基于中醫(yī)病機“瘀毒互結(jié)”致病理論的腫瘤“瘀毒同治”特色理論及抗腫瘤創(chuàng)新藥物研究

浙江中醫(yī)藥大學 杭州 310053

惡性腫瘤是嚴重危害人民健康的重大疾病，中醫(yī)藥在惡性腫瘤防治中具有獨特優(yōu)勢，與放、化療聯(lián)用具有增效減毒作用。筆者所領(lǐng)銜的科研團隊，長期從事中醫(yī)藥抗腫瘤理論及基礎(chǔ)研究。在二十余年的臨床觀察中，筆者團隊發(fā)現(xiàn)中醫(yī)藥在防治腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移及改善患者癥狀、提高生活質(zhì)量、延長生存期等方面具有明顯優(yōu)勢?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，筆者團隊對腫瘤病因病機及中醫(yī)藥治法治則進行了系統(tǒng)研究，并從臨床常用抗腫瘤中藥中篩選了清熱解毒中藥藤梨根和活血化瘀中藥丹參，開展深入的抗腫瘤作用及機制等研究。上述研究先后獲得了國家自然基金面上項目（3項：獼猴桃多糖通過抑制NF-κB通路干預(yù)胃癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機制研究-81273904，丹參二萜醌活血祛瘀抗肺癌作用及機制研究-81573962，丹參酮協(xié)同三氧化二砷瘀毒同治調(diào)控巨噬細胞極化改善肝癌炎癥微環(huán)境的機制研究-81874455）、浙江省重大科技專項計劃(三氧化二砷注射液聯(lián)合丹參酮膠囊治療氣滯血瘀型肝癌的研究-2012C13017-1）、浙江省重點研發(fā)計劃（中藥創(chuàng)新藥物研究-丹參二萜醌抗肺癌臨床前研究，2019C03072）、高等學校博士學科點專項科研基金（Jak-STAT3通路在三氧化二砷聯(lián)合隱丹參酮協(xié)同抗肝癌中的作用機制研究-20123322110001）、浙江省自然科學基金項目（獼猴桃多糖對胃癌EGFR/MAPK/ERK通道的調(diào)控機制研究-Y2100827）等10余項國家、省部級項目的資助，研究經(jīng)費達600余萬元，研究成果先后獲得浙江省科學技術(shù)進步獎一等獎（中醫(yī)腫瘤瘀毒互結(jié)致病理論研究和應(yīng)用）、高等學校科學研究優(yōu)秀成果獎科技進步二等獎（中醫(yī)“瘀久蘊毒”所致惡性腫瘤精準干預(yù)策略的構(gòu)建與應(yīng)用）、浙江省人民政府科學技術(shù)進步三等獎（藤蟾方抗腫瘤作用的實驗研究）、中華中醫(yī)藥學會科學技術(shù)獎學術(shù)著作優(yōu)秀獎（中醫(yī)病因探要）、浙江省人民政府科學技術(shù)三等獎（中醫(yī)病因古今演變的研究）等省部級獎項6項，獲授權(quán)國家發(fā)明專利1項。

1 藤梨根抗胃癌作用研究

藤梨根（獼猴桃根）為臨床常用清熱解毒中藥，性平，味咸酸、澀，性涼，無毒，具有清熱解毒、利尿止血功效，臨床常用于胃癌、食管癌、腸癌等消化道腫瘤的治療[1]。在筆者的家鄉(xiāng)浦江，老百姓們常自挖藤梨根煮水喝用于胃癌治療，療效明顯，由此引起了筆者的好奇和關(guān)注，即藤梨根抗胃癌作用到底如何？其物質(zhì)基礎(chǔ)是什么？抗胃癌的作用機制又是什么？帶著這些問題，筆者率領(lǐng)團隊對現(xiàn)有國內(nèi)應(yīng)用藤梨根進行抗腫瘤治療的臨床及基礎(chǔ)研究進行了梳理，發(fā)現(xiàn)藤梨根抗腫瘤作用與抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、增強腫瘤患者細胞免疫等相關(guān)[2-3]，但其確切作用機制尚未清楚闡明。進一步深入胃癌發(fā)病機制分析發(fā)現(xiàn)，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4-5]，EMT以上皮細胞向間質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化為主要特征，在惡性腫瘤EMT過程中，上皮細胞之間連接復合體被破壞并失去其頂端-基底細胞極性，同時基質(zhì)金屬蛋白酶降解基底膜導致上皮細胞失去基底膜連接，進一步轉(zhuǎn)化為具有原位侵襲、遠處轉(zhuǎn)移能力的間質(zhì)表型細胞。胃癌這種復發(fā)和轉(zhuǎn)移與中醫(yī)痰飲的致病特點十分相似[6]。根據(jù)胃癌這一發(fā)病特征結(jié)合藤梨根水煎液服用特點，筆者團隊以胃癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化為切入點，分離制備了藤梨根多糖部位，開展了藤梨根多糖抗胃癌作用及機制研究，并申請獲得了2012年國家自然科學基金面上項目資助。

研究證實，藤梨根多糖體內(nèi)外均具有抗胃癌作用，能提高荷瘤小鼠免疫功能，下調(diào)PCNA、p53表達[7]；能抑制人胃癌SGC-7901細胞增殖，激活p38途徑及caspase-9、PARP凋亡途徑，促進腫瘤細胞凋亡[8]；能下調(diào)胃癌 MFC細胞Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xl蛋白，上調(diào)Bax、Bak蛋白表達，誘導腫瘤細胞凋亡，能延長荷瘤小鼠生命，對胃癌細胞轉(zhuǎn)移和分化具有抑制作用[9]。在此基礎(chǔ)上，進一步應(yīng)用Transwell、激光共聚焦、免疫印跡法、ELISA、PCR等方法技術(shù)，通過細胞模型和裸鼠穩(wěn)轉(zhuǎn)luciferase基因的BGC823-luc胃癌原位移植瘤模型，開展藤梨根多糖抗胃癌轉(zhuǎn)移的有效性及抗EMT和胃癌轉(zhuǎn)移的作用機制，結(jié)果表明，在體外藤梨根多糖能夠抑制胃癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移，該作用與調(diào)節(jié)EGF誘導的BGC-823細胞骨架蛋白F-actin和Vinculin表達，抑制胃癌細胞骨架形態(tài)改變，下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2、黏附因子ICAM2、VCAM1、N-Cadherin及EMT相關(guān)Snail等mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平，抑制NF-κB p65通路活化有關(guān)。在體內(nèi)，藤梨根多糖能顯著降低人胃癌原位移植瘤裸鼠血清TNF-α等炎癥因子水平，縮小瘤體積，下調(diào)瘤組織MMPs、血管粘附因子及Snail、NF-κB等核轉(zhuǎn)錄因子的表達，抑制胃癌生長及侵襲轉(zhuǎn)移。上述結(jié)果提示，藤梨根多糖可多方位，多層次地抑制胃癌生長侵襲轉(zhuǎn)移，體現(xiàn)了中醫(yī)藥特色。

2 丹參活性部位抗肺癌作用及其創(chuàng)新藥物研究

肺癌又稱原發(fā)性支氣管肺癌（bronchogenic carcinoma），是指起源于支氣管粘膜、腺體或肺泡上皮的肺部惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率位居惡性腫瘤之首[10]。目前肺癌的治療方法，主要以外科手術(shù)治療為主，再根據(jù)病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等酌加放射治療、化學治療和分子靶向治療等綜合治療?；熓峭砥诜伟┲委煹闹饕侄危浏熜Ь哂芯窒扌?，且毒副反應(yīng)較多，患者難以長期堅持[11]。分子靶向藥物價格昂貴，不可避免發(fā)生耐藥復發(fā)，且延長患者總生存時間效果有限。因此，肺癌仍缺乏有效的治療手段，尋求新的治療方法來提高肺癌患者的生存率和生活質(zhì)量是當前臨床科研工作亟待解決的重要問題。根據(jù)這一需求，筆者萌生了從中藥中篩選抗肺癌藥物的念頭。查閱文獻發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤與中醫(yī)所述之“積聚”“癥瘕”較為類似，中醫(yī)理論認為“久病多瘀”“百病皆瘀”“瘀阻氣血”，腫瘤的產(chǎn)生與瘀血關(guān)系密切；瘀血是導致惡性腫瘤產(chǎn)生的重要因素。近年來，許多醫(yī)家在運用瘀血理論指導肺癌防治方面上取得了一定進展，提出了“肺病多瘀”[12]的病機理論以及“治肺當活血”[13]治療肺癌等疾病的治療大法。近年研究表明，瘀血存在并貫穿于腫瘤的整個病理過程，惡性腫瘤患者臨床多表現(xiàn)出一些血瘀的證候，尤其是肺癌患者容易合并血液高凝狀態(tài)[14]，根據(jù)“有是癥，用是藥”的原則，采用活血化瘀之法可取得較好的療效[15]。丹參是活血化瘀類中藥的代表性藥物，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于抗腫瘤的治療，筆者的團隊前期分離制備了丹參脂溶性成分-丹參二萜醌部位[16]，并在抗腫瘤藥物篩選中發(fā)現(xiàn)，丹參二萜醌在體外對肺癌細胞有良好的抑制作用。在此基礎(chǔ)上，筆者團隊通過細胞及肺癌移植瘤模型深入開展了丹參二萜醌抗肺癌作用及機制研究，并申請獲得了2015年國家自然科學基金面上項目資助。

研究結(jié)果表明，在體外，丹參二萜醌（DT）能濃度依賴地抑制人肺腺癌PC9細胞增值，促進腫瘤細胞凋亡，該作用與PC9細胞線粒體膜電位，上調(diào)細胞內(nèi)ROS含量，上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）凋亡通路IRE1α、BIP、Caspase12、TRAF2 等蛋白表達[17]和 PERK、EIF2 a蛋白磷酸化水平[18]有關(guān)。對肺癌移植瘤裸鼠的作用研究結(jié)果顯示，在體內(nèi)DT能顯著抑制PC9肺癌移植瘤的生長，改作用與降低荷瘤模型動物血清TNF-a、IL-6水平、抑制腫瘤組織c-JUN和COX-2蛋白表達、改善腫瘤炎癥微環(huán)境[19]，改善腫瘤微循環(huán)障礙程度，活化ERS凋亡途徑（ERS/IRE1α和PERK-EIF2a），介導腫瘤細胞凋亡有關(guān)。上述研究結(jié)果明確了丹參二萜醌對肺癌的拮抗作用。在此基礎(chǔ)上，筆者團隊申請獲得了浙江省重點研發(fā)計劃資助（財政經(jīng)費250萬元），以期通過系統(tǒng)的丹參二萜醌抗肺癌臨床前研究，包括藥效、藥效學、安全藥理學及毒理學研究，獲得一個安全有效、具有中醫(yī)藥特色的抗肺癌5類中藥新藥。

3 三氧化二砷（As2O3）聯(lián)用丹參酮“瘀毒同治”抗肝癌作用研究

原發(fā)性肝癌（肝癌）主要包括肝細胞癌、肝內(nèi)膽管細胞癌和肝細胞癌-肝內(nèi)膽管細胞癌混合型等不同病理類型。肝癌的發(fā)病率和死亡率分別位于惡性腫瘤的第四和第三位，已是中國當前面臨的極為嚴峻的公共健康問題。大多數(shù)肝癌患者在確診時已屬晚期，已錯過手術(shù)機會?；熓侵型砥诟伟┗颊咧委煹闹饕侄?，氟尿嘧啶、順鉑等傳統(tǒng)化療藥物療效欠佳、毒副反應(yīng)重，分子靶向藥物價格昂貴，且易發(fā)生耐藥，延長患者總生存時間效果有限。因此，迫切需要新的治療方案，在控制腫瘤生長轉(zhuǎn)移的同時，提高中晚期肝癌患者的生存率和生活質(zhì)量。

肝癌屬中醫(yī)學“癥瘕”“鼓脹”“肝積”“脅痛”范疇，氣機紊亂、臟腑失調(diào)、氣滯血瘀、瘀久生毒、瘀毒互結(jié)是肝癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵病機[20]。而針對瘀毒互結(jié)致腫瘤發(fā)生發(fā)展的病機，中醫(yī)治療肝癌的基本大法是活血化瘀、以毒攻毒，瘀毒同治。即通過活血化瘀，改善機體或臟腑瘀血狀態(tài)，使氣血運行流暢；通過以毒攻毒，消除體內(nèi)毒邪，從而有效阻斷腫瘤的發(fā)生發(fā)展。從腫瘤的特有惡性屬性及其微環(huán)境的特異性講，腫瘤及其微環(huán)境的特性是一種特殊的、異質(zhì)的“毒”[21]。因此，活血祛瘀，以毒攻毒，瘀毒同治，破解瘀毒互結(jié)，有效控制癌毒的進一步發(fā)展及其對機體的危害，實現(xiàn)“祛邪則正安”。根據(jù)上述理論，筆者率領(lǐng)團隊對歷代醫(yī)家腫瘤病機認識進行梳理，發(fā)現(xiàn)肝癌患者氣滯血瘀型最為常見，臨床常用以毒攻毒、活血化瘀兼以扶正等多種中藥配伍應(yīng)用抗肝癌。結(jié)合現(xiàn)代臨床，筆者團隊創(chuàng)新性地提出中醫(yī)腫瘤瘀毒互結(jié)的相關(guān)理論，認為因瘀致毒、因毒致變、瘀毒互結(jié)是中醫(yī)腫瘤的關(guān)鍵病機之一，并首次提出消滯化瘀、以毒攻毒，瘀毒同治的腫瘤治則，并選用毒攻毒代表中藥-三氧化二砷（As2O3）與活血化瘀代表中藥丹參活性成分-丹參酮聯(lián)用開展“瘀毒同治”抗肝癌作用及機制研究，申請獲得浙江省浙江省重大科技專項重大社會發(fā)展項目和2018年國家自然科學基金面上項目資助。

筆者團隊開展了As2O3注射液聯(lián)合丹參酮膠囊抗肝癌體內(nèi)外藥效學研究[22-23]，證明As2O3注射液聯(lián)合丹參酮膠囊在體內(nèi)外均具有協(xié)同抗肝癌作用，體內(nèi)尚具有增效減毒作用，明確了協(xié)同抗肝癌分的子作用機制，為兩者聯(lián)用抗肝癌最佳配伍劑量的確定提供了基礎(chǔ)。明確了As2O3注射液和丹參酮膠囊聯(lián)合應(yīng)用的急性毒性和長期毒性反應(yīng)情況，獲得了丹參酮膠囊和As2O3聯(lián)合應(yīng)用的LD50值，明確了兩者聯(lián)用可能出現(xiàn)的主要急性和長期毒性表現(xiàn)，為臨床試驗需重點監(jiān)測的指標提供了參考，同時也為臨床研究和安全用藥提供了實驗數(shù)據(jù)。初步臨床研究明確了As2O3注射液和丹參酮膠囊聯(lián)合應(yīng)用治療中晚期原發(fā)性肝癌的臨床療效和安全性，現(xiàn)有病例觀察已初步顯示出一定的協(xié)同抗肝癌作用。

毒瘀互結(jié)是原發(fā)性肝細胞癌的基本病機，中晚期肝癌患者尤為明顯。臨床常用以毒攻毒、活血化瘀兼以扶正等多種中藥配伍應(yīng)用抗肝癌，從而產(chǎn)生相須、相使的臨床療效。筆者團隊發(fā)現(xiàn)As2O3注射液和丹參酮膠囊聯(lián)合應(yīng)用可協(xié)同抑制肝癌細胞增殖和裸鼠移植瘤生成，對正常肝細胞無毒性，并通過深入研究進一步明確了丹參酮發(fā)揮增效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及多途徑、多靶點誘導肝癌細胞凋亡的分子機制，迄今國內(nèi)外尚無相關(guān)研究報道。同時通過As2O3注射液和丹參酮膠囊聯(lián)合應(yīng)用抗肝癌藥效學、一般藥理學、臨床療效及安全性評價等研究工作，系統(tǒng)闡述兩者聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生以毒攻毒、化瘀消滯兼以扶正之協(xié)同抗肝癌效應(yīng)的科學內(nèi)涵，為設(shè)計合理的中晚期肝癌聯(lián)合治療方案提供了科學依據(jù)。

該研究成果立足于中醫(yī)基礎(chǔ)理論，著眼于臨床應(yīng)用推廣，創(chuàng)新性提出“氣滯必然導致血瘀，因瘀致毒，因毒致變，瘀毒互結(jié)為腫瘤的共性病機”的理論，構(gòu)建“活血化瘀、以毒攻毒”的“瘀毒同治”治則治法，首創(chuàng)中藥砷注射液聯(lián)合丹參酮膠囊抗腫瘤的干預(yù)策略，對“瘀毒同治”理論加以臨床及實驗驗證，“瘀毒互結(jié)”病機理論和“瘀毒同治”治則治法理論在省內(nèi)5家三級甲等醫(yī)院推廣應(yīng)用，有效提高了腫瘤患者的生存率和生存質(zhì)量，同時揭示了中醫(yī)藥干預(yù)腫瘤瘀毒互結(jié)證的現(xiàn)代科學內(nèi)涵，提高了“瘀毒同治”理論指導下的臨床治療有效率，優(yōu)化了腫瘤瘀毒互結(jié)致病為基礎(chǔ)的中醫(yī)藥辨證論治方案，顯示了中醫(yī)藥抗腫瘤的特色和優(yōu)勢。同時該項成果也受到了張伯禮院士、李大鵬院士、國家中醫(yī)藥管理局科技司原司長曹洪欣教授、北京大學腫瘤醫(yī)院呂有勇教授、國醫(yī)大師葛琳儀教授、安徽中醫(yī)藥大學原校長王鍵教授及美國國家環(huán)境衛(wèi)生科學研究所著名砷專家托馬斯教授、加拿大癌癥研究中心國際著名癌癥研究專家魏因費爾德教授等國內(nèi)外專家的一致好評，獲浙江省科技進步一等獎1項、教育部科學技術(shù)進步二等獎1項。

4 結(jié)語

中醫(yī)藥是中華民族之瑰寶，中藥具有扶正祛邪，平衡陰陽，提高機體免疫力等作用及明顯降低放化療反應(yīng)，促進手術(shù)恢復，減少復發(fā)轉(zhuǎn)移，改善腫瘤患者生活質(zhì)量，延長腫瘤患者生存期等獨特的優(yōu)勢和特色，在中醫(yī)藥理論指導下可以全程參與腫瘤的治療，其在腫瘤治療中的應(yīng)用日益廣泛，大有作為。中藥是“健康中國”“自主創(chuàng)新藥物研究”與“中藥現(xiàn)代化與國際化研究”等國家發(fā)展戰(zhàn)略的重要支撐點和突破口，在中醫(yī)藥理論指導下，筆者團隊通過細心觀察，認真總結(jié)，潛心研究，最大限度地用現(xiàn)代科學技術(shù)揭示中藥抗腫瘤作用原理，有望實現(xiàn)重大突破，推動中醫(yī)藥向國際化發(fā)展。