雞傳染性貧血病研究進展

(浙江省動物疫病預防控制中心，浙江 杭州 311199)

雞傳染性貧血病(Chicken infectious anemia，CIA)是由雞傳染性貧血病毒(Chicken infectious anemia virus，CIAV)引起，以再生障礙性貧血和廣泛性淋巴細胞衰竭為主要特征的免疫抑制性傳染病。免疫機能受損導致對其他病原的易感性增高，極易并發(fā)或繼發(fā)其他傳染性疾病，并且對某些疫苗的免疫應答下降，甚至免疫失敗。該病發(fā)生后在雞群中長期存在，難以凈化，嚴重影響雞群的生長及生產(chǎn)性能，對養(yǎng)雞業(yè)造成不同程度的經(jīng)濟損失。

1979年Yuasa等[1]在日本首次分離到雞傳染性貧血病毒(Gifu-1株)，1992年崔現(xiàn)蘭等[2]在我國黑龍江首次分離到該病毒。雞傳染性貧血病毒屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridae)的陀螺病毒(Gyrovirus)屬，為二十面體單股負鏈DNA病毒，基因組全長2.3 kb，有3個開放閱讀框分別編碼VP1、VP2和VP3三種蛋白。VP1是主要的免疫原蛋白，與VP2共同作用誘導產(chǎn)生中和抗體，VP3作為功能蛋白會誘導雞胸腺細胞和原始造血細胞凋亡，導致嚴重貧血、免疫抑制等癥狀[3-4]。該病毒比較保守，只有1個血清型；雞是已知的唯一宿主，未發(fā)現(xiàn)其他禽類易感。

1 流行病學研究進展

近幾年國內(nèi)的流行病學調(diào)查表明，CIAV感染陽性率較高，且混合感染普遍存在。解慧梅等[5]對蘇中地區(qū)開展血清學調(diào)查，CIAV抗體整體陽性率為50.59%，江蘇泰州、揚州、南通地區(qū)的平均陽性率分別為61.35%、52.13%和41.36%。儲鴻蒙[6]對安徽省進行CIAV血清學調(diào)查及分析，抗體總陽性率為63.60%，皖南、皖中、皖北地區(qū)CIAV抗體陽性率在60%～64.46%，調(diào)查的126個養(yǎng)殖場中70.63%場點呈陽性。鮑偉華等[7]調(diào)查研究浙江寧波雞傳染性貧血病毒(CIAV)、禽白血病病毒(ALV)及禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)的感染情況，CIAV的抗體陽性率最高(66.8%)，所有雞場共同感染ALV-AB和CIAV，80.0%雞場共感染3種免疫抑制性疫病。姜泊宇等[8]對江蘇省某雞場開展雞星狀病毒(CAstV)、雞傳染性貧血病毒(CIAV)和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(REV)的病原學調(diào)查，PCR和RT-PCR檢測結(jié)果顯示，CAstV、CIAV、REV單獨檢出率分別為45%、37.5%和O%，其中CAstV和CIAV雙重感染率為25%。

通過進一步的病毒分離鑒定、序列同源性和遺傳進化分析，分離獲得的CIAV毒株多呈高致病性，所屬分支和親緣性有所差異。Zhang X等[9]綜合分析了2011-2012年我國南方地區(qū)CIAV的系統(tǒng)發(fā)育和表征，分離到的13個毒株均具有標志其高致病性的394位氨基酸。Li Y等[10]將2014-2015年我國分離到的24個CIAV毒株分別歸類到進化樹中的8個分支，所有獨特的核酸和氨基酸替換均發(fā)生在VP1區(qū)域，且具備394位氨基酸，推測其高致病性。Xie Z等[11]從廣西三黃雞中分離到1個CIAV毒株(命名為GXC060821)，與我國的兩個CIAV毒株(TJBD40和LF4)關(guān)系近。于帥(2015)[12]從四川省獲得的11個CIAV分離株處在同一分支上，與美國分離株(Del Ross株)親緣性最近。藺文成[13]等從廣東省大型雞場分離得到4株CIAV毒株，均為高致病性的Ⅱ分支病毒株。林歡等[14]從黑龍江分離到1個CIAV毒株(命名為HLJl6069)，與日本分離株C369親緣關(guān)系最近(99.1%)，且在VP1的75、89、141和394位氨基酸存在有意義的突變。

2 分子生物學檢測方法研究進展

2.1特異性單病原檢測方法 國內(nèi)研究學者先后建立了檢測CIAV的套式PCR方法(nested-PCR)、環(huán)介導等溫擴增方法(LAMP)等，為CIAV的病原學檢測提供多選的分子生物學手段。王景儒等[15]建立了適合CIAV快速檢測的套式PCR方法,通過兩步PCR擴增將敏感性從第1步的100 pg提高到第2步的1 fg,敏感性提高了105倍。該方法因具有敏感性高、重復性好、特異性強等優(yōu)點,可用于CIAV的臨床診斷和分子流行病學調(diào)查。張訓海等[16]搭建檢測CIAV的LAMP技術(shù)平臺，所建立的方法不需要特殊儀器，有效擴增在65℃恒溫條件下即可完成，且通過SYBR Green I染料可直接肉眼判斷結(jié)果，具備快速高效、成本低、結(jié)果直觀顯示、操作簡便等優(yōu)勢，可應用于基層檢測診斷。

由于弱毒疫苗中污染CIAV是造成雞群感染的途徑之一，通常疫苗中CIAV污染劑量較低，常用的細胞培養(yǎng)檢查法和經(jīng)典的SPF雞檢查法較為復雜和困難，為更快速、靈敏地檢測到弱毒疫苗中CIAV的低劑量污染，針對性地建立了實時熒光定量PCR、SYBR GreenⅠ熒光定量PCR等方法，均能夠檢測到1000羽份弱毒疫苗中1個EID50的低劑量污染。任志浩等[17]建立的CIAV實時熒光定量PCR檢測方法靈敏度可達10拷貝/μL，比常規(guī)PCR靈敏度高100倍，但該方法需要合成專門的Taq Man探針，成本相對較高，并且針對每一種外源病毒檢測時均需要合成特定探針，給企業(yè)帶來較多的經(jīng)濟開支，企業(yè)不容易接受。付佳媛等[18]建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法，靈敏度可達6.36拷貝/μL，是常規(guī)PCR靈敏度的1000倍，具有快速、準確、特異性高、可實時監(jiān)測、定量以及自動化程度高等優(yōu)點。

2.2多重檢測方法 CIA、AL、RE等雞免疫抑制性疫病常常發(fā)生混合感染，使確診的難度加大，建立能夠同時檢測多種病原的多重檢測方法，將大大提高檢測效率和準確性。蘇霞等[17]研究建立的同時檢測CIAV、REV與ALV的基因芯片方法，將分子生物學與微電子技術(shù)結(jié)合，靈敏度達到106拷貝/mL，比PCR的敏感性高出100倍，且結(jié)果肉眼即能判讀；與傳統(tǒng)檢測方法相比，具有快速、敏感、高通量的特點，能實現(xiàn)對多種病原的同時檢測。曾婷婷等[20]建立的基于GeXP多基因表達分析系統(tǒng)的多重PCR方法，能夠同時檢測包括雞傳染性貧血病毒、雞馬立克病毒、禽白血病病毒(包括A、B和J亞群)、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒、禽呼腸孤病毒和傳染性法氏囊炎病毒在內(nèi)的6種雞免疫抑制病病毒8個目的基因，敏感度達到100 拷貝/20 μL，兼具高通量、強特異性和高敏感度，可用于臨床鑒別診斷和分子流行病學調(diào)查，具有很高的臨床應用價值。

3 討論

3.1免疫抑制使危害加劇 CIAV等免疫抑制性病毒會侵害家禽的免疫系統(tǒng)，易出現(xiàn)其他病原的并發(fā)或激發(fā)感染,尤其是當出現(xiàn)多種免疫抑制病共同感染時，會互相增強致病力，在免疫抑制上出現(xiàn)明顯的協(xié)同效應。有研究表明[21-23]，CIAV感染會顯著降低禽流感滅活疫苗和活疫苗的免疫效果，對活疫苗的免疫效果影響更大；CIAV感染會降低馬立克氏病的疫苗免疫功能；CIAV與REV共感染會加重導致家禽生長遲緩，對新城疫疫苗抗體反應的免疫抑制作用比單一病毒感染要嚴重得多。因此，進行疫苗免疫防控時，需高度重視免疫抑制病的影響。

3.2弱毒疫苗污染檢測不容忽視 在一些減毒活疫苗中發(fā)現(xiàn)外源性病毒，報告最多的是ALV和REV，CIAV也報告較多[24]。因ALV、CIAV、REV等病毒主要是通過垂直傳播，使用了被病毒污染的SPF雞胚制成的減毒疫苗會感染雞群。Li Y等[25]首次報道在中國SPF雞中檢測到CIAV，并分離鑒定一個毒株(命名為SD1403)，推測這可能是減毒疫苗被CIAV污染的重要原因。在SPF雞群和減毒疫苗中開展CIAV檢測，排除低劑量污染，將極大保障疫苗的使用安全和免疫效果。

3.3防控關(guān)鍵在預防 由于目前尚無治療CIA的特效藥物，要堅持以預防為主，采取綜合防控措施。一是加強對種雞的檢疫，在引進種雞前進行CIAV抗體檢查，防止引入帶毒雞；種蛋孵化前也要進行嚴格消毒。二是嚴格科學飼養(yǎng)管理，做好雞舍的日常清潔和消毒滅源工作，嚴格管理人員、車輛、飼養(yǎng)工具等進出管理，防止攜帶病原的傳播媒介污染養(yǎng)殖環(huán)境[26]。三是切斷垂直傳播途徑，通過種雞群的普查，掌握病毒分布、隱性感染和帶毒狀況，淘汰種雞群、低齡發(fā)病雞只，切斷CIAV的垂直傳播源。四是做好疫苗保護，可經(jīng)飲水免疫接種CIA弱毒商品凍干疫苗，重點針對12-16周齡的高危易感對象，接種15 d后逐漸產(chǎn)生有效抗體，6周后達到最強免疫力，一般免疫保護力可持續(xù)至60周齡左右。