連花清瘟治療流行性感冒的研究現(xiàn)狀

張露花，余芳蓉，桑文濤,賀晉豪

流行性感冒是一種由流感病毒引起的急性呼吸道感染，傳染性強，發(fā)病率高，且可跨物種間交叉感染。臨床表現(xiàn)為高熱乏力、全身疼痛、惡心嘔吐、鼻塞流涕等。連花清瘟在治療流行性感冒中具有良好的效果，是一種中藥復方制劑，包括連花清瘟片、連花清瘟膠囊、連花清瘟顆粒三種劑型，具有清瘟解毒，宣肺泄熱等功效?，F(xiàn)代藥理研究表明其具有抗病毒、抗菌、抗炎的作用，主要用于治療流行性感冒，屬熱毒襲肺證。本文就連花清瘟治療流行性感冒的研究現(xiàn)狀進行綜述，以期為該藥的深入研究和臨床應用提供一定的科學依據(jù)。

1 流行性感冒概述

流感是冬季發(fā)病和死亡的主要誘導因素之一。流感病毒感染最初影響的是呼吸道上皮細胞，隨后骨髓和淋巴細胞產(chǎn)生促炎反應，激活宿主免疫系統(tǒng)，氣道上皮細胞和肺泡巨噬細胞釋放多種促炎細胞因子和趨化因子，如腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α），白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6），干擾素（interferon，IFN）和巨噬細胞炎性蛋白（Macrophage in fl ammatory protein ，MIP）等，通常被稱為 “細胞因子風暴”，過量促炎細胞因子可能導致組織損傷和炎癥[1～2]，發(fā)病機制涉及線粒體功能障礙[3]，氧化應激[4]，內(nèi)皮功能障礙[5]等，這些都有助于流感病毒的復制。流行性感冒的臨床癥狀主要包括咳嗽，發(fā)熱，咽喉痛，流鼻涕和充血，偶爾也會引起下呼吸道疾病如肺炎[6～7]，對于患有嚴重疾病的患者，可能發(fā)展為全身性免疫失調(diào)反應，最終可能導致死亡。在生理條件下，流感病毒感染與異常炎性細胞因子相關，因此，通過調(diào)節(jié)炎癥反應可維持機體平衡，從而預防和治療流感[8～9]。

2 連花清瘟的藥理作用

2.1 連花清瘟制劑的藥理作用

2.1.1 抗病毒…采用MTT和噬斑減少試驗測定連花清瘟的體外細胞毒性以及抗病毒活性發(fā)現(xiàn)連花清瘟在體外抑制各種菌株的流感病毒的增殖，阻斷病毒感染的早期階段（0-2 h），同時抑制病毒誘導的NF-κB活化，并呈劑量依賴性減輕病毒誘導的IL-6，白細胞介素-8（interleukin-8 ，IL-8），TNF-α，干擾素誘導蛋白10（Interferon-induced protein 10，IP-10）和單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的基因表達（P＜0.05），有效地減弱了病毒核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）的核輸出。在病毒接種后，給BALB/c小鼠施用不同濃度的連花清瘟5天后發(fā)現(xiàn)連花清瘟組小鼠肺中病毒滴度的降低，以及在感染早期也可下調(diào)炎性細胞因子的水平[10]。因此可將連花清瘟制劑用于常規(guī)季節(jié)性流感來對抗流感病毒。

2.1.2 抗炎…動物實驗研究表明，在脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導小鼠急性肺損傷的模型中，連花清瘟膠囊能通過下調(diào)IKK/IκB/ NF-κB信號通路，降低模型小鼠的炎癥因子來減輕肺內(nèi)炎癥反應，又通過抑制炎癥細胞浸潤，改善肺泡上皮細胞和肺血管內(nèi)皮細胞連接蛋白的表達，從而減輕脂多糖導致的小鼠急性肺損傷起到保護作用[11-12]。因空氣條件對呼吸系統(tǒng)影響甚大，有研究者將空氣中細顆粒物（PM2.5）致大鼠肺部炎癥損傷進行探究發(fā)現(xiàn)氣管滴注PM2.5懸液進入肺泡內(nèi)，作用于肺泡巨噬細胞，誘導其毛細血管通透性增加，細胞因子大量釋放，NF-κB 通路激活并促進相關基因表達，以及導致肺間質(zhì)纖維組織增生、間質(zhì)水腫等，從而造成肺部炎性損傷，給予連花清瘟后，大鼠肺泡灌洗液（BALF）和血清中IL-1、IL-6、TNF-α水平降低(P＜0. 05)，表現(xiàn)出對肺部炎性損傷的拮抗作用[13]。與此同時，也有研究者采用連花清瘟膠囊對抗汽車尾氣染毒小鼠[14]，結(jié)果表明連花清瘟膠囊可減輕支氣管上皮腫脹，上皮細胞增生、壞死、脫落，肺泡內(nèi)出血，血管周圍水腫，以及肺組織中TNF-α， IL-1β， IL-4，IL-6，IL-12，IL-13 mRNA和蛋白表達(P＜0. 01), 說明連花清瘟膠囊通過降低炎性因子的分泌來改善汽車尾氣造成的小鼠肺組織病理損傷。綜合上述藥理研究可表明連花清瘟制劑具有明確的抗炎作用，可用于炎性疾病。

2.1.3 抗菌…在致病菌耐藥菌株比例日益上升的今天，細菌感染愈加難治，連花清瘟的抗菌作用逐漸被研究和應用，并表現(xiàn)出良好的抗細菌生物膜效應。一般情況下，細菌以非常精細的方式相互聚集黏結(jié)在一起，形成細菌生物膜，而其很難被分解，大多數(shù)常規(guī)抗菌藥無法穿透生物膜，而連花清瘟能殺滅細菌，且能穿透細菌生物膜,雷洪濤等[15]研究發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊具有顯著的抗成熟金黃色葡萄球菌生物膜的作用，王藝竹[16]以微孔板法建立呼吸道感染相關的五種重要細菌的生物膜模型，通過觀察金黃色葡萄球菌生物膜成分、表面形態(tài)、微觀結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊提物可以減少兩種金黃色葡萄球菌的生物膜厚度和活菌數(shù)量，干擾金黃色葡萄球菌生物膜中細菌的排列，并且影響生物膜胞外基質(zhì)的形態(tài)，破壞膜完整性，并且降低金黃色葡萄球菌的纖連蛋白結(jié)合蛋白基因的表達(P＜0.05)，進一步驗證連花清瘟膠囊對呼吸道感染相關的細菌生物膜具有抑制作用。以上結(jié)果表明連花清瘟制劑具有明確的抗菌作用，可突破細菌生物膜，顯著抑制膜內(nèi)活菌的數(shù)量。為對抗細菌耐藥性提供了新的治療藥物。

2.2 連花清瘟的物質(zhì)基礎及其藥理作用

連花清瘟由連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、石膏、板藍根、綿馬貫眾、魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、薄荷腦及甘草組成，從中藥組分來看符合中醫(yī)治療炎性疾病的特點。連花清瘟的處方中連翹和金銀花為君藥，前者性涼味苦，后者性寒味甘，均有清熱解毒、疏散風熱之功效，聯(lián)合用之可產(chǎn)生協(xié)同作用。連翹具有散結(jié)消腫，清熱解毒的功效，主要成分為連翹揮發(fā)油[17]，具有抗病毒、抗炎、抑菌作用，以雞胚為載體，發(fā)現(xiàn)連翹揮發(fā)油對亞洲甲型流感病毒和Ⅰ型副流感病毒具有顯著的抑制作用[18]。采用大鼠發(fā)熱模型，給予連翹揮發(fā)油后發(fā)現(xiàn)酵母致熱大鼠下丘腦中 cAMP含量明顯下調(diào)（P＜0.05），同時也伴隨著體溫的下降[19]。在大鼠足下注射角叉菜膠、雞蛋清大鼠足腫脹模型以及大鼠棉球肉芽腫模型中[20]，研究發(fā)現(xiàn)連翹揮發(fā)油可降低角叉菜膠和雞蛋清所誘導的大鼠足腫脹和肉芽組織的增生。胡克杰等[21]研究表明連翹對多種細菌均有抑制作用，尤其對金黃色葡萄球菌。金銀花性甘、寒，入肺、心、胃、大腸經(jīng)，具有清熱解毒、宣散風熱的功效，金銀花臨床常用于治療感冒。金銀花主要成分為綠原酸和異綠原酸，都是抗流感病毒作用的主要活性成分。在金銀花的體內(nèi)抗炎實驗中，二甲苯導致耳腫脹的小鼠經(jīng)金銀花提取液灌胃給藥后，發(fā)現(xiàn)小鼠血清中的TNF-α和IL-6的含量下降（P＜0.05），表明金銀花提取液可以抑制TNF-α 和IL-6的釋放[22]。朱琳楓等[23]在研究金銀花乙醇提取物對流感病毒復制的抑制作用的實驗中，發(fā)現(xiàn)金銀花乙醇提取物對流感病毒表現(xiàn)出較強的抑制作用。Zhou Z等[24]發(fā)現(xiàn) miR2911具有光譜的抗病毒活性，可以直接靶向H1N1、H5N1和H7N9甲型流感病毒，抑制H1N1 編碼的PB2 和 NS1 蛋白的表達（P＜0.05），抑制病毒復制，miR2911 對 H5N1 和 H7N9 甲型流感病毒體內(nèi)、外均有抑制作用。

炙麻黃、石膏和炒苦杏仁為臣藥，聯(lián)合用之既助君藥清泄肺火，又能宣肺平喘。麻黃具有宣肺平喘、發(fā)汗解表以及消腫利水功效，現(xiàn)代藥理表明具有解熱、發(fā)汗利水、免疫抗炎等作用，主要用于風寒感冒、氣喘咳嗽等病癥，在麻黃化學拆分組分實驗中[25]，證實麻黃發(fā)揮解熱作用的物質(zhì)基礎為生物堿組分、揮發(fā)油組分及酚酸組分，同時麻黃也具有松弛支氣管平滑肌，收縮血管，升高血壓及興奮中樞的作用。研究發(fā)現(xiàn)以枸櫞酸誘導豚鼠咳喘模型，發(fā)現(xiàn)在灌服麻黃總生物堿和麻黃堿2 h后，均達到鎮(zhèn)咳平喘的效果，但作用維持時間有所差異[26]?？嘈尤屎锌嘈尤受蘸涂嘈尤拭?，主要的藥理作用為止咳定喘，研究發(fā)現(xiàn)[27]苦杏仁苷在體外對脂多糖（LPS）誘導的小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7炎癥模型具有干預作用，其作用機制可能與抑制炎癥因子 IL-17A、IL-23 以及趨化因子 CCL2、CCL5的表達（P＜0.05），抑制NF-κB、p38MAPK 信號通路的過度激活有關。石膏 “味辛，微寒”，主要化學成分為含水硫酸鈣，清肺胃氣分熱，涼而能散，發(fā)表解肌，功在除熱，多用于清除里熱，現(xiàn)廣泛用于治療熱性疾病。

板藍根、綿馬貫眾、魚腥草、薄荷腦、廣藿香、大黃、紅景天、甘草為佐藥，合而用之，既助上述中藥清肺解毒、宣肺泄熱，又化濕濁而理氣和中。板藍根性味苦寒, 具有清熱解毒、利咽消腫的功效，化學成分為靛藍、靛玉紅?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)板藍根具有抗炎、抗病毒、解熱和提高免疫力等作用, 在臨床上常被用于治療各種感染, 如咽炎、扁桃體炎、肝炎、角膜炎等[28]。板藍根含有多種化學活性物質(zhì)，其中水楊酸可顯著抑制LPS誘導的HL-60細胞釋放的IL-8，研究者進一步采用LPS重復刺激J744.a.1小鼠單核巨噬細胞株，發(fā)現(xiàn)板藍根多糖可抑制LPS刺激引起的NF-κB和DNA結(jié)合活性的升高[29]。鄧春霞[30]對板藍根中的抗病毒活性成分進行實驗研究, 結(jié)果顯示板藍根的三種提取物中表告依春的抗病毒活性最強, 喹唑二酮只有輕微的抗病毒作用 , 靛玉青則無抗病毒活性。大多數(shù)學者認為其抗病毒作用能在細胞表面與病毒形成競爭性吸附, 防止病毒入侵正常細胞及增強免疫力等方面有關。綿馬貫眾化學成分為綿馬精和綿馬酸，均為蛋白酶的抑制劑。魚腥草味辛，微寒，歸肺經(jīng)，具有清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋的功能，主要用于肺癰吐膿、痰熱喘咳等。魚腥草含揮發(fā)油，主要化學成分為甲基正壬酮、月桂油烯。魚腥草顆粒對甲型流感病毒有直接滅活作用，并且能抑制病毒在雞胚內(nèi)的增殖[31]。魚腥草能阻斷甲型流感病毒誘導MDCK細胞凋亡[32]。廣藿香具有芳香化濁、和中止嘔、發(fā)表解暑功效。主治濕濁中阻、暑濕表證等?，F(xiàn)代藥理作用表現(xiàn)為調(diào)節(jié)胃腸道功能、抗炎和抗菌、鎮(zhèn)痛與解熱等，主要化學成分為廣藿香醇、刺蕊草醇。魏曉露等[33]在體外抗病毒實驗驗證了廣藿香酮和廣藿香醇對腺病毒、甲型流感病毒、柯薩奇病毒等具有明顯的抑制作用。王曉云等[34]用瓊脂稀釋法測定廣藿香酮的藥物敏感性，發(fā)現(xiàn)廣藿香酮對金黃色葡萄球菌有抑制活性，進一步通過對金黃色葡萄球菌ATCC25923在1倍最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)廣藿香酮藥物作用1 h時進行轉(zhuǎn)錄組的高通量測序分析后篩選出225個差異表達的基因，發(fā)現(xiàn)廣藿香酮使金黃色葡萄球菌膜蛋白的表達、蛋白質(zhì)的合成發(fā)生變化，并且使葡萄糖以及多糖的轉(zhuǎn)運和合成受到控制。大黃，性寒，味苦，歸脾、胃、大腸、肝、心包經(jīng)?？蔀a火攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃。大黃主要化學成分為大黃酚、蘆薈大黃酚、大黃酸等，對多種細菌均有不同程度的抑制作用，包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌等[35], 抗菌機制為抑制菌體糖及糖代謝中間產(chǎn)物的氧化、脫氨、脫氫，并能抑制蛋白質(zhì)和核酸的合成。大黃也能清除組織和血漿內(nèi)的炎性介質(zhì)[36]，其中蒽醌衍生物被還原后，產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)上和四環(huán)素具有相似性，能夠發(fā)揮一定的抗感染作用。臨床實驗發(fā)現(xiàn)，大黃還能對乙肝病毒有一定抑制功效[37]。紅景天含有抗衰老的活性超氧化物，可增加機體對病原體的抵抗力。薄荷腦是部分蛋白酶的激動劑，同時又是部分蛋白酶的抑制劑，對流感病毒蛋白酶有抑制作用。甘草的主要化學成分有甘草甜素、甘草酸等。甘草甜素有解毒、抗炎、抑制病毒復制的作用，甘草酸有抗炎鎮(zhèn)咳、抗癌作用。研究發(fā)現(xiàn)，甘草粗提物及甘草酸單銨鹽均能顯著抑制H9N2亞型流感病毒，且明顯延長感染流感病毒的小鼠生存時間[38]。

綜上，在連花清瘟藥物處方組成中，大多藥味對流感病毒有抑制作用，而紅景天提高人體免疫力，石膏具有退熱功效，灸麻黃和苦杏仁可止咳平喘，因此連花清瘟在治療流行性感冒上效果顯著，且具有價格低、易購買等優(yōu)勢，基層醫(yī)療單位可將其作為流感治療的首選藥物。

3 連花清瘟治療流行感冒的臨床觀察

有研究者將連花清瘟與奧司他韋治療輕度甲型H1N1流感患者進行隨機對照試驗（Randomized Controlled Trial，RCTs），結(jié)果表明連花清瘟對發(fā)熱，咳嗽，喉嚨痛和疲勞有明顯緩解作用，同時也可縮短病程[39,40]。為了評價連花清瘟膠囊治療流感的安全性和有效性，有研究者根據(jù)納入和排除標準，評估納入隨機對照試驗，采用meta分析，結(jié)果顯示與奧司他韋相比，連花清瘟在緩解流感癥狀方面更為有效，包括減輕頭痛、喉嚨痛、全身疼痛，止咳以及退燒的時間；與利巴韋林和安卡黃敏相比，連花清瘟降溫速率相對較快，表明連花清瘟膠囊比奧司他韋，利巴韋林和氨咖黃敏膠囊更有效，更安全[41]。在臨床研究中，李倩[42]按隨機數(shù)表法將86例急性上呼吸道感染的患者分為對照組和觀察組，對照組患者接受抗病毒口服液治療，觀察組聯(lián)用抗病毒口服液和連花清瘟膠囊，結(jié)果發(fā)現(xiàn)觀察組治療總有效率高于對照組，體溫恢復正常、咳嗽、流涕、鼻塞緩解時間短于對照組（P＜0.05），可見連花清瘟膠囊聯(lián)合抗病毒口服液治療急性上呼吸道感染，可有效加快癥狀緩解，且觀察組和對照組不良反應發(fā)生率沒有明顯差異，說明連花清瘟膠囊治療急性上呼吸道感染不會增加患者不良反應的發(fā)生。陳團營等[43]在對117 例小兒肺炎支原體肺炎患兒采用連花清瘟顆粒治療觀察發(fā)現(xiàn)，觀察組患兒治療后退熱時間、咳嗽消失時間、濕羅音消失時間、氣促緩解時間及住院時間均短于對照組，且治療后患兒血清炎癥因子水平包括超敏C反應蛋白（highsensitivity C-reactive protein，hs-CRP）、白細胞介素-10（interleukin-10 ，IL-10）、白細胞介素-17A（interleukin-17A，IL-17A）、TNF-α以及呼吸頻率（Respiration Rate，RR）水平下降（P＜0.05），秒用力呼氣量(Forced Expiratory Volume In 1s，F(xiàn)EV1)、呼氣峰流速值（peak expiratory fl ow，PEF）及 FEV1/用力肺活量（forced vital capacity，F(xiàn)VC）水平上升（P＜0.05），表明連花清瘟顆粒治療小兒肺炎支原體肺炎可快速緩解患兒臨床癥狀、體征，可降低患兒血清炎癥因子水平，改善患兒肺功能。翟紅玉等[44]將78例急性化膿性扁桃體炎患者作為研究對象，隨機分成兩組，常規(guī)組采用青霉素V鉀片聯(lián)合板藍根進行治療，實驗組則聯(lián)合連花清瘟膠囊進行治療，結(jié)果顯示，與常規(guī)組比較，實驗組體溫恢復時間、扁桃體腫大消失時間以及咽痛消失時間明顯縮短且治療有效率高于常規(guī)組（P＜0.05），表明連花清瘟膠囊在治療急性化膿性扁桃體炎上有效率高，且作用發(fā)揮快。以上藥理作用研究和臨床觀察都表明連花清瘟膠囊可顯著抑制病毒，并有抗菌、抗炎、增強免疫能力，在多個病理環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，并提升機體恢復能力，切實體現(xiàn)出中醫(yī)藥多靶點、多環(huán)節(jié)、多途徑整體治療優(yōu)勢。

4 結(jié)語

連花清瘟是吳以嶺教授以銀翹散合麻杏石甘湯化裁而得，多用于季節(jié)性流感，臨床前藥理研究和臨床實驗都表明連花清瘟既可抗流感病毒, 又能抗炎、抗菌、退熱、止咳化痰等, 作用機制與抑制病毒復制，破壞細菌細胞壁，下調(diào)炎癥因子的釋放有關。

綜上，在流行性感冒的治療中，連花清瘟膠囊表現(xiàn)出顯著的療效，既可殺死病毒又不傷及機體組織，還可增強免疫防御系統(tǒng)，在病毒、細菌已對西藥產(chǎn)生耐藥性的情況下，仍具有潛在治療作用，表現(xiàn)出更廣泛的適應性和優(yōu)越性，相信隨著研究的深入, 連花清瘟一定能更好地發(fā)揮其作用, 展示其更廣闊的研究與開發(fā)前景。