白術(shù)化學成分的檢測方法及其研究進展

曾星星 ，鹿愛娟 ，高曉慧 ，馬 寧 ，王建芬

（1.長沙醫(yī)學院，湖南長沙 410219；2.新型藥物制劑研發(fā)湖南省重點實驗室培育基地，湖南長沙 410219）

白術(shù)味苦、甘，性溫[1]，對人體的消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、子宮平滑肌等作用顯著，此外，還能夠有效調(diào)節(jié)人體免疫功能，可食用，被許多養(yǎng)生家當作養(yǎng)生佳品[2-3]，民間通常以之代茶飲、泡酒、烹調(diào)佳肴等，是一種良好的功能保健食品原料。

1 化學成分及提取方法

1.1 揮發(fā)油

白術(shù)中的揮發(fā)油成分含量為1.4%～2.4%[4]，且當土壤、產(chǎn)地、收獲期、采收期、炮制工藝等條件發(fā)生變化時也會引起組成與含量的差異，其功能成分包括蒼術(shù)醇、蒼術(shù)酮、蒼術(shù)內(nèi)酯、白術(shù)內(nèi)酯[5]等物質(zhì)，李孟璇等人[6]對不同年限的白術(shù)揮發(fā)油含量進行分析比較后得知，一年生白術(shù)中的揮發(fā)油含量明顯低于2年生白術(shù)，且其揮發(fā)油成分大致相似。

關(guān)于揮發(fā)油的提取方式多種多樣，其中主要的方法有煎煮、滲漉、水蒸氣蒸、超臨界萃取、溶劑萃取、超臨界萃取-分子蒸餾等[7]。臨床研究[8]表明，采用滲漉方式對揮發(fā)油進行提取時得到的成分較為完全；采取傳統(tǒng)水煎方法提取造成的揮發(fā)量較多；采取水蒸氣蒸提取時的效果往往不是十分理想，究其原因可能與揮發(fā)油的組成成分相關(guān)，進行蒸餾時的溫度較高，造成揮發(fā)油的某些成分分解或者聚合等，該提取方法較適用于新鮮樣品的提取；溶劑提取方式的提取效率較高，其萃取率可達到2.019%，而采用常規(guī)水蒸氣蒸法提取的概率僅為0.885%左右；進行超臨界萃取時的萃取回收率與萃取時間息息相關(guān)，萃取時間越長，萃取回收率就越低；將分子蒸餾與超臨界萃取2種提取方法相互聯(lián)合使用，可明顯提高揮發(fā)油的提取效果，且相比分子質(zhì)量較小的成分提取量也明顯提高，與傳統(tǒng)的水蒸氣蒸提取方法相比較，該提取方式具有高效、低溫、無污染等優(yōu)勢。

揮發(fā)油的主要檢測方法包括紫外分光光度法、薄層色譜法、HPLC法、液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等。其中薄層色譜法通常用于石油醚、乙醚、正己烷等有機試劑的提取，陳琴華等人[9]采取正己烷索氏提取法對白術(shù)精油進行提取后再采取薄層掃描法對蒼術(shù)酮含量進行有效測定，得知其含量占據(jù)揮發(fā)油的32.44%，占生藥的0.66%。

1.2 白術(shù)多糖

其組成成分與土壤、產(chǎn)地、收獲期、采收期、炮制工藝等因素息息相關(guān)，臨床上主要采取煎煮法進行提取，而其檢測方法一般采納苯酚-硫酸法與蒽酮-硫酸法。

劉洪波[10]采用上述檢測方法對白術(shù)炮制品的還原糖與水溶性糖進行測定，結(jié)果表明其還原糖含量明顯增加，當炮制程度越高時，其含量就越高；其中采用焦白術(shù)炮制方法的水溶性多糖含量明顯高于其他種類的炮制方式；清炒白術(shù)的水溶性多糖含量要高于白術(shù)；其中焦白術(shù)與生白術(shù)的多糖含量分別為31.31%，41.74%。這與鄭芳、盧燕平等人[11-12]的研究結(jié)論差異較大，由此可證明白術(shù)多糖的含量與白術(shù)的提取方式、品種等息息相關(guān)。

1.3 無機元素

潘利文等人[13]對白術(shù)的相關(guān)微量元素進行了系統(tǒng)的分析探討，并對沸水與氯仿進行含量提取，比較不同微量元素的檢出率與乙醇溶液溶度的相關(guān)性。結(jié)果顯示，與氯仿提取液的含量相比，其水煎液中的微量元素含量較低，進一步驗證了微量元素以有機結(jié)合形態(tài)存在的情況居多。其中Ca的溶出率僅為13.9%，但其檢測含量較高；K的溶出率較高，為88.5%；Fe與Mn的溶出率均在30%～35%。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，當乙醇溶液濃度降低時，上述各元素的提取概率逐漸上升，且無水乙醇中的提取率非常低，最低僅為1.4%[14]。

1.4 蛋白質(zhì)

李清初等人[15]對白術(shù)中的蛋白質(zhì)成分進行分析，并采取微量雙縮脲法進行測定，結(jié)果顯示其含量為11.5%。

2 生理活性研究

臨床研究顯示，白術(shù)揮發(fā)油的作用顯著，主要包括促進胃腸分泌、抑制子宮平滑肌、增強胃腸血液循環(huán)、抑制腫瘤生長、降血糖、保護肝臟等。前期研究多集中于白術(shù)揮發(fā)油，近幾年來隨著臨床研究的深入，對白術(shù)多糖的生理活性研究取得了一定的進展，現(xiàn)將研究成果進行歸納總結(jié)，主要包括以下幾點。

2.1 促進腸胃運動

白術(shù)水煎后可有效促進小鼠腸胃運動，主要與α受體相關(guān)[16-17]。當給予小劑量的水煎劑時，其對小鼠的回腸平滑肌收縮抑制作用較輕微，當加大藥物劑量后，進一步加強了平滑肌的收縮功能，二者之間呈正相關(guān)。

2.2 免疫調(diào)節(jié)

臨床研究顯示，白術(shù)多糖PAM對小鼠具有良好的免疫增強效用。當白術(shù)多糖劑量相當時，將在一定程度上增加免疫器官的總量，使得其巨噬細胞的吞噬功能進一步增加，同時還可使得白細胞數(shù)量增加；當小鼠體內(nèi)的溶血素水平增加時，將進一步刺激B細胞的分化增殖能力，使得機體內(nèi)的抗體水平增加，從而有效提高免疫功能。

2.3 抗腫瘤、調(diào)節(jié)淋巴細胞

白術(shù)多糖PAM可以有效促進淋巴細胞的轉(zhuǎn)化功能，使得其進一步向成熟T淋巴細胞進行轉(zhuǎn)化，從而加強外周血T淋巴細胞的染色率，有效抑制腫瘤的發(fā)生，究其原因與β-腎上腺素受體激動劑相關(guān)。此外，白術(shù)還可使得瘤細胞增殖率有效降低，使得瘤組織侵襲性減低，提高抗腫瘤反應(yīng)能力等。其對腫瘤產(chǎn)生的抑制效果可能與白術(shù)多糖對免疫機能的增進效用相關(guān)。

2.4 延遲衰老

白術(shù)具有良好的抗氧化效用，可以有效抑制有害物質(zhì)對組織結(jié)構(gòu)功能的破壞，此外還具有提高SOD活性的征象，使得機體對自由基的清除能力增強，減少機體的損傷。李姿慧等人[18]研究表明，采用白術(shù)煎劑用于試驗檢測中發(fā)現(xiàn)，該類物質(zhì)可使得丙二醛含量有效降低，提高小鼠GSH-Px活力，延緩衰老作用顯著。

2.5 調(diào)節(jié)植物神經(jīng)系統(tǒng)

研究表明，白術(shù)可有效調(diào)節(jié)植物神經(jīng)系統(tǒng)，在此基礎(chǔ)上將其用于消化道功能紊亂患者的臨床治療中，可達到補脾的效用。其中β-桉葉油醇可有效降低骨骼肌乙酰膽堿受體的敏感性，其中白術(shù)中蒼術(shù)醇的抗膽堿效用顯著，具有良好的Ca2+拮抗效果[19]，多種成分共同作用使得白術(shù)的鎮(zhèn)痛作用顯著。

2.6 降血糖

白術(shù)用于降血糖的作用顯著，可加速葡萄糖代謝。其中白術(shù)內(nèi)酯A對于高血糖小鼠具有良好的降血糖效果。β-桉葉油醇可使得神經(jīng)肌肉接頭被阻斷，并有效降低糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生率；給予適量的白術(shù)煎劑可有效保護肝臟；白術(shù)中的酸性多糖成分可有效減少糖尿病小鼠的耗食量與飲水量，使得血糖水平明顯降低等。

2.7 白術(shù)多糖對人外周血來源的樹突狀細胞（dendritic cells，DC）表型與功能的影響

（1） 白術(shù)多糖對DC表型的影響。DC分別經(jīng)過不同質(zhì)量濃度的白術(shù)多糖連續(xù)作用24 h后，分別收集于流式管內(nèi)，并注入 20 μL的 PE-HLA-DR，PE-CD83，F(xiàn)ITC-CD86，再給予5×105的細胞懸液100 μL，將其充分搖勻，在常溫下保存0.5 h，并采用流式細胞儀進行檢測。結(jié)果得知，顯示白術(shù)多糖均可上調(diào)CD83，CD80，CD86，HLA-DR表達，可有效促進DC表型的成熟。對于不同質(zhì)量濃度的白術(shù)多糖顯示為劑量依賴性，經(jīng)過臨床檢測后得知，其最適宜的白術(shù)多糖劑量為100 μg/mL[20]。

（2） 對DC吞噬功能的作用效果。DC在不同質(zhì)量濃度的白術(shù)多糖溶液內(nèi)連續(xù)作用24 h后兌入FITC-dextran 1 mg/mL，于37℃條件下保存60 min，然后連續(xù)沖洗2次（采用PBS），并采用流式細胞儀進行檢驗。結(jié)果表明，成熟的DC其吞噬功能較弱，反之則較強。收集細胞檢測后顯示DC吞噬FITC-dextran的能力逐漸降低，呈現(xiàn)為劑量依賴性。

（3） 對DC分泌IL-12與TNF-α的影響。收集細胞后采集總蛋白，并進行電泳試驗，連續(xù)電泳30 min，濃縮膠80 V，分離膠120 V電泳1 h，給予聚偏氟乙烯進行轉(zhuǎn)膜處理，連續(xù)轉(zhuǎn)膜1 h，給予脫脂奶粉封閉，給予抗TLR4于4℃條件中進行孵育，后加入二抗于常溫下連續(xù)孵育2 h，采用化學發(fā)光顯影法分析其參數(shù)條帶灰度值、目標條帶灰度值等。結(jié)果表明，采集細胞上清液后對IL-12與TNF-α進行ELISA檢測，結(jié)果得知白術(shù)多糖可使得上述參數(shù)值的分泌量增加，顯示為劑量依賴性。

3 結(jié)語

白術(shù)作為臨床上較為常用的一種中藥材，應(yīng)用范圍十分廣闊，常規(guī)用藥范圍包括燥濕利水、健脾益氣、安胎、止汗等，此外，還可用于抗氧化、抗腫瘤、抗炎、防止老年癡呆等方面。其中，許多藥理成分并不十分明確，如燥濕利水、安胎等的活性成分。今后臨床研究中將進一步加強白術(shù)中活性成分的探討，包括其發(fā)揮作用的具體活性成分、作用方式、作用機制等，以便為白術(shù)的臨床應(yīng)用提供更加可靠的依據(jù)。

近年來，許多專家學者均對白術(shù)進行了相關(guān)的研究分析，研究內(nèi)容包括揮發(fā)油、白術(shù)多糖、白術(shù)內(nèi)酯類等化學成分的提取與藥理作用等方面，且取得了一定的研究進展。目前已明確，白術(shù)揮發(fā)油具有良好的抗腫瘤效果，白術(shù)多糖可有效提高免疫力，是提高免疫力的有效成分之一，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ是白術(shù)健脾運脾的有效成分等。白術(shù)在我國各地均有分布，歷史上對白術(shù)的炮制方式多種多樣，這在一定程度上使得白術(shù)的活性成分與含量、種類等遭受一定的破壞，導(dǎo)致用藥效果受到影響[21-22]，且《中國藥典》（2015年版）對白術(shù)的質(zhì)量研究中缺乏具體的量化指標，提示今后應(yīng)加大力度建立更加完善可靠的質(zhì)量評價體系，促進白術(shù)用藥的安全穩(wěn)定性。