投喂頻率對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚生長和血漿抗應(yīng)激酶活力的影響

仇登高，溫 憑，林 琪，朱志煌，吳水清， 劉銀華，陳新明，邱峰巖

(1.福建省水產(chǎn)研究所，福建 廈門 361013； 2.福建省海洋生物增養(yǎng)殖與高值化利用重點實驗室，福建 廈門 361013； 3.福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建 福州 350002； 4.廈門小嶝水產(chǎn)科技有限公司，福建 廈門 361104)

珍珠龍膽石斑魚(Epinephelusfuscoguttatus♀ ×E.lanceolatus♂)，又稱珍珠斑、龍虎斑，是將雄性鞍帶石斑魚精子與雌性棕點石斑魚卵子人工授精而培育得到的雜交新品種石斑魚[1-3]。珍珠龍膽石斑魚的肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美、膠原蛋白含量豐富，加之其抗逆性較強(qiáng)和生長速度快等優(yōu)勢，深受廣大消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶的青睞，是一種值得推廣養(yǎng)殖的石斑魚品種[4]。近年來，工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖作為現(xiàn)代漁業(yè)的一種新型養(yǎng)殖模式，因其具有環(huán)境友好、資源節(jié)約、設(shè)施設(shè)備先進(jìn)和產(chǎn)品質(zhì)量可追溯等特點，被公認(rèn)為是現(xiàn)代海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要發(fā)展方向[5]。福建、廣東、海南、山東、天津等沿海地區(qū)采取循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚，從中獲得的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益均十分顯著。

隨著珍珠龍膽石斑魚循環(huán)水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速推進(jìn)，對飼料的科學(xué)性投喂水平也日益提高，筆者在生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，投喂頻次過多或過少，不僅會導(dǎo)致珍珠龍膽石斑規(guī)格大小參差不齊，還會影響生物濾池的處理效率，進(jìn)而影響?zhàn)B殖產(chǎn)量。因此，開展循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)下不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長及抗應(yīng)激酶活力的研究十分必要。目前，國內(nèi)外關(guān)于魚類投喂頻率方面的研究已有一些報道，如紀(jì)文秀等[6]研究了投喂頻率對網(wǎng)箱養(yǎng)殖點帶石斑魚(E.malabaricus)生長、食物利用及飼料氮、磷排放的影響；王成桂等[7]比較了不同投喂頻率對龍虎斑(Epinepheluslanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)幼魚生長和餌料利用的影響；García-Mesa等[8]分析了不同投喂頻率對大西洋白姑魚(Argyrosomusregius)生產(chǎn)性能和生理指標(biāo)影響的變化規(guī)律；Tian等[9]探討了團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)幼魚的最佳投喂頻率。然而，有關(guān)循環(huán)水養(yǎng)殖模式下投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長和血漿抗應(yīng)激酶活力影響的研究未見報道。鑒于此，本文以珍珠龍膽石斑魚為研究對象，探討了不同投喂頻率對工廠化循環(huán)水系統(tǒng)中珍珠龍膽石斑魚生長和血漿抗應(yīng)激酶活力的影響，篩選出工廠化循環(huán)水系統(tǒng)養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的最佳投喂頻率，為工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的飼料投喂管理提供理論依據(jù)和生產(chǎn)指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

珍珠龍膽石斑魚由福建省水產(chǎn)研究所小嶝島實驗基地提供，選擇初始體質(zhì)量(297.79±59.94)g、全長(25.36±1.82)cm、體長(22.45±1.78)cm的珍珠龍膽石斑魚作為實驗魚。

試驗選擇健馬牌石斑魚顆粒飼料，質(zhì)量指標(biāo)：灰分≤16.0%，水分≤12.0%，粗蛋白質(zhì)≥48.0%，賴氨酸≥2.1%，脂肪≥7.0%，纖維≤6.0%。

養(yǎng)殖系統(tǒng)：采用1套工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖生產(chǎn)系統(tǒng)，系統(tǒng)由17個養(yǎng)殖池、固液分離裝置、物理過濾池、蛋白質(zhì)分離器、生物濾池、紫外線消毒裝置等單元組成(圖1)。試驗選用17個池中的6個池，每個池為八邊形切角的磚混結(jié)構(gòu)，尺寸為5 500 mm×5 500 mm，切角1 000 mm×1 000 mm，坡度為1.5%，池高1 350 mm，有效水深為1 200 mm，單個養(yǎng)殖池面積為28.25 m2。每個魚池有效養(yǎng)殖水體為33.9 m3，進(jìn)水通過2根直徑75 mm 的帶孔PVC管道沿魚池壁側(cè)向射流，同時池底中心設(shè)置一個飛碟狀的污物捕獲器、魚池外安裝一個漩渦分離器，形成固液分離裝置，以便排出匯集在養(yǎng)殖池中心處的殘餌和糞便。

1.2 試驗設(shè)計與管理

1.3 樣品采集

試驗結(jié)束時，實驗魚饑餓36 h，每個重復(fù)處理組隨機(jī)取30尾測量魚體質(zhì)量、全長和體長，統(tǒng)計實驗魚存活數(shù)量以及攝食量，計算各試驗組生長和攝食指標(biāo)。同時，每個處理組隨機(jī)取3尾空腹魚進(jìn)行尾椎靜脈抽取血液，血液樣品先分別注入置于碎冰中的含肝素鈉抗凝的5 mL離心管內(nèi)，接著以6 000 rpm離心10 min，然后取血漿放置于-70℃下保存，待測過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和堿性磷酸酶(AKP)活力。

1.4 血漿抗應(yīng)激酶活力的測定

血漿抗應(yīng)激酶包括過氧化氫酶、超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活性，均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。

1.5 測定指標(biāo)計算公式

成活率(Survival rate，SR)：SR(%)=100×Nf/Ni

肥滿度(Condition factor，CF)：CF=BW/BL3

日增質(zhì)量(Daily weight gain， DWG)：DWG(g/d)=(BW2-BW1)/(T2-T1)

相對增質(zhì)量(Relative weight gain，RWG)：RWG(%)=100×BW2/BW1

體質(zhì)量變異系數(shù)(Coefficient of size variation，SV)：SV=100×SD/X

特定生長率(Specific growth rate，SGR)：SGR(%/d)=100×(lnBW2-lnBW1)/(T2-T1)

日攝食率(Food intake，F(xiàn)I)：FI(%/d)=100×F/[0.5×(BW2+BW1)×(T2-T1)]

飼料轉(zhuǎn)化效率(Food conversion efficiency， FCE)：FCE(%)=100×(BW2-BW1)/F

飼料系數(shù)(Food conversion ratio，F(xiàn)CR)：FCR=F/(BW2-BW1)

式中，Ni、Nf分別為初始魚尾數(shù)和最終魚尾數(shù)；BW為每尾魚的體質(zhì)量(g)；BL為每尾魚體長(cm)；BW1、BW2分別為試驗初始體質(zhì)量和最終體質(zhì)量(g)；T1、T2分別為BW1、BW2時所對應(yīng)時間；SD為標(biāo)準(zhǔn)差；X為處理組魚的平均體質(zhì)量(g)；F為總攝食量(g)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用EXCEL 2010進(jìn)行常規(guī)數(shù)值計算后，使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差(0ne-way ANOVA)分析，組間差異采用LSD法進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，顯著性水平設(shè)為P<0.05。

2 結(jié)果分析

2.1 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚成活率的影響

由表1可知，在本試驗設(shè)置的投喂頻率下珍珠龍膽石斑魚的成活率均在96%以上，A1組(1次/2d)顯著高于A2組(1次/d)和A3組(2次/d)(P<0.05)，A2組、A3組間差異不顯著(P>0.05)，平均成活率由高至低順序為A1(1次/2d)>A3(2次/d)>A2(1次/d)。

2.2 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長的影響

在不同投喂頻率梯度下，試驗結(jié)束時工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚生長性能的統(tǒng)計分析結(jié)果見表1。在循環(huán)水養(yǎng)殖模式下，平均特定生長率、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量和肥滿度由高至低的順序均為A3(2次/d)>A2(1次/d)>A1(1次/2d)，平均體質(zhì)量變異系數(shù)由低至高依次為A1(1次/2d)、A2(1次/d)、A3(2次/d)。然而，試驗設(shè)定的投喂頻率A1組(1次/2d)、A2組(1次/d)、A3組(2次/d)對珍珠龍膽石斑魚特定生長率、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量、肥滿度和體質(zhì)量變異系數(shù)的影響均無顯著性差異(P>0.05)。

表1 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長的影響

注：A1、A2、A3分別表示1次/2d、1次/d、2次/d三個不同投喂頻率梯度；表中數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；同一行數(shù)據(jù)上標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)，不相同者表示差異顯著(P<0.05)。下表同此。

Notes： A1，A2，A3was once every two days，one time per day，and two times per day of three varied feeding frequency gradients,respectively. The datas in the table were presented as means±standard deviation. Values with the same superscripts in the same line indicated insignificant difference (P>0.05)，values with different superscripts indicated significant difference (P<0.05). The same as below.

2.3 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚攝食的影響

試驗結(jié)束時，珍珠龍膽石斑魚攝食指標(biāo)的計算結(jié)果如表2所示，從表2可以看出，平均日攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率由高至低依次為A3組(2次/d)、A1(1次/2d)、A2(1次/d)，平均飼料系數(shù)由小至大順序為A1(1次/2d)=A3組(2次/d)0.05)。

表2 投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚攝食指標(biāo)的影響

2.4 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚血漿抗應(yīng)激酶活力的影響

經(jīng)過60 d的生長試驗，不同投喂頻率下循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的堿性磷酸酶、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活力變化見表3。不同投喂頻率試驗組間的珍珠龍膽石斑魚堿性磷酸酶、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活力均無顯著性差異(P>0.05)。

表3 投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚血漿中抗應(yīng)激酶活力的影響

3 討論

3.1 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長性能的影響

紀(jì)文秀等對體質(zhì)量(137.0±1.0)g點帶石斑魚投喂頻率研究結(jié)果表明，各試驗組成活率都在90%以上，不同處理組間成活率差異不顯著[6]。冒樹泉等報道了不同梯度投喂頻率對許氏平鲉(Sebastesschlegeli)幼魚生長性能的影響試驗，指出各處理組許氏平鲉幼魚成活率均為100%[10]。王偉等開展了投喂頻率對花鱸(Lateolabraxmaculatus)幼魚生長性能影響的研究，結(jié)果顯示投喂頻率對花鱸幼魚存活率沒有顯著性影響，平均存活率均在93.33%以上[11]。仇登高等研究了投喂頻率對初始平均體質(zhì)量為858.73 g鞍帶石斑魚生長的影響，結(jié)果表明：不同投喂頻率試驗組對鞍帶石斑魚存活率無顯著性影響，各組存活率均在99.40%～99.80%之間波動[12]。在本試驗條件下，各投喂頻率組珍珠龍膽石斑魚的成活率均在96%以上，1次/2d組投喂頻率顯著高于1次/d組和2次/d組(P<0.05)，平均成活率從高到低順序為1次/2d組>2次/d組>1次/d組。這與對點帶石斑魚[6]、許氏平鲉[10]、非洲鯰魚(Clariasgariepinus)[13]的研究結(jié)果有相似之處，也有一些不同，說明在工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，可以通過采用1次/2d的投喂頻率來提高珍珠龍膽石斑魚養(yǎng)殖成活率。在本試驗的工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖模式下，投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚特定生長率、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量、肥滿度和體質(zhì)量變異系數(shù)等生長指標(biāo)影響差異不顯著(P>0.05)。本試驗結(jié)論與Biswas等對麥鯪(Cirrhinusmrigala)、南亞野鯪(Labeorohita)的研究結(jié)果[14]相似，但與紀(jì)文秀等對網(wǎng)箱養(yǎng)殖點帶石斑魚[6]、董桂芳等對初始平均體質(zhì)量約4.5g斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)[15]、吳耀華等對體質(zhì)量為(84.5±12.9)g龍虎斑[16]的研究結(jié)果不一致，造成這種差異的原因可能與不同養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖品種和規(guī)格大小等因素有關(guān)。

不同投喂頻率對硬骨魚類飼料利用指標(biāo)(如攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率和飼料系數(shù))的影響有所不同。駱季安等研究了飼喂頻率對體質(zhì)量(26.86±1.69)g日本黃姑魚(Nibeajaponica)生長的影響，結(jié)果顯示2次/d組攝食率極顯著大于1次/d組，顯著大于3次/d組、4次/d組，3次/d組、4次/d組均顯著大于1次/d組；2次/d組、3次/d組、4次/d組食物轉(zhuǎn)化率均極顯著大于1次/d組，而2次/d組、3次/d組和4次/d組之間沒有顯著差異[17]。劉偉等探討了投喂頻率對初始體質(zhì)量為(16.13±0.13)g吉富羅非魚(Oreochromisniloticus)生長的影響，認(rèn)為1次/d組、2次/d組和3次/d組的投喂頻率均顯著影響吉富羅非魚飼料效率和攝食率[18]。朱曉芳等研究了投喂頻率對自制小型循環(huán)水系統(tǒng)養(yǎng)殖體質(zhì)量為(35.50±4.58)g珍珠龍膽石斑魚影響的養(yǎng)殖試驗，結(jié)果表明：在0～15 d、16～30 d、31～45 d各養(yǎng)殖階段內(nèi)，隨著投喂頻率的提高，飼料轉(zhuǎn)化效率呈現(xiàn)先顯著上升、接著顯著下降的趨勢[19]。在本試驗中，不同投喂頻率處理組對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚日攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率和飼料系數(shù)均沒有產(chǎn)生顯著的影響(P>0.05)，類似的結(jié)果在麥鯪和南亞野鯪研究[14]中也有發(fā)現(xiàn)，但是本試驗結(jié)論與在花鱸[11]、日本黃姑魚[17]、吉富羅非魚[18]上的研究結(jié)果不一致，這可能與生長的水環(huán)境、實驗魚種類、養(yǎng)殖階段等條件不同有關(guān)。

3.2 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚血漿抗應(yīng)激酶活力的影響

堿性磷酸酶(AKP)是生物機(jī)體代謝過程中重要的調(diào)控金屬酶，能作為反映魚類應(yīng)激、脅迫的指示因子[20-21]。過氧化氫酶(CAT)是催化機(jī)體內(nèi)過氧化氫(H2O2)分解成水(H2O)和氧氣(O2)的重要酶，以保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[22]。超氧化物歧化酶(SOD)為金屬酶家族，是硬骨魚類體內(nèi)重要的抗氧化性酶，可將機(jī)體內(nèi)過多的自由基轉(zhuǎn)化成水分子，從而保護(hù)機(jī)體免受氧化傷害[23]。陳文霞等研究了投喂頻率對凡納濱對蝦免疫酶活力的影響，結(jié)果表明投喂頻率5次/d、6次/d處理組堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活力較2次/d組、3次/d組和4次/d組高[24]。竇艷君等開展了不同投喂頻率對室內(nèi)工廠化車間養(yǎng)殖點帶石斑魚血漿抗氧化指標(biāo)的影響研究，結(jié)果顯示：第28 d時，1次/d、2次/d、3次/d投喂頻率處理組對血漿總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)活力沒有顯著影響；第56 d時，1次/d組血漿T-SOD顯著高于3次/d組，最高值達(dá)到87.38 U/mL，而投喂頻率對血漿CAT活力無顯著影響；第84 d時，2次/d組的血漿T-SOD、CAT均顯著高于1次/d組、3次/d組[25]。在本試驗條件下，不同投喂頻率對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的堿性磷酸酶(AKP)、過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力均沒有產(chǎn)生顯著性差異變化(P>0.05)。本試驗結(jié)論與在流水養(yǎng)殖鞍帶石斑魚[12]上的研究結(jié)果相似，表明不同投喂頻率對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚不會產(chǎn)生應(yīng)激脅迫作用，但是此試驗結(jié)果與在凡納濱對蝦[24]、點帶石斑魚[25]上研究結(jié)論存在一些差異，這可能是由不同的養(yǎng)殖模式、實驗對象和養(yǎng)殖時間等因素引起的。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，不同投喂頻率(1次/d、2次/d、1次/2d)對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的特定生長率、肥滿度、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量、體質(zhì)量變異系數(shù)、日攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率、飼料系數(shù)以及堿性磷酸酶、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶影響均無顯著性差異(P>0.05)，但是投喂頻率1次/2d組的成活率顯著高于1次/d組和2次/d組(P<0.05)，說明在飽食飼喂大規(guī)格珍珠龍膽石斑魚的過程中，可采用1次/2d的投喂頻率來提高工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的成活率。