溶血對化學發(fā)光微粒子免疫法檢測胰島素與C肽結(jié)果的影響

錢穎 董學君

糖尿病是因胰島素分泌和（或）作用缺陷引起的以高血糖為主要特征的一種全身性代謝性疾病。長期高血糖可導(dǎo)致多臟器損害或衰竭。胰島素與C肽釋放試驗、口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）在糖尿病診斷分型、胰島素抵抗、低血糖評估及β細胞功能評估中起著重要作用［1-2］。釋放試驗與OGTT常同時進行，在相應(yīng)的5個時間點各抽一次血，然后根據(jù)五次結(jié)果綜合分析。任何時間點的結(jié)果均應(yīng)準確無誤，錯誤結(jié)果會影響對胰島素、C肽是否出現(xiàn)峰值以及出現(xiàn)時間的判斷。準確的實驗室檢測結(jié)果是保證臨床診療工作的重要條件，日常工作中，眾多因素會影響檢測結(jié)果的可靠性，比較常見的因素是溶血。溶血會使血清或血漿呈現(xiàn)紅色。當血漿或血清游離血紅蛋白濃度＞0.3g/L（18.8μmoL/L）時，視覺可檢出粉紅色變化，即判斷為溶血［3］。溶血干擾生化項目檢測已有多篇文獻報道，本文主要分析溶血對化學發(fā)光微粒子免疫法檢測胰島素和C肽結(jié)果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2018年3-4月行胰島素、C肽釋放試驗的30例患者，其中男3例，女3例；年齡35～80歲，平均55.5歲。

1.2 試劑與儀器 美國Abbott公司ARCHITECT i2000化學發(fā)光免疫儀，胰島素與C肽檢測試劑為雅培公司配套試劑盒；胰島素采用一步法免疫測定，C肽采用兩步法免疫測定。真空采血管、一次性采血針由浙江康是醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)。離心機由安徽中科中佳科學儀器有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法 清晨采集每位患者空腹靜脈血1支，該時間點作為0h。飲入250ml含75g無水葡萄糖，之后0.5h、1h、2h、3h，各時間點分別采血1支。每支標本血量均約5ml。采血管于室溫靜止放置15min，待血液完全凝固后，3500r/min離心5min。離心后血清呈淡黃色，無肉眼可見溶血、黃疸及脂濁。每位患者五支血集齊后同時上機檢測。標本檢測后馬上用吸管吹打攪拌紅細胞20次，人為溶血。3500r/min離心5min，肉眼可見溶血，血清呈淡紅色。溶血后血清中血紅蛋白濃度＜5g/L。立即上機檢測。30例標本溶血前后，均按照標準操作規(guī)程檢測胰島素與C肽，記錄結(jié)果。檢測時儀器運行正常，室內(nèi)質(zhì)量控制在控，環(huán)境濕度、溫度適宜。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS l7.0統(tǒng)計軟件。經(jīng)正態(tài)分布檢驗，胰島素與C肽檢測結(jié)果均呈偏態(tài)分布，結(jié)果用中位數(shù)（四分位數(shù)）［M（P25～P75）］表示；組間比較用Wilcoxon符號秩和檢驗；率的比較采用χ2檢驗。所有檢驗均選用雙側(cè)檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。按以下公式評價溶血對檢測結(jié)果的影響：｜F｜=（X0-X）/X0×100%。式中：｜F｜為溶血引起的改變；X0為溶血前血清待測物濃度；X為溶血血清待測物濃度。若｜F｜＞10%，表示存在明顯的溶血干擾［4］。

2 結(jié)果

標本溶血可降低血清胰島素和C肽的檢測結(jié)果。本資料結(jié)果顯示，30例標本（100%）溶血后血清胰島素水平均低于溶血前（下降幅度為1.1%～45.4%），23例標本（76.7%）溶血后血清C肽水平低于溶血前（下降幅度為0.3%～12.8%）。其中15例標本（50%）胰島素的降低幅度＞10%，1例標本（3.3%）C肽的降低幅度＞10%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。30例標本血清胰島素的檢測濃度為76.65（47.30～409.60）pmol/L，溶血后胰島素的檢測濃度為72.85（42.075～269.175）pmol/L，差異有統(tǒng)計學意義（Z=-4.783，P＜0.01）。30例標本血清C肽的檢測濃度為908.5（585.25～2374.25）pmol/L，溶血后C肽的檢測濃度為885.5（591.75～2378.25）pmol/L，差異有統(tǒng)計學意義（Z=-2.952，P=0.003）

3 討論

胰島素是一種多肽類激素，由α、β兩條肽鏈構(gòu)成，兩條肽鏈之間由兩個二硫鍵連接。胰島素在胰島β細胞功能評估中起著重要作用。C肽是由31個氨基酸組成的單鏈多肽，在胰島素前體分子（即胰島素原）中連接胰島素的α、β鏈。胰島素前體可分解產(chǎn)生相等摩爾量的胰島素和C肽，經(jīng)胰島β細胞分泌顆粒分泌后進入血液循環(huán)［5］。檢測C肽同樣可評估胰島β細胞活性［6］。胰島素主要（約40%～50%）經(jīng)肝臟滅活，其半衰期約為5min。C肽不經(jīng)肝臟攝取而經(jīng)腎臟清除，較胰島素有更長的半衰期（＞30min），且波動幅度更小；同時，C肽不受外源性胰島素和胰島素自身抗體的干擾。因此在某些情況下C肽檢測比胰島素檢測更具有優(yōu)勢。

在胰島素C肽釋放試驗日常檢測工作中常發(fā)現(xiàn)標本溶血的情況。關(guān)于溶血對胰島素和C肽的影響，雅培配套試劑說明書提示，不能使用溶血標本檢測胰島素，但當純化血紅蛋白含量達5g/L時不會對檢測產(chǎn)生干擾；不能使用嚴重溶血（＞5g/L）的標本檢測C肽。

多篇文獻報道，溶血可以導(dǎo)致血清胰島素檢測水平偏低［7-8］。然而溶血對C肽的影響，結(jié)果并不一致。本資料結(jié)果顯示，溶血組胰島素濃度低于非溶血組，溶血組C肽濃度低于非溶血組；溶血使化學發(fā)光微粒子免疫法檢測的胰島素與C肽結(jié)果均降低。研究報道紅細胞中含有胰島素降解酶（IDE）［9］，胰島素降低的原因可能是，紅細胞膜破裂時胰島素降解酶被釋放入血清，特異高效地分解胰島素。胰島素的檢測濃度隨著溶血程度增加而降低［4］。溶血對C肽的影響程度各實驗室報道不同，這可能與檢測方法、儀器、試劑以及標本的溶血程度不同有關(guān)。

合格的標本是保障實驗室獲得及時、正確、有效檢測結(jié)果的重要條件。送檢標本不合格的原因較多，其中溶血非常多見，溶血標本比例占所有常規(guī)樣本的3.3%，占所有不合格標本的40%～70%［10］。溶血嚴重影響分析前質(zhì)量控制，作者進行標本采集、處理、運送等培訓，建立了完整規(guī)范的標本檢測前處理流程，提高標本合格率，同時嚴格執(zhí)行不合格標本退回制度。但是實際工作中常出現(xiàn)患者靜脈條件差（如嬰幼兒、留置針）、多次靜脈穿刺（胰島素、C肽釋放試驗）等導(dǎo)致的標本溶血。此類情況患者因采血困難常拒絕重采，即使重新采集也較難獲得滿意標本；另外釋放試驗對采血時間有要求，發(fā)現(xiàn)溶血時通常已來不及重新采集。這些情況需要正確分析溶血對檢測結(jié)果的影響。

單個分析30例樣本，肉眼可見溶血即能降低胰島素與C肽的檢測濃度，50%溶血標本的胰島素濃度改變＞10%，3.3%溶血標本C肽的降低幅度＞10%。溶血對胰島素檢測結(jié)果的影響更加顯著，溶血標本胰島素檢測結(jié)果可能會影響醫(yī)生對患者病情的正確判斷。鑒于溶血對C肽影響較小，當標本溶血并無法重新采血時，需對檢測報告?zhèn)渥⒄f明溶血，同時可以適當結(jié)合C肽與胰島素檢測結(jié)果進行綜合分析。

目前溶血影響胰島素濃度的主要原因在于紅細胞內(nèi)胰島素降解酶的存在，為了避免胰島素降解酶對胰島素檢測結(jié)果的影響，可以嘗試在真空采血管中加入胰島素酶抑制劑，其有效性待后續(xù)研究證明。