育齡婦女常見耳聾基因篩查及出生缺陷預(yù)防回顧性分析

劉玲 余麗華 丁紅珂 張彥 曾玉坤

(廣東省婦幼保健院 醫(yī)學(xué)遺傳中心，廣東 廣州 511400)

耳聾是影響人類健康和生活的常見疾病，據(jù)統(tǒng)計60%的耳聾患者為遺傳因素導(dǎo)致的，另40%為環(huán)境因素所致。遺傳性耳聾根據(jù)其表型又可分為綜合征型耳聾(syndromic hearing loss，SHL，約占 30%)和非綜合征型耳聾(nonsyndromic hearing loss，NSHL，約占 70%)。在遺傳性非綜合征型耳聾中，80%為常染色體隱性遺傳病，因此，在正常聽力人群中存在大量隱形基因攜帶者。據(jù)全國性聾病分子流行病學(xué)調(diào)查顯示，GJB2、SLC26A4、線粒體基因(A1555G和C1494T突變)是導(dǎo)致中國大部分遺傳性耳聾發(fā)生的3個最常見的致病基因[1]。在孕期進行耳聾基因檢測和胎兒的產(chǎn)前診斷即可有效防止聾兒出生，并對耳聾高危夫婦再生育健康子女進行遺傳指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 基本資料 收集2014年1月至2016年11月間，在廣東省婦幼保健醫(yī)院就診正常聽力孕前/產(chǎn)前婦女13 452例，年齡15～45歲，受檢對象主要來自廣州及其周邊地區(qū)(包括24例外籍人士)。在對患者進行耳聾知識宣傳后，自愿進行晶芯TM9項遺傳性耳聾基因檢測試劑盒進行突變熱點的初篩。

1.2 方法 對于女方篩查結(jié)果為攜帶者的家庭進行電話隨訪及門診咨詢建議配偶進行進一步基因檢測。配偶的檢測方法為芯片篩查結(jié)合相應(yīng)基因序列分析，而由于GJB2基因序列短及突變率高，所有基因序列分析均進行GJB2及相應(yīng)基因檢測。

對于夫妻雙方同為相同致病基因攜帶者的家庭，在夫妻雙方充分知情并同意情況下進行產(chǎn)前診斷，經(jīng)超聲介導(dǎo)行絨毛穿刺術(shù)或羊膜腔穿刺術(shù)取得胎兒樣本，進行產(chǎn)前基因檢測。

2 結(jié)果

2.1 在13 452例正常聽力孕前/產(chǎn)前婦女，檢出至少含有1個位點突變的攜帶者451例，總體檢出率3.35%。在耳聾突變基因攜帶者中，以GJB2基因的235delC和SLC26A4基因IVS7-2A>G雜合突變?yōu)橹?，分別為205例和132例；線粒體突變27例(詳見表1)。

表1 13 452例育齡婦女耳聾篩查情況表

注：1雙重雜合突變類型為GJB2基因235 delC雜合、SLC26A4基因IVS7-2 A>G雜合

2.2 在232攜帶者配偶人群中，電話隨訪自訴大部分表現(xiàn)為聽力正常(含1例基因型為GJB2基因c.109G>A純合患者)，有2例患者自訴為弱聽，基因型分別為GJB2基因c.109G>A純合、GJB2基因c.235delC復(fù)合c.109G>A。在232例攜帶者配偶檢測結(jié)果中，以GJB2基因的c.109G>A、c.235delC、和SLC26A4基因IVS7-2A>G突變?yōu)橹?詳見表2)。

表2 232例攜帶者配偶耳聾基因突變情況表

注：1.含純合2例，其余計算不含109G>A合并其他突變4例；2含復(fù)合雜合109G>A1例；3.含雙重雜合109G>A1例；4含雙重雜合109G>A突變1例

2.3 耳聾基因攜帶孕婦的回訪情況

2.3.1 產(chǎn)前遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷情況 截止到2016年11月，通過電話隨訪及門診回訪232對夫妻進行了進一步的遺傳咨詢并對丈夫相關(guān)基因進行了檢測。其中同基因攜帶為33例，其中2例暫未懷孕，18對夫妻經(jīng)知情同意選擇進一步產(chǎn)前診斷，其余拒絕產(chǎn)前診斷。

2.3.2 胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果及新生兒聽力隨訪 18例胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果中，3例胎兒遺傳父母雙方變異(均為c.235delC復(fù)合c.109G>A)，攜帶者10例，5例未遺傳父母雙方變異。術(shù)后隨訪，1例患者因胎兒復(fù)合雜合變異選擇終止妊娠。產(chǎn)后電話隨訪夫婦雙方均為攜帶者的30例新生兒聽力情況，自訴新生兒聽力篩查均為正常，其中包含2例 產(chǎn)前診斷為GJB2基因c.235delC復(fù)合c.109G>A患者。

3 討論

東亞地區(qū)人群以GJB2基因235delC和SLC26A4基因IVS7-2A>G、2168A>G等多見[2,3]。在本次報道中，GJB2 也是檢出率最高的突變基因，僅235delC雜合突變占所有檢出突變的，SLC26A4基因突變次之。這一結(jié)果與國內(nèi)以往的報道相近，也與本院前期報道的一致[4]。GJB2基因和SLC26A4基因突變有明顯的地區(qū)差異性，GJB2 35delG突變在高加索人群常見，在歐洲和美國，攜帶率在2%～4%[5、6]。本次報道的2例GJB2 35delG均為外籍人士。值得一提的是，芯片檢測發(fā)現(xiàn)1例35delG假陽性，該受檢者籍貫為廣東，經(jīng)測序驗證位為c.33G>C，推測原因為鄰近多態(tài)位點影響。GJB2 35delG在中國人群中突變率低，對此對于35delG芯片陽性建議行測序驗證。

22例攜帶GJB3基因c.538 C>T受檢者電話隨訪中，針對聽力情況特別是尖叫等高頻區(qū)域是否受損進行問詢，所有攜帶c.538的受檢者均表示聽力正常但未行耳鼻喉科專業(yè)檢查，其中包含1例c.538 C>T純合。GJB3基因c.538 C>T早期研究認(rèn)為是常染色體顯性遺傳模式的高頻率聽力損失[7]，但后期對于GJB3基因變異是否致病尚存在爭議[8]，結(jié)合本次報道臨床對于GJB3基因c.538C>T的咨詢建議應(yīng)謹(jǐn)慎。

在mtDNA突變攜帶者電話隨訪中，大部分受檢者表示無耳聾家族史且對是否曾接觸過氨基糖苷類抗生素不詳。目前，國內(nèi)一方面存在抗生素的濫用現(xiàn)象，而另一方面對孕婦的孕期安全用藥又日益重視，對此我們工作中不僅需要對mtDNA突變攜帶者加強本人及母系親屬的用藥宣教，更需要對正常聽力人群加強藥物性耳聾的宣教。

另外在本次調(diào)查中，在232例攜帶者的男性配偶中c.109G>A的攜帶率為12.5%，其中包含3例c.109G>A純合或者復(fù)合其他已知致病突變。c.109G>A的致病性在部分文獻報道中是存在爭議性的[9、10]，主要是c.109G>A純合或復(fù)合其他已知致病突變在臨床表現(xiàn)多樣化。目前認(rèn)為c.109G>A與輕度或中度聽力障礙相關(guān)，Snoeckx等[3]研究了10個復(fù)合c.109G>A基因型組合中發(fā)現(xiàn)9個與輕度聽力障礙相關(guān)，該突變將導(dǎo)致不能誘導(dǎo)同型間隙連接通道的形成。在本次報道中，3例成年男性受檢者中有2例自訴表現(xiàn)為弱聽，與輕型耳聾表現(xiàn)一致，但是缺乏更多臨床數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。另新生兒中2例基因型為復(fù)合c.109G>A而聽篩正常，這類病人后期的臨床表現(xiàn)尚未知，病人不僅需要定期監(jiān)測聽力情況，也需要我們后期的追蹤隨訪。對于此我們尚需更多的數(shù)據(jù)及研究來拓展c.109G>A的致病性認(rèn)識。針對這類病人的臨床咨詢，首先我們應(yīng)充分告知它的臨床表型多樣化，讓病人知情自行選擇進行是否進行產(chǎn)前診斷及胎兒去留。

4 結(jié)論

耳聾篩查在正常聽力育齡婦女中可有效檢出大量潛在的耳聾攜帶者，可以有效地避免耳聾患兒的出生，對于預(yù)防藥物性耳聾也是很有效的檢出手段。隨著耳聾出生缺陷預(yù)防工程在臨床的鋪展，一些檢測或者遺傳咨詢過程中遇到的問題也在增多，如檢測假陽性、表型-基因型差異性問題，對于檢測人員及遺傳咨詢醫(yī)生都需要不斷完善自我。