鼠類實驗研究針刺參數(shù)優(yōu)化*

魯 海，胡佳慧，韓李莎，張春紅，陳付艷△

(1.天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院,天津 300193；2.天津中醫(yī)藥大學,天津 301617；3.國家中醫(yī)針灸臨床醫(yī)學研究中心,天津 300193)

目前，針刺療法在國內(nèi)外被廣泛運用于疾病的防治，無論是在臨床實踐還是動物實驗均顯示其具有可靠的療效，對于針刺作用機制的探索也成為研究的熱點[1]。通過制造不同疾病的模型鼠，嘗試對“針刺如何起效”等問題從機制上探討。縱觀針刺過程，從針刺形式，到選穴配穴，再到針刺效應的產(chǎn)生，均需要經(jīng)過合理的辨證選擇。根據(jù)不同的研究目的和疾病對象，針刺參數(shù)選擇可存在特異性，但總體應用原則也應有一定的規(guī)律可循。本研究以施針主客體為切入點，抓兩頭看中間，分析近年來針刺鼠類實驗在針刺形式、選穴配伍及得氣效應方面的研究進展。

1 施針主體的選擇

針刺是一種由操作者主導的醫(yī)療行為，而針刺作為直接的操作工具，目前使用比較普遍的為手針和電針。而在實際針刺鼠類實驗中，由于電針可代替人做較長時間的持續(xù)運針，節(jié)約了大量人力勞動，且可重復性好，故絕大部分都采用電針干預。兩種不同性質(zhì)的刺激產(chǎn)生的理論背景、刺激方式不同，其臨床效應甚至產(chǎn)生效應的途徑與機制應各有差異[2]。

郭穎等[3]比較夾脊電針與手針對ALS-SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠腰髓前角運動神經(jīng)元形態(tài)學的影響。結(jié)果顯示，小鼠腰髓前角運動神經(jīng)元數(shù)目增多，神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)形態(tài)有所改善，空泡化減少，夾脊電針改善效果優(yōu)于手針治療(P<0.05)。黃曉真等[1]研究發(fā)現(xiàn)，與電針比較手針FMR1基因敲除小鼠長強穴可增加皮質(zhì)區(qū)BDNFmRNA、CREBmRNA表達量，縮短逃避潛伏期，延長原平臺象限時間/逃避潛伏期(均P<0.05)。手針改善小鼠的學習記憶能力及異常行為活動，效果優(yōu)于電針。曹徵良等[4]比較手針和電針刺激對圍絕經(jīng)期綜合征的療效差異及性激素水平的影響。兩組治療期及隨訪期平均24 h烘熱積分、MRS、MENQOL評分及血清性激素水平均無明顯差異，兩者調(diào)節(jié)作用相當。

目前電針在一定程度上減少了手針的個體化差異，被廣泛用于動物試驗中，但兩者在實驗中的療效并未有明顯差異。對于傳統(tǒng)針刺干預機制的探討，應立足于經(jīng)絡、腧穴、針刺手法等整套針刺療法展開研究，最大程度的模擬臨床實際方可，而只注重簡便化的施針操作、忽略針刺手法似乎是不合理的。

2 施針對象的選取

2.1 選穴

經(jīng)穴是臟腑經(jīng)絡氣血輸注于體表經(jīng)絡線上的特殊部位，是疾病的反應點和針刺的刺激點。每個經(jīng)穴由于其所處位置不同、所屬經(jīng)脈不同、所屬臟腑不同而具有不同刺激效應，不同經(jīng)穴也可能具有相同或相似的效應，稱之為經(jīng)穴“特異性”[5]。經(jīng)穴特異性是決定腧穴配伍效應差異的重要因素，而經(jīng)穴的選擇既有異經(jīng)相配，又有同經(jīng)相伍。

2.1.1 經(jīng)穴特異性 牟蛟等[6]研究針刺“水溝”穴抑制MCAO大鼠海馬區(qū)神經(jīng)細胞壞死的特異性效應。結(jié)果顯示，穴位組總體效應趨勢優(yōu)于非穴位組，穴位針刺更能有效抑制 MACO大鼠神經(jīng)細胞壞死，縮小腦缺血后梗死面積，具有穴位特異性優(yōu)勢。張華軍等[7]研究發(fā)現(xiàn)電針百會和足三里可以改善PSD小鼠的行為學異常，而非穴組無抗抑郁作用，從而否認了針刺百會和足三里的安慰劑作用。嚴明娜等[8]研究發(fā)現(xiàn)，較非穴，高頻電針內(nèi)關(guān)穴心肌缺血情況有所改善，且內(nèi)關(guān)穴區(qū)皮膚血流灌注量變化顯著。反應了經(jīng)穴的特異性與臟腑-經(jīng)穴特異性，提示心肌處于不同狀態(tài)時，內(nèi)關(guān)穴有一定的特異性反應價值。

2.1.2 異經(jīng)選穴 蔡榮林等[9]比較電針心經(jīng)穴對心肌缺血大鼠下丘腦室旁核神經(jīng)元電活動的影響。分析顯示電針心經(jīng)組，大鼠下丘腦室旁核神經(jīng)元總放電頻率及局部場電位頻譜能量均顯著低于肺經(jīng)組(均P<0.01)。針刺心經(jīng)穴可顯著降低下丘腦室旁核中間神經(jīng)元活動，激活投射到下丘腦室旁核的錐體神經(jīng)元活動，抗心肌缺血效應強于肺經(jīng)穴。羅麗等[10]比較針刺三陰交與關(guān)元穴對寒凝證類痛經(jīng)大鼠左右三陰交穴區(qū)溫度失衡的影響，結(jié)果顯示，三陰交穴在針刺5 min時、針刺后50～60 min作用顯著，而關(guān)元穴僅在針刺后40～60 min作用顯著。故針刺本經(jīng)三陰交穴即時效應更明顯。魏歆然等[11]研究發(fā)現(xiàn)針刺本經(jīng)穴(百會+神門)，升高失眠大鼠下丘腦、視交叉上核及血漿中的MT含量優(yōu)于他經(jīng)穴(百會+三陰交)組(均P<0.05)。固定百會穴配伍本經(jīng)穴(神門)針刺可有效改善大鼠失眠狀況，從而提高腧穴配伍效應。

2.1.3 同經(jīng)選穴 張學君等[12]比較電針督脈不同穴對自閉癥模型大鼠學習記憶能力及海馬CA1區(qū)PSD-95蛋白表達的影響，結(jié)果顯示，電針百會與長強比較，逃避潛伏期、原平臺象限游泳路程/總路程和PSD-95蛋白表達均無明顯差異。單獨電針長強穴或百會穴均可改善自閉癥模型大鼠的學習和記憶能力，兩者療效相當。張文奎等[13]研究發(fā)現(xiàn)針刺脾經(jīng)血海穴降低Ⅱ型糖尿病小鼠總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇水平，升高高密度脂蛋白膽固醇水平，均優(yōu)于三陰交穴和公孫穴(均P<0.05)。故同經(jīng)選穴則針刺脾經(jīng)血海穴改善血脂作用最強。

直接針刺經(jīng)穴，對于經(jīng)穴的選取與腧穴的配伍治療不同的疾病應有不同的要求。選穴則是影響腧穴配伍效應的關(guān)鍵因素[14]。由于腧穴的協(xié)同與拮抗效應，實驗中多選取個數(shù)較少的直接有效的經(jīng)穴進行驗證，故總體效應而言，本經(jīng)選穴優(yōu)于異經(jīng)選穴。此處的“本經(jīng)”應包含三層含義，一為病變臟腑所屬的經(jīng)絡；二為病變部位所在的經(jīng)絡；三為疾病病位所屬的經(jīng)絡。同時根據(jù)“經(jīng)穴-臟腑相關(guān)”理論，循經(jīng)取穴效果更佳。針對于同經(jīng)腧穴比較，應根據(jù)所選腧穴的穴性去定奪，治療疾病與腧穴主治病候越相近，效果越好。正如《針灸大成》所言：“能識本經(jīng)之病，又要認交經(jīng)正經(jīng)之理，則針之功必速矣?！?/p>

2.2 腧穴配伍

腧穴配伍是基于針灸選穴原則，結(jié)合臨床和腧穴主治特性，選擇兩個以上作用相近的腧穴進行配伍，發(fā)揮協(xié)同增效作用，提高療效的方法[15]。從腧穴配伍的概念出發(fā)，提出選穴是影響腧穴配伍的關(guān)鍵因素，其中按部選穴與循經(jīng)選穴是腧穴配伍的基本方法，辨證選穴與對癥選穴是腧穴配伍的基本要求[14]。因此腧穴作為針刺操作的客體——直接干預對象，不同腧穴的作用特異，不同的腧穴配伍效應也有差異。常見的腧穴配伍方法可分為分經(jīng)配伍、分部配伍及特定穴配伍[15]。

2.2.1 分經(jīng)辨證配穴 翟恒等[16]比較針刺不同穴組對慢性疲勞綜合征小鼠行為及抗氧化能力的影響，結(jié)果顯示，針刺各組腧穴均能對CFS小鼠起到明顯的治療作用，其中合谷+太沖+足三里穴組減少血清MDA含量、升高SOD及GSH-PX活性優(yōu)于合谷+太沖組、合谷+太沖+三陰交組(均P<0.05)，其配伍作用更符合CFS的基本病機。張麗等[17]研究顯示，電針雙內(nèi)關(guān)穴+雙足三里穴+關(guān)元穴升高心肌缺血損傷大鼠心肌SOD、GSH-PX活性、降低MDA含量優(yōu)于雙內(nèi)關(guān)+雙神門+膻中(均P<0.05)。腧穴配伍針刺法具有很好的保護心肌缺血的效果，能夠有效減輕心肌細胞變性及心肌組織的損害。其配伍作用更符合心肌缺血損傷的基本病機(補虛寫實)。

2.2.2 分部配穴 顏培宇等[18]比較分部配穴針刺對免疫抑制大鼠T細胞極化及相關(guān)因子的影響，結(jié)果顯示，頭穴加體穴組可提高免疫抑制大鼠外周血CD4+TC含量及IFN-r水平、降低IL-4水平，優(yōu)于單獨體針組、頭針組(均P<0. 05)。頭針加體針的配穴方式可顯著提高免疫抑制大鼠血中CD4+T淋巴細胞的含量，促使TH細胞向Th1型轉(zhuǎn)化，增強機體細胞免疫的功能，療效優(yōu)于單部位針刺。羅本華等[19]研究發(fā)現(xiàn)不同分部配穴(腹穴、腹背穴及腹背穴)法針刺均能顯著降低SAMP8小鼠老化度評分，也均可顯著改善認知功能損害。其中，隱蔽平臺試驗，針刺背俞穴組起效早但療效不穩(wěn)定，而針刺腹背穴療效穩(wěn)定；反向試驗，針刺腹穴組顯示更快和更穩(wěn)定的作用。3種配穴法均能抵抗SAMP8快速老化進程，改善認知功能障礙，但改善特點不同。

2.2.3 特定穴配穴 李心沁等[20]觀察針刺八會穴(陽陵泉、懸鐘)對大鼠骨折愈合及骨痂形成影響。針刺2周后，特定穴組與普通經(jīng)穴組纖維性骨痂減少，骨性骨痂以及軟骨增多；4周后兩組骨性骨痂所占比例相近，但特定穴組骨性骨痂更成熟。故針刺特定穴更有利于骨折愈合及骨痂形成。在與陽性藥物的對照實驗中，針刺特定穴配伍穴方(合募配穴)治療慢性酒精肝損傷大鼠[21]及腸易激綜合征大鼠[22]也顯示出一定的優(yōu)勢。

將所選腧穴有機結(jié)合起來，相須或相使而用，則是選穴配伍完整的辨證思維過程[14]。辨證配穴、按部配穴及特定穴配穴3種配穴法，各有所長，其目的均為選取主治功效相同或相近的“同功穴”，使腧穴配伍產(chǎn)生協(xié)同增效作用[23]。在中醫(yī)整體觀念、辨證論治原則下，應將辨證配穴始終貫穿于針灸實踐中。鼠類體型小、選穴少，腧穴間的相互作用可能與腧穴的針刺信號傳導途徑有關(guān)[7]。在少而精的基礎上如何針刺信號傳導途徑相同的腧穴達到了該途徑的極限值，是腧穴配伍基礎研究的重要內(nèi)容。

3 施針效應體現(xiàn)——得氣

得氣或氣至與否是衡量針刺效應的最為準確標準?！鹅`樞·九針十二原》曰：“刺之要，氣至而有效”。

齊丹丹等[24]比較不同得氣狀態(tài)下針刺對寒凝證類痛經(jīng)模型大鼠中樞阿片受體影響的研究。結(jié)果顯示，期望“得氣”組寒凝證類痛經(jīng)模型大鼠中腦κ受體、μ受體mRNA的表達，脊髓內(nèi)κ受體、μ受體mRNA的表達均較期望“不得氣”組增強(均P<0.05)，故整體鎮(zhèn)痛效應強于期望“不得氣”組。同類研究[25-26]發(fā)現(xiàn)針刺三陰交穴得氣組較未得氣組能明顯延長痛經(jīng)模型大鼠子宮扭體潛伏期、減少扭體次數(shù)、降低扭體評分(均P<0.01)，緩解子宮收縮；擴張子宮微血管、毛細血管(P<0.05)，改善子宮微循環(huán)障礙；顯著降低子宮PGF2αmRNA表達水平(P<0.01)，調(diào)節(jié)子宮內(nèi)分泌。

得氣作為施針效應的指征，考評干預措施有效性的重要指標，包括“針感”和“針下得氣感”。于針刺鼠類實驗中，雙方面得氣體驗均不明顯，而在針刺效應體現(xiàn)上，是否得氣確實存在差異[24-26]。實際上，得氣是一個包含從選用適合的針刺形式、腧穴、腧穴配伍及手法而達到氣調(diào)而止的寬泛概念?？v觀整個針刺過程，得氣應理解為在達到治療目的過程中的方式方法，涵蓋了針感的部分范疇[27]。需要注意的是，目前對得氣研究中，主要集中于易感知的顯性針感，多忽視不易被感知的隱性針感，動物實驗中或為隱性針感者多[28]。

4 小結(jié)

在針刺鼠類實驗中，電針和手針是兩種不同性質(zhì)的刺激，不同的針刺方式，其針刺信號不同，其傳入途徑、產(chǎn)生的效應及機制、作用的靶點等均可能存在差異。而且不同的疾病，甚至相同的疾病在不同的時期，對不同的針刺刺激方式的反應、傳入途徑、產(chǎn)生的效應及機制都可能不同，而目前的實驗中為保持操作的一致性多采用電針干預。傳統(tǒng)針灸以徒手操作配合針刺手法發(fā)揮針刺效應，動物實驗應與臨床保持一致，以更好的闡釋作用機制。

經(jīng)穴是針刺作用的基石，施針于經(jīng)穴可起到相應的“經(jīng)穴-經(jīng)絡-機體”調(diào)節(jié)作用。針刺驗證選穴應善識“本經(jīng)”效穴，善用同經(jīng)“同穴”；經(jīng)穴配穴是針灸臨床實踐的精華，依據(jù)病因病機的辨證配穴，做到了理法方穴的一致，局部配穴可發(fā)揮良好的近治作用，特定穴配伍又可凸顯特效腧穴的特殊性能和作用。合理使用腧穴配伍方法，抓住主證、辨明病機、明了穴性、配伍精當，發(fā)揮協(xié)同作用，則可提高臨床療效，尤應重視特定穴的配伍使用，常可起到事半功倍的效果。針刺對于經(jīng)穴的有效刺激，可用“得氣”來衡量，但在鼠類實驗中，隱性得氣的識別是關(guān)鍵，如何表征動物的得氣效應值得深入探討。

在現(xiàn)代科技不斷發(fā)展的今天，基于傳統(tǒng)中醫(yī)理論，將fMRI、SPECT、PET等可視化技術(shù)運用于針刺形式、穴位效應、配穴效應及得氣效應的研究對深入客觀化認識針刺效應及機制、優(yōu)化參數(shù)具有重要意義。