技術(shù)進步條件下豬圓環(huán)病毒病的研究進展

周文茂 陳海軍 高軍攀

（1河北省石家莊市畜牧獸醫(yī)技術(shù)開發(fā)中心，河北石家莊 050000；2河北省石家莊市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北石家莊050000；3河北省石家莊市獸用制品供應(yīng)站，河北石家莊050000）

豬圓環(huán)病毒病是由圓環(huán)病毒2型（PCV2）引起的一種豬免疫抑制性疾病，可以引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、母豬繁殖障礙性疾病、仔豬先天性震顫（CT）等一系列多種不同臨床癥狀的疾病[1]。PCV2一旦在豬群中流行傳播，將很難清除，感染的豬群可能表現(xiàn)為亞臨床癥狀，但其引起的免疫抑制使豬群易遭受其他病原的并發(fā)或繼發(fā)感染[2]，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。因此，對PCV2的準(zhǔn)確診斷和有效防控是當(dāng)前亟待解決的問題。

1 流行病學(xué)

豬圓環(huán)病毒（porcine circovirus,PCV）屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是感染脊椎動物最小的一種病毒[2]。豬圓環(huán)病毒有PCV1、PCV2和PCV3 3個血清型，其中PCV1無致病性，PCV3由2016年P(guān)han等[3]在美國從有相似臨床癥狀的育肥豬中檢出，其致病性尚未明確；由PCV2引起的一系列相關(guān)綜合征稱為豬圓環(huán)病毒病。2000年，郎洪武等[4]首次報道我國存在PCV2，如今PCV2已呈世界性流行，在我國豬群中也普遍存在。

豬是PCV2的易感動物，患病豬和隱性帶毒豬是豬圓環(huán)病毒病的主要傳染源，感染豬的鼻液、唾液、淚液、糞便、尿液中都含有病毒，會污染周圍的環(huán)境，通過呼吸道或者消化道感染健康豬群。妊娠母豬感染后，病毒可以通過胎盤感染胎豬，導(dǎo)致妊娠后期出現(xiàn)死胎、僵尸胎等流產(chǎn)現(xiàn)象。感染公豬的精液中也會帶毒，可以通過輸精的方式感染母豬[5]。

豬圓環(huán)病毒病一年四季均可發(fā)生，沒有明顯的季節(jié)性特征，不論大小、公母，不同品種的豬均可以感染PCV2，但1～4月齡仔豬較多發(fā)，尤其是斷奶后1～2周的仔豬，逐漸失去了母源抗體的保護，但自身的免疫系統(tǒng)發(fā)育還不夠完善而發(fā)病，因此推斷該病的發(fā)生與斷奶應(yīng)激有很大的關(guān)系。

2 臨床癥狀及病理變化

2.1 致病機理

PCV2的致病機理一直是學(xué)界、業(yè)界關(guān)注的熱點。研究發(fā)現(xiàn)PCV2侵襲的是單核吞噬細胞系統(tǒng)，而不存在于淋巴細胞中，但會導(dǎo)致豬的淋巴組織、肺臟、肝臟等器官出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，破壞豬的免疫系統(tǒng)，造成免疫功能紊亂，使機體易感染其他病原[6]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，PCV2單一病原感染發(fā)病少見，或者是因為單一感染時沒有出現(xiàn)典型的臨床癥狀而被忽視，常見的是與其他多種病原混合感染，如與PRRSV、CSFV、PPV、PRV等。

2.2 臨床癥狀

豬圓環(huán)病毒病是一系列臨床綜合征的總稱，每種綜合征之間所表現(xiàn)的臨床癥狀和病理變化存在一定的差異，一般表現(xiàn)為以下幾種類型。

2.2.1 斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）

主要危害斷奶后仔豬，表現(xiàn)為呼吸困難、被毛粗亂、逐漸消瘦、生長發(fā)育受阻、腹股溝淋巴結(jié)腫大、腹瀉、精神不振，部分豬還出現(xiàn)貧血癥狀，皮膚蒼白。剖檢可見患病豬全身淋巴結(jié)腫大，肺腫脹、間質(zhì)增寬、質(zhì)地堅硬如橡皮樣、呈間質(zhì)性肺炎，肺表面分布大小不等的紅色至褐色的斑點。脾臟與肝臟腫大。腎臟腫大，有時可見白色散在斑點。

2.2.2 豬皮炎腎病綜合征（PDNS）

主要發(fā)生于8～18周齡豬和育肥豬，多呈散發(fā)。臨床上表現(xiàn)為患病豬皮膚突然出現(xiàn)圓形或不規(guī)則形狀、呈紅色或紫紅色病變，病變部位中央呈黑色，隨著病情加重，病變區(qū)融合成較大的黑色壞死斑塊，結(jié)痂脫落后留下明顯疤痕。皮膚病變常見于病豬的后肢、腹部、會陰部，也可擴散至體側(cè)及耳部。感染嚴(yán)重時會表現(xiàn)出四肢跛行、發(fā)熱、厭食、皮下水腫、逐漸消瘦。剖檢可見腎臟腫脹、蒼白，皮質(zhì)部有大面積出血或瘀血點，淋巴結(jié)腫大、出血。

2.2.3 母豬繁殖障礙性疾病

妊娠母豬感染PCV2后可出現(xiàn)繁殖障礙，主要表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎和弱仔等。懷孕母豬在妊娠早期感染PCV2可以導(dǎo)致胚胎死亡，妊娠中后期感染則導(dǎo)致母豬產(chǎn)死胎、木乃伊胎，剖檢死胎可見非化膿性心肌炎[2]。一般初產(chǎn)母豬感染PCV2后流產(chǎn)率較高，經(jīng)產(chǎn)母豬流產(chǎn)率較少，但產(chǎn)死胎和弱仔數(shù)量增加。公豬感染PCV2后精子數(shù)量減少、活力下降、配種率降低，導(dǎo)致繁殖障礙。

2.2.4 仔豬先天性震顫（CT）

初生仔豬感染PCV2可引起頭部、四肢和尾巴連續(xù)或間歇性震顫，嚴(yán)重者可見全身肌肉抖動，震顫為雙側(cè)性，外界刺激可引發(fā)或加重震顫，當(dāng)病豬趴臥或睡覺時震顫可暫時性消失。病情嚴(yán)重時，震顫對骨骼和肌肉的影響使仔豬行走困難、無法正常吮奶，最終饑餓致死，若及時采取人工喂奶措施，有的仔豬1周后可逐漸恢復(fù)健康并存活。

3 實驗室檢測

由于豬圓環(huán)病毒病常并發(fā)或繼發(fā)多種病原感染，單純從臨床癥狀診斷難度較大，因此借助于實驗室檢測方法，可以準(zhǔn)確、快速診斷PCV2感染。常用的實驗室檢測方法有病原學(xué)檢測和血清學(xué)檢測2大類。

3.1 病原學(xué)方法

3.1.1 病毒分離培養(yǎng)

取感染PCV2豬病變組織處理后，接種原代腎細胞或PK-15細胞培養(yǎng)，由于PCV2病毒不會引起細胞病變，不能直接判斷病毒分離情況，需要借助于間接免疫熒光試驗（IFA）、PCR或電子顯微鏡等方法進行確認。病毒分離培養(yǎng)費時費力，操作繁瑣，不適用于豬圓環(huán)病毒病的快速診斷。

3.1.2 間接免疫熒光試驗

取病變組織以蓋玻片在PK-15細胞中培養(yǎng)，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清與細胞培養(yǎng)物中的PCV反應(yīng)，可對PCV進行檢測和分型[7]。IFA用時少、操作簡便，應(yīng)用非常廣泛，主要用于病毒分離效果的鑒定及病變組織PCV感染的檢測。

3.1.3 核酸原位雜交技術(shù)（ISH）

ISH敏感性高，可以精確地定位PCV病毒在組織細胞內(nèi)的位置，有助于深入研究PCV的致病機理。Choi等[8]用地高辛標(biāo)記的探針做原位雜交可檢測PCV。Nawagitgul等[9]根據(jù)PCV的基因序列，設(shè)計了一組探針可以區(qū)分PCV1和PCV2。Sirinarumitr等[10]利用熒光標(biāo)記RNA探針，與細胞中病毒核酸，福爾馬林固定或石蠟包埋的組織中的PCV病毒核酸進行雜交，建立了快速檢測PCV的原位雜交技術(shù)。該方法應(yīng)用快速加強雜交緩沖液（rate enhancement hybridization,REH），大大縮短了檢測時間，提高了PCV2的診斷效率。接著Siri-narumitr等[11]又建立了雙雜交方法，可同時檢測2種病毒的感染。

3.1.4 PCR方法

PCR方法具有快速、簡便、特異的優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于各種疫病的檢測。國內(nèi)外已經(jīng)建立多種PCR方法用于PCV檢測，包括常規(guī)PCR、復(fù)合PCR、競爭PCR和巢式PCR等[12]，可以特異性地區(qū)分PCV的不同血清型。當(dāng)前國內(nèi)對于PCV2的流行病學(xué)調(diào)查，最常用的就是PCR方法，已經(jīng)出現(xiàn)豬圓環(huán)病毒PCR檢測試劑盒，但是PCR方法敏感性高，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果，因此需要結(jié)合血清學(xué)方法進行檢測，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

3.1.5 免疫組化（IHC）

IHC與IFA一樣，都屬于免疫染色方法。IHC技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的專一性和顯微形態(tài)學(xué)相結(jié)合，用以研究組織或細胞中抗原定位的一種方法。使用該方法檢測PCV病毒時，可以結(jié)合病毒形態(tài)變化，進行快速、特異的診斷。此外，IHC可以對攜帶病原的細胞及組織的大體形態(tài)進行評價，而且只需要借助于普通顯微鏡在日光下即可進行觀察。與IFA相比，該方法的樣本顏色更穩(wěn)定、更易于保存。

3.2 免疫學(xué)方法

3.2.1 間接免疫熒光試驗

IFA即可用于抗原檢測，也可用于抗體檢測，國外已有檢測PCV的標(biāo)準(zhǔn)化試劑盒。可以通過檢測豬血清中的抗體，確定PCV的感染情況。該方法快速簡單，應(yīng)用廣泛，但是洗滌不干凈，易出現(xiàn)非特異性結(jié)果。此外，該方法不能有效區(qū)分抗體對應(yīng)的PCV血清型。

3.2.2 免疫過氧化物酶單層細胞試驗（IPMA）

該方法可以用于檢測PCV或血清中的PCV抗體，但是不能區(qū)分PCV血清型，應(yīng)用局限，國外多用于研究，國內(nèi)應(yīng)用較少。

3.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA方法因為檢測速度快、敏感性高、特異性強等優(yōu)點被廣泛應(yīng)用于疫病臨床診斷中，也是檢測PCV2抗體的常用檢測方法。國內(nèi)外的科研人員已經(jīng)建立多種ELISA方法，為進行PCV感染的血清學(xué)調(diào)查提供技術(shù)支撐。Walker等[13]首次建立競爭ELISA方法用于檢測PCV2抗體，該方法敏感性高、特異性好，可以用于PCV2抗體的大規(guī)模檢測。2002年，Nawagitgul等[14]建立了2種ELISA方法，分別用于檢測針對PCV全病毒和病毒核衣殼蛋白的抗體，均具有較好的重復(fù)性和敏感性。但是ELISA方法與IFA存在同樣的缺陷，不能特異性區(qū)分PCV的不同血清型對應(yīng)的抗體，且病毒獲得困難時該方法的應(yīng)用受到一定限制。

4 綜合防治

PCV2感染已經(jīng)成為影響?zhàn)B豬業(yè)的重大問題，但是目前仍沒有特效的治療方法，因此對該病的防治仍然是以預(yù)防為主、防治結(jié)合的方法。

4.1 疫苗免疫

疫苗免疫是目前預(yù)防PCV2的重要手段。2010年P(guān)CV2疫苗開始在我國使用，經(jīng)過臨床驗證免疫接種是預(yù)防和控制豬圓環(huán)病毒最快捷、最有效的措施，可以提高生產(chǎn)性能、降低發(fā)病率和死亡率。目前已經(jīng)有多種PCV2疫苗投入市場，主要有全病毒滅活疫苗、亞單位疫苗和嵌合病毒疫苗，其中全病毒滅活疫苗使用較為廣泛。

4.2 加強飼養(yǎng)管理

把好飼料關(guān)，避免霉菌毒素的危害，飼喂優(yōu)質(zhì)全價的飼料，提高豬群的免疫力；適當(dāng)降低飼養(yǎng)密度，保持良好的通風(fēng)和適宜的溫度條件，可以有效降低氨氣等有害氣體的濃度；不同日齡、不同來源的豬避免混群飼養(yǎng)，做到每欄全進全出；根據(jù)季節(jié)和氣候變化，適時做好防寒保暖、防暑降溫工作，盡量減少仔豬斷奶后的應(yīng)激反應(yīng)。

4.3 完善豬場生物安全體系

實行封閉式生產(chǎn)管理，建立合理的豬場準(zhǔn)入制度，對外來的人員、車輛、設(shè)備器具等進行嚴(yán)格消毒；豬場內(nèi)禁止飼養(yǎng)犬、貓和其他畜禽，并防止野禽進入；做好場區(qū)內(nèi)的滅鼠、殺蟲工作；對場內(nèi)糞尿和污水進行無害化處理。

4.4 藥物預(yù)防

目前還沒有治療該病的特效藥物。對于發(fā)病早期的疑似感染豬要及時隔離檢查治療，爭取做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，以控制病原的傳播。斷奶仔豬飼料中添加抗菌藥物提前預(yù)防，以控制細菌繼發(fā)感染；已發(fā)病的豬進行隔離治療，主要以治療繼發(fā)感染為主，及時撲殺失去治療價值的病豬，并作無害化處理。