紫外分光光度法在保健食品檢測中的應(yīng)用探析

摘 要：實(shí)驗(yàn)?zāi)康模耗壳笆忻嫔细鸶＝∑贩N類多樣，質(zhì)量也是良莠不齊。為了保證較高的質(zhì)量要求，本文采用紫外分光光度法，選取市面上出售的17種含有葛根的保健品，對(duì)其中總黃酮含量進(jìn)行高標(biāo)準(zhǔn)、高精度的檢測。實(shí)驗(yàn)方法：通過紫外分光光度法，參照葛根活性成分葛根素（即葛根黃酮），對(duì)樣品中的黃酮含量進(jìn)行測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：從樣品檢測能夠看出，保健葛根食品中的總黃酮含量不盡相同，甚至有些含量為0。實(shí)驗(yàn)結(jié)論：通過紫外分光光度法對(duì)保健食品進(jìn)行檢測，能夠?yàn)楦鸶傸S酮在樣品中的含量檢測提供有力的參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：紫外分光光度法；葛根；總黃酮；檢測

中圖分類號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1004-7344（2018）24-0347-02

引 言

葛根屬于豆科植物的一種，具有生津止渴、通筋活絡(luò)、解酒、解毒的功效，其中含有多種黃酮類成分，主要包括大豆苷、大豆素、葛根素等，通常應(yīng)用到具有護(hù)肝、解酒功效的保健食品當(dāng)中。在本次實(shí)驗(yàn)中，選擇市面上出售的17種葛根保健食品，在劑型上包括膠囊、口服液、片等多種類型，采用紫外分光光度法對(duì)其中的總黃酮量進(jìn)行檢測，并且為總黃酮量的控制提供良好有效的方式。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

在本次實(shí)驗(yàn)中，使用的實(shí)驗(yàn)儀器為日本島津制造的UV-160A紫外分光度儀；德國制造的BP211D天平；日本制造的AEL-200天平；實(shí)驗(yàn)材料為中國生物制品檢定所的葛根素對(duì)照品，含量大約為96.0%；利安隆化學(xué)公司的乙醇；自制的蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與過程

2.1 總黃酮量測定法

以葛根作為對(duì)照品，采用紫外分光光度法，分別選擇葛根素對(duì)照液與葛根對(duì)照藥材，利用30%的乙醇提取液，根據(jù)藥典中規(guī)定的方式進(jìn)行全波掃描，大約在200～400nm之間，結(jié)果表明，在250nm的位置，二者的吸收力最大，因此將測定波長定為250nm。

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建

利用精密儀器稱取20.8mg的葛根素對(duì)照品，將其放置到100mL的玻璃瓶當(dāng)中，再將純度為30%的乙醇溶液溶解后，稀釋到一定的刻度，均勻的搖晃使其均勻，當(dāng)作對(duì)照品儲(chǔ)備液。從儲(chǔ)備液中分別吸取出0.5、1、2、4、6、7ml的液體，將其輸送到容量為100mL的玻璃瓶當(dāng)中，然后將30%純度的乙醇溶液加入其中，當(dāng)其定容到一定的數(shù)值時(shí)，搖晃均勻。再選擇純度為30%的乙醇也當(dāng)作空白液，在波長為250nm的前提下對(duì)吸光能力進(jìn)行測量，分別針對(duì)吸光度A與溶液濃度C進(jìn)行線性回歸，獲得標(biāo)準(zhǔn)的曲線方程式：

A=0.0769×C+0.0008

2.1.2 精密度檢驗(yàn)

首先，需要對(duì)樣品溶液進(jìn)行選取，對(duì)于口服液劑型的保健食品來說，選取1mL的樣品放置到容量為100mL的玻璃瓶當(dāng)中，將30%純度的乙醇溶液填入進(jìn)去，均勻的搖晃后獲得相應(yīng)的樣品溶液。

對(duì)于固體保健食品來說，在樣品的選取上，選取樣品中大約0.5g的粉末，經(jīng)過精密儀器進(jìn)行性稱定后，將其放置到容量為100mL的玻璃瓶當(dāng)中，將濃度為30%的乙醇溶液加入其中，溶解和稀釋到一定刻度時(shí)均勻的搖晃，然后進(jìn)行超聲處理，功率和頻率均為30kHz，時(shí)間保持在30min左右，將殘?jiān)^濾出去，經(jīng)過精密儀器測量后，量取續(xù)濾液1mL，將其放置在10mL的玻璃瓶當(dāng)中，再將濃度為30%的乙醇溶液加入后，搖勻即可獲得。

對(duì)于半固體樣品來說，使用精密儀器選取大約0.5g的樣品，將其放置在容量為100mL的玻璃瓶當(dāng)中，將30%濃度的乙醇溶液加入，直至符合刻度要求，在超聲環(huán)境下處理30min，過濾后量取1mL的濾液，將其放入容量為50mL的玻璃瓶當(dāng)中，再加入30%的乙醇進(jìn)行稀釋，直至達(dá)到相應(yīng)刻度，搖勻后即可獲得[1]。

2.2 儀器精密度的檢驗(yàn)

通過上述檢測方式，選擇絞股藍(lán)澤瀉茶樣品溶液，經(jīng)過反復(fù)6次檢測以后，得出該樣品的數(shù)量、濃度、吸光度與RSD的數(shù)值，具體檢測結(jié)果如表1所示。

2.2.1 方法精密度測量

選取20片葛根保健食品樣品，細(xì)致的研磨以后，將其劃分為6份，每份選取大約0.5g左右，用精密儀器稱量后，放置到容量為100mL的玻璃瓶當(dāng)中，按照上文中所闡述的實(shí)驗(yàn)方法，獲取到6份樣品溶液，并且分別對(duì)這些樣品的吸光度進(jìn)行檢測，最終的RSD數(shù)值為0.77%，具體的檢測結(jié)果如表2所示。

2.2.2 穩(wěn)定性考察

選取固體葛根保健食品，經(jīng)過精密儀器稱定后，選擇大約0.5g的樣品，按照上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行處理，并且每隔2～4h對(duì)該溶液情況進(jìn)行查看，通過紫外分光法對(duì)溶液的吸光度進(jìn)行測量，波長定為250nm，最終的測量結(jié)果顯示，RSD的數(shù)值為0.82%，且樣品溶液當(dāng)中，葛根保健食品內(nèi)部的總黃酮在30h的實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定性十分良好，具體的穩(wěn)定性測量結(jié)果如表3所示。

2.2.3 加樣回收率檢驗(yàn)

選取大約30g的葛根素對(duì)照品，經(jīng)過精密儀器的稱定以后，將其放入到50mL的量瓶當(dāng)中，選取濃度為30%的乙醇溶液進(jìn)行溶解后，使其滿足一定刻度，搖晃均勻后即可獲得，溶液的濃度保持在0.6mg/mL以內(nèi)。然后，選取絞股藍(lán)澤瀉茶，將其劃分為6份以后，經(jīng)過精密儀器每份選擇大約0.25g，再吸取大約5mL的對(duì)照品溶液，同時(shí)放置到容量為100mL的玻璃瓶當(dāng)中，將30%純度的乙醇溶液加入其中后，定容到一定的刻度值，按照上述方法對(duì)溶液進(jìn)行處理后，獲得最終溶液，分析對(duì)溶液的吸光度進(jìn)行計(jì)算，從而得到平均回收率為99.91%，RSD的數(shù)值為1.902%，具體如表4所示。通過本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，采用該實(shí)驗(yàn)方式具有較強(qiáng)的準(zhǔn)確度和精密度，具有較大的可行性[2]。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 線性范圍與檢測限

分別選取葛根保健食品樣品溶液的1、2、3、4、5mL放入到10mL的比色管當(dāng)中，將30%濃度的乙醇溶液稀釋到一定刻度以后，搖晃均勻，在波長為250nm的情況下進(jìn)行比色，并且對(duì)吸光度A與葛根樣品溶液進(jìn)行線性回歸，進(jìn)而得到回歸方程如下，相關(guān)系數(shù)為0.9997：

Y=0.1314X-0.00689，

由此可見，在規(guī)定的檢驗(yàn)范圍內(nèi)，采用紫外分光光度技術(shù)對(duì)葛根保健食品中的總黃酮進(jìn)行檢測呈現(xiàn)出十分顯著的線性關(guān)系。

另外，采用葛根樣品溶液的50，對(duì)檢測限進(jìn)行測定，通過7次反復(fù)實(shí)驗(yàn)后，將所得數(shù)值按照F=t（0.01，6）×SD的方式進(jìn)行計(jì)算，式中t代表的是概率水平，而自由度為6的單側(cè)t值，即3.143；SD代表的是批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)誤差；采用上述方式能夠?qū)ψ贤夥止庀卤＝∈称分械目傸S酮含量檢測限進(jìn)行計(jì)算，最終計(jì)算結(jié)果為3。

3.1.2 精密度與回收率

按照上文闡述的實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)相同的葛根食品樣品進(jìn)行反復(fù)7次的實(shí)驗(yàn)，根據(jù)對(duì)計(jì)算結(jié)果偏差可知，RSD為4.11%，尚未超出5%。在精密度方面能夠符合設(shè)計(jì)要求，這將意味著采用紫外分光技術(shù)對(duì)保健食品進(jìn)行檢測時(shí)，總黃酮具有良好的重現(xiàn)性。另外，選取其他5份實(shí)驗(yàn)樣品，每份樣品在預(yù)留本底以后，將葛根樣品溶液加入其中，在對(duì)每份溶液進(jìn)行分別測定，從測定結(jié)果能夠看出，回收率均能夠保持在82～86%之間，與以往采用的苯去雜質(zhì)相比來看，具有十分明顯的回收效果。

3.2 討 論

（1）葛根總黃酮屬于葛根中的主要成分，以葛根素作為主要對(duì)照品，采用紫外分光技術(shù)進(jìn)行檢測，能夠使檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密性等得到充分保障，與國家藥典對(duì)此方面規(guī)定的技術(shù)要求相符合。在使用紫外分光法進(jìn)行葛根總黃酮檢驗(yàn)之后，發(fā)現(xiàn)不存在統(tǒng)一的含量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，在檢出量方面也相差較大，由此可見市面上所出售的產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，需要國家相關(guān)部門給予高度重視。

（2）保健品中含黃酮類成分的產(chǎn)品類型多樣，在配方組成方面也十分復(fù)雜，本文采用紫外分光技術(shù)對(duì)樣品中的總黃酮含量進(jìn)行測量，顯色十分靈敏且穩(wěn)定。通過對(duì)多種樣品進(jìn)行檢測后看出，本文采用的方式能夠節(jié)省大量的反應(yīng)時(shí)間，具有良好的重現(xiàn)性，投入成本較低，能夠?yàn)楸＝∈称分锌傸S酮含量與質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)判定提供簡單、有效的方式[3]。

（3）在本次實(shí)驗(yàn)研究中，采用乙醇作為溶劑，葛根樣品溶液在放置的過程中可能會(huì)產(chǎn)生分解，因此實(shí)施穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，選取固體葛根保健食品，經(jīng)過精密儀器稱定后，選擇大約0.5g的樣品，每隔2～4h對(duì)該溶液情況進(jìn)行查看，通過紫外分光法對(duì)溶液的吸光度進(jìn)行測量，波長定為250nm，最終的測量結(jié)果顯示，RSD的數(shù)值為0.82%，且樣品溶液當(dāng)中，葛根保健食品內(nèi)部的總黃酮在30h的實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定性十分良好，由此可見，具有良好的穩(wěn)定性。

4 結(jié) 論

綜上所述，葛根總黃酮屬于葛根中的主要成分，本次實(shí)驗(yàn)采用紫外分光技術(shù)對(duì)葛根保健食品中的總黃酮量進(jìn)行檢測，具有較強(qiáng)的便利性、準(zhǔn)確性與靈敏性，達(dá)到了高標(biāo)準(zhǔn)、高精度的檢測目標(biāo)，能夠?yàn)楹鸶＝∑返馁|(zhì)量控制提供有效的方法。

參考文獻(xiàn)

[1]甘賓賓，蔡 卓，黎少豪.紫外分光光度法測定卵磷脂保健食品中磷脂酰膽堿含量[J].食品工業(yè)科技，2017，28（10）：219～220.

[2]劉延敏，潘海宇，吳振剛.紫外分光光度法檢測保健食品中大豆異黃酮的含量[J].醫(yī)學(xué)爭鳴，2016，27（2）：185～187.

[3]蔡 曉，李 宏.紫外分光光度法測定保健食品中總蒽醌的含量[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2017，19（1）：47～48.

收稿日期：2018-7-18

作者簡介：朱明杰（1985-），男，本科，主要從事食品第三方檢測實(shí)驗(yàn)室工作。