肺炎支原體感染患兒視黃醇結(jié)合蛋白和T細(xì)胞亞群的變化及意義

梁導(dǎo)艷，郭春艷，封 青，黃曉燕，胡 軍

(陜西省人民醫(yī)院 中心實(shí)驗(yàn)室,陜西 西安710068)

肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae，MP) 即支原體感染引起的肺炎，是幼兒時(shí)期最常見的呼吸道疾病之一，占小兒肺炎的10%-30%[1]。近年來，由于秋冬季霧霾天氣影響，患支原體肺炎的兒童呈上升趨勢(shì)，并且發(fā)病年齡逐漸偏小，以嬰幼兒、學(xué)齡兒為主要發(fā)病群體[2]。MP是社區(qū)獲得性小兒疾病中常見的病原之一，所占的比例有逐年增長的趨勢(shì)[3,4]。大多以支氣管炎、氣管炎、咽炎起病，病程緩慢。主要臨床癥狀有發(fā)熱、陣發(fā)性咳嗽、肺部伴有喘鳴音和濕羅音，肺部見斑點(diǎn)狀陰影[5]。呈持續(xù)性或弛張型發(fā)熱。多以呼吸道感染為主，并伴有多器官損傷等其他癥狀[6]。文獻(xiàn)指出[7]，視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)與肝臟損傷密切相關(guān)，可以反映病情的程度，是目前反映肝功能早期損害的有效指標(biāo)，對(duì)肝臟早期損害的檢查和治療效果的監(jiān)測具有重要意義。外周血T細(xì)胞亞群測定是反映機(jī)體兔疫功能狀態(tài)重要指標(biāo)。本研究探討兒童肺炎支原體感染后RBP及T細(xì)胞亞群的水平變化，進(jìn)一步研究其對(duì)肝功能及免疫功能的影響，給臨床后續(xù)治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究材料

實(shí)驗(yàn)組選取本院2017年10月至2017年12月兒童支原體肺炎急性期患病兒童65例，其中男孩35例，女孩30例，平均年齡4.8歲。支原體肺炎患兒符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》標(biāo)準(zhǔn)[8]。無其他疾病，無其他用藥史，未使用免疫抑制劑，未出現(xiàn)其他合并癥。支原體肺炎IgM陽性，滴度≥1∶80。對(duì)照組選取同期健康兒童40例，男孩22例，女孩18例。平均年齡4.3歲。兩組兒童性別和年齡方面沒有差距，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2研究方法

1.2.1采集樣本 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別采取晨起空腹靜脈血液4 ml，2 ml放置于促凝管中，用于視黃醇結(jié)合蛋白血清檢測。2 ml放置于EDTA-K2抗凝管中,用于流式細(xì)胞儀全血檢測。

1.2.2視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)檢測 儀器為日立7170全自動(dòng)化分析儀，應(yīng)用免疫散射比濁法，試劑和標(biāo)準(zhǔn)品分別由寧波美康和上海北加生化試劑有限公司提供。

1.2.3流式細(xì)胞儀檢測 采用三色熒光標(biāo)記單克隆抗體，異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的抗CD4抗體；藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的抗CD8抗體；多甲藻素葉綠素蛋白(PerCP)標(biāo)記的抗CD3抗體，均來自美國BD公司。三色校準(zhǔn)微球來自美國BD公司。儀器使用流式細(xì)胞儀BD FACSCalibur(美國BD公司)。從抗凝血管中吸取全血50 μl加入到流式細(xì)胞儀專用管中(TruCount管)，再向其中加入熒光素標(biāo)記抗體10 μl混勻，室溫避光孵育20 min，加入溶血素FACSLysing(美國BD公司)2 ml，再次室溫避光孵育15 min，然后放入離心機(jī)300 g，5 min離心，將上清倒入廢液桶中，管中加入0.5 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)混勻，打開流式細(xì)胞儀BD FACSCalibur，用三色熒光微球進(jìn)行校準(zhǔn)，使所有標(biāo)本檢測條件一致。細(xì)胞收集1×104個(gè)/管，采用BD CellQuest軟件進(jìn)行細(xì)胞熒光強(qiáng)度和百分比分析。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。首先選用Levene檢驗(yàn)方差是否齊，然后選用t檢驗(yàn)比較兩組是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1血清視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)檢測結(jié)果RBP觀察組為19.56±9.09，對(duì)照組為47.47±13.65，觀察組明顯低于正常對(duì)照，P<0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2外周血T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果T細(xì)胞亞群檢測中,CD3+、CD3+CD4+百分比和CD4/CD8比值明顯低于對(duì)照組，P<0.01；CD3+CD8+明顯高于對(duì)照組，P<0.01；均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1，圖1、圖2。

表1 兩組血清視黃醇結(jié)合蛋白及全血T細(xì)胞亞群的檢測結(jié)果

注：A組和B組比較，CD3+CD4+明顯降低

注：C組和D組比較，CD3+CD8+明顯升高

3 討論

RBP是由183個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成分子量為21 KD的一種小分子蛋白。pH為4.4-4.8，沉降系數(shù)3 s，半衰期為3-12 h[9]。主要由肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成，小部分由肝外合成，廣泛存在于人體的血液、尿液、腦脊液和其他體液中[10]。主要功能是用來轉(zhuǎn)移肝臟中的視黃醇，是體內(nèi)視黃醇(維生素)的運(yùn)載蛋白，亦可以用于評(píng)判人體營養(yǎng)水平的變化[11]。在體內(nèi)90%RBP與視黃醇結(jié)合，形成視黃醇RBP復(fù)合物，10%為結(jié)合的RBP可以自由從腎小球?yàn)V過而進(jìn)入原尿[12]。RBP能夠特異的結(jié)合和運(yùn)載人體中的視黃醇至周圍靶細(xì)胞組織，從而維持人體內(nèi)的正常生命活動(dòng)需求，是反映肝功能的一項(xiàng)敏感指標(biāo)。由于其半衰期短、分子量小，能夠快速的發(fā)生變化，敏感且有效的反映早期肝功能受損程度，對(duì)肝功能早期影響具有非常重要的指示作用[13]。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道中指出[14]，RBP在肝臟中合成分泌，若肝臟受損，RBP 生成量就會(huì)下降，血液RBP含量會(huì)明顯降低，因此更能準(zhǔn)確反映肝臟功能變化。本研究顯示，兒童肺炎支原體感染時(shí)觀察組較對(duì)照組，血清中的RBP會(huì)明顯降低。即RBP的分泌及合成受到阻礙，表明肝功能受到損傷。因此，兒童感染MP時(shí)，檢測RBP很有必要性，可直觀的反映患兒肝功能是否受損。一旦檢測出RBP降低，很可能肝功能會(huì)受到損傷，應(yīng)及時(shí)做出治療方案，減免肝功能受到進(jìn)一步損傷。

T細(xì)胞亞群是有效維持機(jī)體免疫功能的重要免疫指標(biāo)，CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值是本類免疫狀態(tài)的直觀反應(yīng)指標(biāo)，在免疫反應(yīng)過程中起到誘導(dǎo)、輔助、抑制和毒殺等作用[15]。CD3+是總T細(xì)胞，參與機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答，判斷免疫狀態(tài)低下或過激；CD3+CD4+是T輔助/誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞；CD3+CD8+是T抑制/毒性淋巴細(xì)胞。機(jī)體正常情況下，各種淋巴細(xì)胞亞群(T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞)保持一定的數(shù)量和比例，相互作用，穩(wěn)定調(diào)節(jié)，維持機(jī)體正常的免疫功能[16]。細(xì)胞免疫取決于CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值的調(diào)節(jié)。當(dāng)CD3+、CD3+CD4+、 CD3+CD8+及CD4/CD8比值發(fā)生紊亂時(shí)，則容易導(dǎo)致疾病的發(fā)生[17]。文獻(xiàn)報(bào)道，兒童感染MP時(shí)，CD3+CD4+、 CD3+CD8+T細(xì)胞可使IL-4、IL-6和IL-10細(xì)胞因子的表達(dá)升高?？蛇M(jìn)一步使Th2成為優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，產(chǎn)生更多的細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)。從而使B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生多種抗體，導(dǎo)致免疫功能失調(diào)[18]。還有文獻(xiàn)指出[19，20]，兒童感染MP后，由于體內(nèi)多種器官、組織共同的抗原部分所產(chǎn)生的抗體可與自身抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，引起免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生炎性因子，導(dǎo)致除呼吸系統(tǒng)外的其他多個(gè)系統(tǒng)疾病的產(chǎn)生，導(dǎo)致CD4+降低，CD8+升高，CD4/CD8比值顛倒。免疫功能失調(diào)。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組和對(duì)照組相比，CD3+、CD3+CD4+百分比及CD4/CD8比值均降低，CD3+CD8+百分比升高，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。和上述文獻(xiàn)報(bào)道的均相符。表明，機(jī)體感染MP后淋巴細(xì)胞各項(xiàng)指標(biāo)都存在改變，不同程度的升高或降低，自身免疫功能紊亂。

MP感染嚴(yán)重時(shí)，會(huì)累及多系統(tǒng)及多臟器損傷，合并免疫功能紊亂。本研究中，MP患兒肝功能異常并未出現(xiàn)肝實(shí)質(zhì)性病變，均為可逆性損害，經(jīng)過治療均可恢復(fù)正常。研究發(fā)現(xiàn)，MP患兒肺炎感染的嚴(yán)重程度直接影響免疫功能的程度改變。感染越嚴(yán)重，免疫功能越低下，肝功能恢復(fù)時(shí)間越久。因此，兒童感染MP后，免疫功能的水平可間接的影響肝功能變化。

綜上所述，兒童感染MP后，RBP會(huì)顯著降低，合并T細(xì)胞亞群會(huì)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致早期肝功能受損及免疫功能紊亂。臨床上在發(fā)現(xiàn)MP感染的同時(shí)，應(yīng)聯(lián)合檢測RBP及T細(xì)胞亞群水平變化，積極干預(yù)治療肝損傷及免疫功能紊亂。及早控制病情的發(fā)展，達(dá)到早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早治療的目的。