乳腺癌根治術(shù)患者miRNA-23a表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

周永安,趙德慶

(鄂東醫(yī)療集團(tuán)黃石巿中心醫(yī)院(湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院)，1.乳腺腫瘤外科，2.胸部腫瘤內(nèi)科，湖北 黃石435001)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，乳腺由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成，其原位癌不致命，但若未及時(shí)治療，其易發(fā)生轉(zhuǎn)移而侵襲心、腦、肺等重要器官，危及女性生命健康[1]。目前，外科根治手術(shù)是乳腺癌主要的治療方法，可有效的切除患者的腫瘤組織而抑制癌細(xì)胞擴(kuò)散，但仍有部分患者因病情惡化而出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，因此評估其預(yù)后逐漸受到關(guān)注和重視[2]。近年來，相關(guān)研究顯示，miRNA乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及治療、預(yù)后關(guān)系密切[3]。而miRNA-23a是機(jī)體中常見的miRNA之一，其在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、存活、腫瘤血管生成、入侵和轉(zhuǎn)移中具有重要作用，但關(guān)于其與乳腺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究較少[4]。對此，本研究通過檢測乳腺癌根治術(shù)患者miRNA-23a表達(dá)水平，探討其與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1研究對象選取2013年3月至2016年3月本院收治的乳腺癌根治術(shù)患者160例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后病理學(xué)證實(shí)為乳腺癌，②無其他原發(fā)性惡性腫瘤，③年齡>18歲、無精神病病史，④簽署知情同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠及哺乳特殊人群，②乳腺癌根治術(shù)失敗或未獲得癌癥組織者，③有心、肝、腎等嚴(yán)重性原發(fā)性疾病，④資料均收集不完整；本次研究已經(jīng)我院倫理委員會審批且通過，通過電話、復(fù)診等方式隨訪2年并依據(jù)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況分為復(fù)發(fā)組(n=50例)和未發(fā)組(n=110例)。

1.2方法

1.2.1主要試劑和儀器 miRNA-23a和內(nèi)對照引物、cDNA第1鏈合成試劑盒、miRNA提取分離試劑盒及熒光定量檢測試劑盒均購自北京天根生化科技有限公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Perfect Real time染料法實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒均購自美國Invitrogen有限公司，其余試劑和儀器均購自美國Invitrogen公司，其中各基因引物序列及擴(kuò)增產(chǎn)物長度見表1。

表1 不同基因引物序列及其擴(kuò)增產(chǎn)物長度

1.2.2miRNA-363檢測 從冷藏庫選取病理科提供的乳腺癌組織解凍后，采用液氮研磨法磨成粉末，取3 ml通過miRNA提取分離試劑采用TRIzol一步法提取總RNA、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，將1 μl的cDNA置于10 μl反應(yīng)體系中94℃擴(kuò)增2 min，膠回收法純化 DNA 片段為標(biāo)準(zhǔn)品，通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)法(RT-PCR)[5]檢測miRNA-23a表達(dá)水平，以U6為內(nèi)參物，標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算miRNA-23a相對表達(dá)量(U6校正值)，所有操作均由同一組醫(yī)護(hù)人員在嚴(yán)格依據(jù)試劑盒相關(guān)說明書的規(guī)定下進(jìn)行。

1.2.3觀察指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn) 觀察和比較兩組臨床資料及miRNA-363表達(dá)水平，其中miRNA-363相對表達(dá)量以 U6sn RNA 作為內(nèi)參，以2-△△CT法計(jì)算相對表達(dá)量， △△CT=(CT目的-CT內(nèi)參)實(shí)驗(yàn)-(CT目的-CT內(nèi)參)對照，CT 值為反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)熒光強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)[5]。

2 結(jié)果

2.1患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移關(guān)系的單因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組和未發(fā)組腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)、miRNA-23a表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩組年齡、月經(jīng)狀態(tài)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.2乳腺癌根治術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移獨(dú)立影響因素的Logistic回歸性分析

Logistic回歸性分析顯示，腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR、miRNA-23a表達(dá)水平是患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立影響因素，且在校正腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR等因素后，miRNA-23a表達(dá)水平仍是患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立影響因素(P<0.05)，見表3。

表2 患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移關(guān)系的單因素分析[n(%)]

表3 乳腺癌根治術(shù)患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移獨(dú)立影響因素的Logistic回歸性分析

2.3miRNA-23a表達(dá)水平評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

ROC曲線顯示，miRNA-23a表達(dá)水平以<1.0評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、曲線下面積為92.00%(46/50)、96.36%(106/110)、95.00%(152/160)、0.882，一致性良好(K=0.821，P<0.001)，見圖1。

3 討論

乳腺癌是發(fā)生在女性乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，其病因尚未明確，但在我國的發(fā)病率呈上升及年輕化趨勢，已成為當(dāng)前社會的重大公共衛(wèi)生問題[6,7]。目前，乳腺癌根治術(shù)是乳腺癌有效的治療方法，通過切除腫瘤組織，可有效改善患者病情，其臨床療效已逐漸被認(rèn)可，但因乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性、手術(shù)難以徹底切除所有癌組織、術(shù)后綜合治療技術(shù)等因素影響，部分患者會出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，故如何有效評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是人們關(guān)注的熱點(diǎn)[8,9]。

圖1 miRNA-23a表達(dá)水平評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的ROC曲線

目前，乳腺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的評估主要依靠病理學(xué)分型，其中腫瘤類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR等已被大量研究證實(shí)與患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但其無法反映腫瘤組織基因表達(dá)情況的差異[10,11]。而近年來，隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的迅猛發(fā)展相關(guān)研究顯示，miRNA是一類短序列、非編碼的單鏈小分子RNA，通常由22個(gè)堿基組成，其在乳腺癌、甲狀腺癌等腫瘤中均有異常表達(dá)，提示其對腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要作用，且其對指導(dǎo)臨床治療有著重要作用[12,13]。而有研究表明，miRNA-23a是存在脊椎動物的基因組中的一種抑癌因子，在參與基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)后，具有調(diào)控細(xì)胞增殖、存活等作用，其過表達(dá)可能可抑制腫瘤細(xì)胞的生長并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而起抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲的作用[14,15]。

本研究單因素分析結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)組和未發(fā)組腫瘤類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，此結(jié)果與王偉、Clarice等[16,17]研究基本一致，也說明了腫瘤類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR等乳腺癌根治術(shù)與患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。同時(shí)，本研究中，復(fù)發(fā)組miRNA-23a表達(dá)水平明顯低于未發(fā)組，Logistic回歸性分析顯示，在校正腫瘤類型、直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER和PR等因素后，miRNA-23a表達(dá)水平是患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立影響因素，表明miRNA-23a表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切，其低表達(dá)水平可能提示患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。在術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者中，可能其體內(nèi)殘留乳腺癌細(xì)胞組織或再次惡化的過程中，需維持其異?？焖僭鲋场⑸L及轉(zhuǎn)移等行為[18]，會抑制miRNA-23a表達(dá)水平，使miRNA對靶基因的降解或者抑制其翻譯的負(fù)性調(diào)控能力降低而抑制了其調(diào)控細(xì)胞增殖、存活等作用，導(dǎo)致難以有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。此外，本研究ROC曲線顯示，miRNA-23a表達(dá)水平以<1.0評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、曲線下面積為92.00%、96.36%、95.00%、0.882，一致性良好，則提示檢測其表達(dá)水平能夠作為評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。因此，本研究認(rèn)為乳腺癌根治術(shù)患者應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測miRNA-23a的表達(dá)水平，對miRNA-23a表達(dá)水平<1.0者應(yīng)警惕其存在高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，并應(yīng)及時(shí)加強(qiáng)患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的監(jiān)測檢查，以及時(shí)發(fā)現(xiàn)并作出相應(yīng)有效的處理。

而本研究也存在一定的不足，如者miRNA-23a表達(dá)水平對乳腺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制復(fù)雜，且本次研究納入病例數(shù)較少，不足以代表所有病患情況，但乳腺癌根治術(shù)患者miRNA-23a表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切，其低表達(dá)水平可能提示患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，檢測其表達(dá)水平可作為評估患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)，并推測miRNA-23a可能是防治乳腺癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的靶點(diǎn)，期待臨床更大樣本、更深入的研究。