藥品微生物限度檢查方法適用性資料問題分析

張小莉

（陜西省咸陽市食品藥品檢驗檢測中心，陜西 咸陽 712000）

為了使藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)謹(jǐn)和可控，需證明所用檢查方法適宜，并保證方法的準(zhǔn)確性和完整性。2005年10月國藥典發(fā) [2005] 98號文《關(guān)于執(zhí)行2005年版〈中國藥典〉微生物限度檢查法和無菌檢查法有關(guān)問題的說明》提出應(yīng)“符合2005年版藥典規(guī)定”的要求，即從2005年版《中國藥典》[1]開始，需對藥品微生物限度檢查法進(jìn)行方法適用性考察，建立適合該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法，保證藥品質(zhì)量。藥品微生物限度檢查法始于1972年[2]，2005年至今3版藥典均要求對其方法進(jìn)行驗證。因2015年版藥品微生物限度檢查適用性方法與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌，相比于2010年版《中國藥典》發(fā)生了很大變化[3]，尤其是微生物限度檢查法。由于對新方法理解和掌握程度不同，出現(xiàn)的問題也不盡相同。在此對從不同企業(yè)索取驗證資料時發(fā)現(xiàn)的各種問題進(jìn)行匯總，并分析產(chǎn)生的原因。現(xiàn)報道如下。

1 資料問題

1.1 內(nèi)容不符合標(biāo)準(zhǔn)

1.1.1 未理解2015年版《中國藥典》[4]相關(guān)檢查方法實質(zhì)

操作方法有誤：菌落計數(shù)驗證和2010年版《中國藥典》一樣，供試品溶液和菌液同時加入，然后傾注培養(yǎng)基。2015年版《中國藥典》和國際接軌，以低稀釋級的供試品溶液作為菌液稀釋液，更能保證方法的可靠性。

菌落計數(shù)驗證不完整：2015年版《中國藥典》菌落計數(shù)驗證中需氧菌總數(shù)所驗證的菌株除了細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌），還有霉菌和酵母菌（黑曲霉和白色念珠菌）。這2種菌株同時也是需氧菌，只是微生物分類角度不同。

對“所加菌液不超過供試液1%”未理解：該項實質(zhì)是避免菌液稀釋供試品溶液，如取供試品溶液0.9 mL和菌液0.1 mL混勻，則菌液體積超標(biāo)。

對控制菌的檢出限理解不到位：如取大腸埃希菌-供試品溶液（1∶10，V/V）1 mL 加至 100 mL 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，藥典明確規(guī)定取樣量相當(dāng)于1 g或1 mL；但沙門菌如果方法同上，就把要求的取10 mL改為了1 mL，相當(dāng)于沙門菌檢出限縮小了90%。這樣減少取樣量實際上降低了控制菌的檢出概率。

1.1.2 質(zhì)量控制和管理人員工作作風(fēng)差

如在菌落計數(shù)中，對黑曲霉菌株不進(jìn)行驗證。有驗證資料提到，因黑曲霉驗證試驗污染環(huán)境，未開展該驗證。隨著國家對制藥企業(yè)管控力度的加大，企業(yè)生產(chǎn)和檢驗環(huán)境更加符合《生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）要求，人員素質(zhì)進(jìn)一步提高。另外，隨著檢驗水平的發(fā)展，人們對黑曲霉的認(rèn)識及質(zhì)量意識的提高，相關(guān)驗證逐步在企業(yè)開展，但驗證時注意對試驗人員和環(huán)境的保護(hù)。

1.2 資料信息問題

資料法律效力：現(xiàn)在索取的是具有企業(yè)公章的資料。公章與產(chǎn)品包裝的標(biāo)示生產(chǎn)單位不一致時，應(yīng)及時與生產(chǎn)單位溝通。

傳真或發(fā)送資料時問題頻出：資料內(nèi)容不完整[5]和書寫或結(jié)論表達(dá)不規(guī)范占大多數(shù)[6-7]的情況有所改善，但傳真資料中仍有僅描述試驗過程而無結(jié)果的情況；試驗結(jié)果描述內(nèi)容張冠李戴（如前半部分描述名稱是爐甘石洗劑，結(jié)論是本方法適合開塞露產(chǎn)品檢查）；或資料頁碼傳真不全。

特殊保護(hù)品種在資料中未予說明：如含神曲等發(fā)酵原粉的保密處方工藝制劑，資料中不僅應(yīng)包括試驗材料信息和過程，還應(yīng)在結(jié)論中說明微生物限度判定標(biāo)準(zhǔn)。以免因用錯標(biāo)準(zhǔn)造成結(jié)果偏差。

沿用以往藥典術(shù)語：2015年版《中國藥典》不再有常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法等術(shù)語，資料中的具體體積或溶液濃度應(yīng)以數(shù)字清晰表達(dá)，不用模糊語言。

2 企業(yè)問題

2.1 服務(wù)態(tài)度有待提高

企業(yè)提供資料后，有問題打電話（咨詢）再無人接聽，聯(lián)系不上。即使聯(lián)系到生產(chǎn)企業(yè)，但因藥品說明書留的常為銷售電話，而不是質(zhì)量檢驗室電話，導(dǎo)致電話來回轉(zhuǎn)接。而即使打通企業(yè)負(fù)責(zé)電話，部分企業(yè)竟然回答“全國都在用這個資料，沒有意見反饋，就那樣用吧，快更換2020版了”，讓人尷尬。這與企業(yè)未重視資料細(xì)節(jié)問題有關(guān)，更重要的是檢驗人員與制藥企業(yè)檢驗人員理解不同，需要進(jìn)行溝通。

2.2 職業(yè)素質(zhì)問題

非法添加抑菌物質(zhì)：如一個處方部分是含動物原藥材的中藥膠囊。按中藥成分分析和參照別家企業(yè)方法抑菌作用不強(qiáng)。企業(yè)方法以大腸埃希菌、沙門菌、耐膽鹽革蘭陰性菌陽性對照菌加入腸道菌增菌液體培養(yǎng)基100 mL中。按照該企業(yè)提供的驗證方法均未檢出所加目標(biāo)菌。然后沙門菌稀釋2 g→1 000 mL胰酪大豆胨液體（TSB）培養(yǎng)基中；大腸埃希菌（1∶10）10 mL加入1 000 mL TSB培養(yǎng)基中；耐膽鹽革蘭陰性菌（1∶10）1 mL加入100 mL腸道菌增菌液體培養(yǎng)基中；仍未檢出上述3種菌株陽性對照（培養(yǎng)基符合適用性要求，菌株來源可靠，種屬符合藥典要求）。因動物來源控制菌易檢出，所以可認(rèn)為該制劑添加了抑菌物質(zhì)。因該添加物不影響產(chǎn)品理化指標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)不檢查其是否非法添加，被鉆了空子。這種資料雖符合方法標(biāo)準(zhǔn)，但已經(jīng)不適合該產(chǎn)品。因為做資料時的處方和工藝與審批工藝不一樣。

編寫資料時照本宣科，未予驗證：當(dāng)對資料有疑問打電話咨詢企業(yè)時，企業(yè)答復(fù)是“才準(zhǔn)備做該產(chǎn)品的方法，暫時不好答復(fù)”。

3 分析與改進(jìn)建議

3.1 索取情況

各地藥監(jiān)部門和制藥企業(yè)進(jìn)行協(xié)商溝通，資料由過去企業(yè)保密不愿提供，到現(xiàn)在根據(jù)藥品附帶說明書的聯(lián)系方式或個別企業(yè)網(wǎng)上查找時均能聯(lián)系到該企業(yè)并配合，一般能索取到帶有該企業(yè)公章的微生物限度檢查方法適用性資料。有種情況是企業(yè)委托第三方實驗室完成，公章僅是委托單位的情況，而無本生產(chǎn)企業(yè)公章。還有一種情況是委托生產(chǎn)，應(yīng)注意資料提供的聯(lián)系方式是委托方還是受托方，并核實資料上的試驗單位。

3.2 溝通的必要性

實驗室間的差異：從企業(yè)或企業(yè)委托單位實驗室轉(zhuǎn)移至第三方實驗室時，應(yīng)避免方法轉(zhuǎn)移[8]時出現(xiàn)誤差。如所用陽性對照菌株與第三方實驗室存在亞型差異[9]，造成陽性對照未檢出（這種情況也應(yīng)重視）。企業(yè)考察方法適用性時，應(yīng)注意微生物限度檢查的影響因素[10-11]，或試劑、培養(yǎng)基性質(zhì)差異、培養(yǎng)條件、使用耗材不同造成的影響。

藥材產(chǎn)地改變造成方法偏差：如生產(chǎn)工藝未改變，但藥材產(chǎn)地來源發(fā)生改變，企業(yè)忽略了藥材理化特性或生物活性差異，未重新進(jìn)行方法驗證，造成陽性對照未檢出，與第三方實驗室結(jié)果形成差異。也應(yīng)考慮有抑菌作用的藥物在不同企業(yè)的不同驗證方法對結(jié)果的影響。

3.3 建議

資料中問題處理意見：針對“問題資料”情況，每版藥典發(fā)布執(zhí)行前，相關(guān)方法會發(fā)生重大變化。有關(guān)部門在宣傳期應(yīng)加大宣傳和培訓(xùn)力度，讓藥品檢驗人員理解并掌握新方法，避免理解偏差。同時，提高檢驗人員素質(zhì)和制藥人員職業(yè)道德。即將出版發(fā)行的2020年版《中國藥典》中藥材微生物限度驗證方法會發(fā)生很大變化，各個生產(chǎn)企業(yè)或藥品檢驗機(jī)構(gòu)應(yīng)時刻關(guān)注動態(tài)，以便在執(zhí)行新版方法時快速適應(yīng)，避免理解錯誤。針對“制藥企業(yè)問題”情況，執(zhí)法部門應(yīng)加大監(jiān)管力度，一方面提高制藥人員的職業(yè)素質(zhì)，以公眾用藥安全有效為著力點，切實保證藥品質(zhì)量，另一方面應(yīng)意識到微生物限度檢查方法的重要性[12]。

規(guī)范統(tǒng)一資料編寫格式[13]：按照制劑的處方、主要藥材來源、制劑用途、工藝進(jìn)行分類，固定各類資料編排格式，有試驗材料信息、試驗內(nèi)容，有相應(yīng)結(jié)論和判定標(biāo)準(zhǔn)。便于查閱和提煉信息。

及時匯總，及時更新：國家藥典委員會可將各地方法收集匯總成冊，或由各地省食品藥品檢驗研究機(jī)構(gòu)收集各地產(chǎn)品微生物限度方法并匯總成冊，發(fā)布給各地食品藥品檢驗機(jī)構(gòu)，便于查閱?；蛩幤繁O(jiān)督管理部門組織設(shè)立網(wǎng)站，全國藥品生產(chǎn)企業(yè)把每個品種方法適用性資料上傳到指定網(wǎng)站（同時注意方法更新），便于食品藥品檢驗機(jī)構(gòu)查閱或藥品生產(chǎn)企業(yè)相互借鑒[14]。