu)自博陽(yáng)生物科技（上海）有限公司;TRUST試劑盒購(gòu)自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司;TPPA試劑盒購(gòu)自富士瑞必歐株式會(huì)社。所有試劑均在有效期內(nèi)嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件操作。

1.3檢測(cè)方法? 所有患者均進(jìn)行TP-光激化學(xué)發(fā)光和TRUST檢測(cè)，對(duì)TP-光激化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)陽(yáng)性和TRUST檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本同時(shí)再進(jìn)行TPPA法檢測(cè)。

1.3.1 TP-光激化學(xué)發(fā)光? 基礎(chǔ)原理是一種均相免疫反應(yīng)，主要由TP15-1抗原、TP17-1抗原、TP47-1抗原包被的發(fā)光微粒、生物素標(biāo)記TP15-2抗原、TP17-2抗原、TP47-2抗原組成。TP-光激化學(xué)發(fā)光法試劑試用前平衡至環(huán)境溫度，在反應(yīng)孔中分別加入25 μl樣本及陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照及參考樣品。接下來(lái)在反應(yīng)孔中依次加入25 μl試劑1和25 μl試劑2。把反應(yīng)孔放入儀器，由儀器自動(dòng)操作。最后經(jīng)軟件計(jì)算出S/CO值，并判斷陰陽(yáng)性。

1.3.2 TRUST檢測(cè)? 在23～29℃條件下進(jìn)行，紙卡圈中加入50 μl血清，用生理鹽水將血清進(jìn)行2、4、8倍的稀釋，用專用滴管及針頭垂直分別加TRUST試劑1滴于上述血清中，按1000 r/min轉(zhuǎn)8 min進(jìn)行測(cè)定，反應(yīng)完成后立即用肉眼進(jìn)行結(jié)果觀察，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)說(shuō)明書(shū)來(lái)界定，以確定陽(yáng)性樣本的最高稀釋倍數(shù)。

1.3.3 TPPA法? 采用的抗原是超聲裂解梅毒螺旋體，用樣品稀釋液將血清進(jìn)行5、10、20、40倍的稀釋，依次向20倍孔和40倍孔滴加未致敏明膠粒子和致敏明膠粒子各25 μl，將反應(yīng)板置于濕盒中2 h后觀察反應(yīng)結(jié)果。如果致敏粒子形成不規(guī)則的雜亂聚集則為陽(yáng)性，相反致敏粒子形成圓形且光滑的聚集則為陰性。

1.4評(píng)價(jià)方法? 比較TP-光激化學(xué)發(fā)光及TRUST檢測(cè)結(jié)果、三種方法檢測(cè)結(jié)果及檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的診斷價(jià)值，TP-光激化學(xué)發(fā)光、TRUST檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的診斷價(jià)值及TP-光激化學(xué)發(fā)光法S/CO值與TPPA結(jié)果。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理? 采用Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用？字2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 TP-光激化學(xué)發(fā)光與TRUST檢測(cè)結(jié)果? 共17132例患者，TP-光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)門(mén)診陽(yáng)性率為6.18%，住院陽(yáng)性率為3.46%，體檢陽(yáng)性率為0.67%;TRUST檢測(cè)門(mén)診陽(yáng)性率為3.42%，住院陽(yáng)性率為1.11%，體檢陽(yáng)性率0.27%，見(jiàn)表1。

2.2 TP-光激化學(xué)發(fā)光、TRUST檢測(cè)及TPPA法檢測(cè)結(jié)果比較? 共557例TP-光激化學(xué)發(fā)光陽(yáng)性和222例TRUST檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行TPPA法檢測(cè)，TPPA法陽(yáng)性率為79.73%，TP-光激化學(xué)發(fā)光陽(yáng)性率為98.30%，TRUST陽(yáng)性率為37.82%，三種方法檢測(cè)結(jié)果兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3 TP-光激化學(xué)發(fā)光法的S/CO值與TPPA結(jié)果比較? 以TPPA結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)對(duì)TP-光激化學(xué)發(fā)光結(jié)果的S/CO值分段分析，結(jié)果顯示TP-光激化學(xué)發(fā)光法的S/CO值越高，與TPPA的陽(yáng)性符合率越高，見(jiàn)表3。

2.4 TP-光激化學(xué)發(fā)光、TRUST檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的診斷價(jià)值比較? TRUST檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的敏感度低于TP-光激化學(xué)發(fā)光，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表4。

3討論

梅毒的傳播途徑主要是性傳播、母嬰傳播等。此病可使孕婦流產(chǎn)，或致胎兒死亡，嚴(yán)重威脅人們的生命健康[4]。由于梅毒螺旋體無(wú)法在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，因此針對(duì)病原體的檢測(cè)較為困難。雖然免疫熒光抗體定量檢測(cè)結(jié)果較可靠，但由于其對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件與人員技術(shù)水平的要求較高且所用試劑比較昂貴，并不適合梅毒的初篩，并且有類風(fēng)濕因子等因素的干擾，其特異度并不高。因此尋找檢測(cè)快速，準(zhǔn)確度高的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)意義重大。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，住院患者TP-光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)陽(yáng)性率為3.46%，TRUST檢測(cè)陽(yáng)性率為1.11%;門(mén)診患者TP-光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)陽(yáng)性率為6.18%，TRUST檢測(cè)陽(yáng)性率為3.42%;健康體檢者TP-光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)陽(yáng)性率為0.67%，TRUST檢測(cè)陽(yáng)性率為0.27%。分析原因：門(mén)診患者是有癥狀及有目的的針對(duì)性檢測(cè)，因此陽(yáng)性率較另外兩種方法高;住院患者為手術(shù)前或輸血前篩查，陽(yáng)性率低于門(mén)診患者;健康體檢者是正常人群，陽(yáng)性率最低。另外，本研究通過(guò)對(duì)587例TP-光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)陽(yáng)性和222例TRUST檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行TPPA試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果顯示TPPA試驗(yàn)陽(yáng)性率為79.73%，說(shuō)明TPPA試驗(yàn)?zāi)苡行懦齌P-光激化學(xué)發(fā)光試驗(yàn)和TRUST的假陽(yáng)性情況。但是，患者在感染梅毒后，特異性抗體幾乎呈終身陽(yáng)性狀態(tài)[5，6]，即使經(jīng)過(guò)規(guī)范治療也很少轉(zhuǎn)陰，是梅毒感染的記憶性抗體標(biāo)志[7]，且TPPA試驗(yàn)操作復(fù)雜需人工判讀結(jié)果，不適合大樣本量檢測(cè)，其應(yīng)用受到一定限制。TRUST試驗(yàn)陽(yáng)性率較低，僅37.82%，TP-光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)陽(yáng)性率為98.30%。由此可見(jiàn)，與TRUST相比較，TP-光激化學(xué)發(fā)光具有明顯的優(yōu)勢(shì)。TRUST法是檢測(cè)非特異性類脂抗體的重要方法[8]，肉眼可判讀檢測(cè)結(jié)果，但一些疾病和生理因素易出現(xiàn)梅毒血清學(xué)試驗(yàn)生物學(xué)假陽(yáng)性，如細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、軟下疳、病毒性肝炎、傳單增多癥、惡性腫瘤、SLE類多發(fā)性骨髓瘤、年老、妊娠、毒品等。本研究結(jié)果顯示，TP-光激化學(xué)發(fā)光法的靈敏度為100.00%，特異度位99.35%，適用于梅毒的感染篩查及輔助診斷;TP-光激化學(xué)發(fā)光是一種均相免疫反應(yīng)，檢測(cè)時(shí)間短，適用于透析、急診患者的梅毒快速檢測(cè)。TRUST的靈敏度為44.44%，低于TP-光激化學(xué)發(fā)光，說(shuō)明TRUST篩查會(huì)漏檢很多梅毒抗體血清陽(yáng)性的早期梅毒患者。本研究以TPPA為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)577例TP-光激化學(xué)發(fā)光結(jié)果的S/CO值分段分析，結(jié)果顯示在低值段區(qū)間，陽(yáng)性符合率較低，隨著S/CO值的升高，陽(yáng)性符合率越高?？赡茉摲`敏度較高，在低值段區(qū)間易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，間接證明TPPA確證試驗(yàn)?zāi)苡行懦齌P-光激化學(xué)發(fā)光試驗(yàn)的假陽(yáng)性結(jié)果。

盡管實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)梅毒螺旋體感染的方法很多，但其各有優(yōu)缺點(diǎn)：TP-光激化學(xué)發(fā)光靈敏度高，適用于梅毒感染的篩查及輔助診斷;TP-光激化學(xué)發(fā)光檢測(cè)時(shí)間短，適用于透析、急診患者的梅毒快速檢測(cè);TRUST檢測(cè)靈敏度較低，不適合用于梅毒感染的篩查，但可用于監(jiān)測(cè)梅毒的復(fù)發(fā)與再感染，可聯(lián)合TP-光激化學(xué)發(fā)光提高診斷的準(zhǔn)確率。在實(shí)際工作中，對(duì)于TP-光激化學(xué)發(fā)光和TRUST陽(yáng)性的標(biāo)本要用TPPA法檢測(cè)進(jìn)行確證，臨床醫(yī)師需根據(jù)具體情況作出判斷，正確解讀結(jié)果，有效提高檢出率。

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收稿日期：2019-8-29;修回日期：2019-9-16

編輯/錢(qián)洪飛