參蒜混合液對(duì)高脂膳食大鼠炎癥因子的影響

姚 璐,杜瑞雪,2,杜 鵑,周 月,李善姬

（1.吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院,吉林 吉林 132013;2.延邊大學(xué)公共衛(wèi)生系,吉林 延吉 133002;3.吉林省吉林市龍?zhí)秴^(qū)疾病預(yù)防控制中心,吉林 吉林 132021）

肥胖已然成為世界性的健康難題,不僅如此,肥胖還是誘發(fā)糖尿病、心血管疾病和癌癥的重要因素[1]。研究發(fā)現(xiàn),肥胖導(dǎo)致脂肪細(xì)胞因缺氧而發(fā)生慢性低度炎癥反應(yīng),這種炎癥反應(yīng)會(huì)誘發(fā)機(jī)體的肝臟、脂肪和肌肉等多個(gè)組織器官對(duì)胰島素產(chǎn)生耐抵抗,并最終導(dǎo)致2型糖尿病的發(fā)生[3]。增加機(jī)體內(nèi)抗炎因子的數(shù)量或是降低促炎因子的表達(dá)也許可以作為預(yù)防肥胖和2型糖尿病等代謝性疾病的一種有效手段[4]。最新的文獻(xiàn)報(bào)道證實(shí),雙醋瑞因、辛伐他汀等藥物通過降低炎癥因子來治療2型糖尿病[5-6]。由于化學(xué)藥物具有細(xì)胞毒性,會(huì)誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生不良反應(yīng),介于這些缺陷的存在,使得化學(xué)藥物用于預(yù)防2型糖尿病具有局限性。因此,研發(fā)能夠預(yù)防和改善慢性低度炎癥反應(yīng)的保健食品對(duì)預(yù)防肥胖相關(guān)2型糖尿病就有著非常重要的意義。本試驗(yàn)通過建立高脂膳食肥胖大鼠動(dòng)物模型,研究不同配比的黑參黑蒜混合液對(duì)高脂膳食引起的慢性

低度炎癥反應(yīng)具有預(yù)防作用,為預(yù)防肥胖及其相關(guān)并發(fā)癥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60只健康成年Wistar雌鼠,體重250 g左右。由吉林醫(yī)藥學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。飼養(yǎng)于22℃ ±2℃,濕度50% ±5%。

1.2 試驗(yàn)飼料高脂肪飼料配方 蛋黃粉10%、豬油10%、膽固醇1%、牛膽鹽0.2%、基礎(chǔ)飼料78.8%。

1.3 動(dòng)物分組 將60只雌鼠在試驗(yàn)環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后,按體重隨機(jī)分為5組,即空白對(duì)照組、高脂模型組、高脂A給藥組、高脂B給藥組和高脂C給藥組,連續(xù)喂養(yǎng)30 d。空白對(duì)照組給予普通飼料,其他各組給予高脂飼料?？瞻讓?duì)照組和高脂模型組每天灌胃生理鹽水,高脂給藥組給予不同濃度參蒜混合液灌胃,A給藥組:黑參∶黑蒜=4∶1;B給藥組:黑參∶黑蒜=1∶1;C給藥組:黑參∶黑蒜=1∶4。連續(xù)灌胃30 d后,大鼠禁食不禁水12 h,取腹主動(dòng)脈血分離血清,采用 ELISA法測(cè)定（hs-CRP）、白細(xì)胞介素 -6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）含量。

1.4 黑參黑蒜提取液的制備 將700 g新鮮大蒜洗凈后放入發(fā)酵罐中蒸30 h,制得黑蒜。向發(fā)酵罐中加入蒸餾水煮18 h,制作成2 200 m黑蒜提取液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至375 mL。取五年參500 g洗凈后放入發(fā)酵罐中蒸30 h,制得黑參。向發(fā)酵罐中加入蒸餾水煮18 h,得黑參液2 700 mL,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至400 mL。分別用高壓蒸汽滅菌鍋消毒滅菌,冷藏備用。

1.5 試劑膽固醇、牛膽鹽、蛋黃粉（鄭州龍晨食品添加劑有限公司） IL-6酶聯(lián)免疫試劑盒;TNF-α酶聯(lián)免疫試劑盒;hs-CRP酶聯(lián)免疫試劑盒,購(gòu)自上海嵐派生物科技有限公司;按照試劑盒檢測(cè)方法測(cè)定,發(fā)酵罐（韓國(guó)）。

1.6 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用Excel和SPSS20.0軟件。各組平均值比較用單因素方差分析,各組之間的兩兩比較用最小顯著差異法（LSD）檢測(cè)差異顯著性。顯著性水準(zhǔn)為P＜0.05。所有數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示。

2 結(jié)果

2.1 高脂膳食肥胖大鼠模型的構(gòu)建 試驗(yàn)結(jié)果表明,與普通對(duì)照組相比,高脂膳食會(huì)引起大鼠的體重明顯升高,并導(dǎo)致血清中hs-CRP、IL-6和TNF-α等促炎因子的表達(dá)水平明顯增加,試驗(yàn)說明給予大鼠高脂膳食構(gòu)建高脂膳食肥胖大鼠模型成功,并且高脂膳食肥胖大鼠伴隨有慢性低度炎癥反應(yīng)。結(jié)果見表1。

2.2 參蒜混合液對(duì)高脂膳食肥胖大鼠體重和炎癥因子的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明,與高脂模型組相比,3個(gè)給藥組對(duì)高脂膳食大鼠的體重均沒有明顯作用。此外,A和B給藥組對(duì)高脂膳食肥胖大鼠血清中IL-6、TNF-α和hs-CRP的含量變化沒有明顯作用。但是,C給藥組中大鼠血清中IL-6、TNF-α和hs-CRP的含量均顯著降低（P＜0.05）。結(jié)果見表2。

表1 高脂膳食對(duì)大鼠體重和炎癥因子的影響（n=12,ˉx±s）

表2 參蒜混合液對(duì)高脂大鼠體重和炎癥因子的影響（n=12,ˉx±s）

3 討論

國(guó)內(nèi)外的諸多學(xué)者都認(rèn)為促炎因子介導(dǎo)的慢性低度免疫炎癥是導(dǎo)致2型糖尿病發(fā)生的重要原因,即2型糖尿病（T2DM）的“炎癥學(xué)說”[14]。Leinonen[15]等發(fā)現(xiàn),T2DM患者血清中IL-6和CRP等促炎介質(zhì)比非糖尿病患者要高,T2DM患者處于慢性低度炎癥反應(yīng)狀態(tài)。流行病學(xué)的研究也證實(shí),胰島素抵抗的發(fā)生伴隨有慢性低度的炎癥反應(yīng),并且促炎因子可以通過多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路直接或間接的引起胰島素抵抗[16]。研究表明,肥胖會(huì)引起脂肪細(xì)胞肥大,脂肪組織既是儲(chǔ)存能量的器官,也是機(jī)體內(nèi)分泌系統(tǒng)的重要組成部分,肥胖會(huì)引起脂肪組織發(fā)生巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),從而引發(fā)慢性低度的炎癥反應(yīng),并引起胰島素耐受[7]。為了研究參蒜混合液對(duì)慢性低度炎癥反應(yīng)的抑制作用,我們通過成功構(gòu)建高脂膳食肥胖大鼠炎癥反應(yīng)模型,采用不同的參蒜配比,檢測(cè)參蒜混合液對(duì)高脂膳食肥胖大鼠炎癥反應(yīng)的抑制作用。

黑參是鮮人參經(jīng)反復(fù)蒸制干燥而成的炮制品,炮制過程中的加熱處理能夠提高人參的自由基清除能力,因此黑參相比于白參、紅參具有更好的抗氧化作用[10-13]。藥理作用與生曬參藥理作用相似。Kim等研究發(fā)現(xiàn),黑參提取物有比較多的生物活性,與傳統(tǒng)的白參和紅參相比,黑參更具抗氧化活性[18]。黑蒜是由新鮮生蒜在高溫高濕的環(huán)境下,不添加任何添加劑自然發(fā)酵而成的。在保留生大蒜原有成分的基礎(chǔ)上,黑蒜的抗氧化、抗酸化、降血脂作用較白蒜更強(qiáng)[7-9][19]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),3個(gè)參蒜混合液給藥組與高脂膳食模型組相比,A和B給藥組抑制炎癥反應(yīng)的效果并不顯著,而C給藥組的作用效果最為顯著,表明不同配比的參蒜混合液會(huì)影響其抑制炎癥反應(yīng)的作用強(qiáng)弱,暗示C給藥組中的參蒜混合液配比是最適宜的配比。試驗(yàn)結(jié)果暗示,參蒜混合液可以通過抑制炎癥反應(yīng)預(yù)防肥胖引起的胰島素耐受等并發(fā)癥的發(fā)生。本試驗(yàn)為參蒜混合液開發(fā)成為功能性食品用以預(yù)防肥胖引起的慢性低度炎癥反應(yīng)所導(dǎo)致的胰島素耐受等慢性疾病的發(fā)生提供了理論依據(jù)。