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      化纖膠囊對(duì)膿毒癥大鼠凝血功能的影響*

      2018-12-25 09:18:50
      中國(guó)中醫(yī)急癥 2018年12期
      關(guān)鍵詞:化纖造模中醫(yī)藥大學(xué)

      王 叢 梁 群

      (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江哈爾濱 150040)

      膿毒癥是感染導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征,其死亡率逐年增加,給患者及家屬帶來極大的痛苦,目前已經(jīng)成為世界矚目的重大疾病,引起國(guó)內(nèi)外的重視[1]。膿毒癥發(fā)病機(jī)制的研究一直是醫(yī)學(xué)界的研究重點(diǎn),國(guó)內(nèi)外專家目前已經(jīng)確定其發(fā)病機(jī)制并不是單一因素引起的,與炎癥、凝血、免疫等多靶點(diǎn)均有關(guān)系[2]。西醫(yī)治療只能從單方面出發(fā)不能實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)治療,中藥復(fù)方制劑可以摒棄西藥單一治療靶點(diǎn)的弊端,從整體觀念出發(fā)實(shí)現(xiàn)多靶點(diǎn)治療。近年來中醫(yī)不再停留于傳統(tǒng)的治療慢性疾病的模式而是更多地采用中西醫(yī)結(jié)合治療急危重病,并且得到國(guó)內(nèi)外專家的認(rèn)可。本文通信作者梁群教授在研究急危重癥疾病領(lǐng)域工作20余年,依據(jù)膿毒癥的病因病機(jī)及多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出益氣活血解毒方化纖膠囊,應(yīng)用于臨床后療效顯著[3-4]。本實(shí)驗(yàn)研究是在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索化纖膠囊影響膿毒癥凝血功能的機(jī)制,為中醫(yī)藥治療膿毒癥提供更有力的支持。現(xiàn)報(bào)告如下。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)別Wister雄性大鼠40只 [許可證號(hào) SCXK(京)2016-0006],體質(zhì)量 180~220 g,提供單位為黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。普通專用飼料喂養(yǎng)于溫度(22±4)℃,相對(duì)濕度40%~70%,自然光線的實(shí)驗(yàn)室,經(jīng)過1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

      1.2 試藥與儀器 1)藥物:化纖膠囊(規(guī)格0.75 g/粒,藥物組成:黃芪 30 g,丹參 15 g,當(dāng)歸 15 g,白術(shù) 15 g,黨參 15 g,川芎 15 g,茯苓 15 g,熟地黃 15 g,甘草10 g。參照中國(guó)藥典(2015版)中藥膠囊劑制作方法,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥廠制備),臨用前將膠囊內(nèi)容物取出研磨成細(xì)粉末,用蒸餾水稀釋至所需濃度,D2=D1×K2/K1×W1/W2,D 為藥物劑量,K 為常數(shù) (大鼠為 9.1人為 1.6),W 為動(dòng)物體 zhiliang1(kg),經(jīng)計(jì)算每毫升藥物含量為化3.5 g(成人2倍)。2)試劑:大鼠抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)ELISA檢測(cè)試劑盒;大鼠血小板活化因子(PAF)ELISA試劑盒(由Abcam公司提供)。3)儀器:離心機(jī)型號(hào)SORVALL ST8/8R廠家:Therm電子稱,哈爾濱量具廠生產(chǎn)。

      1.3 分組與模型制備 Wister雄性大鼠40只按隨機(jī)數(shù)字表法分為:空白組10只、假手術(shù)組10只、模型組20只。模型以10%水合氯醛(0.4 mL/100 g)腹腔麻醉后沿腹部正中線切開約2 cm切口,找到盲腸,避開其系膜血管在盲尾端2 cm處結(jié)扎,然后在結(jié)扎處遠(yuǎn)端用18號(hào)針穿刺盲腸2次,擠出腸內(nèi)容物后將盲腸還納關(guān)腹。術(shù)后大鼠出現(xiàn)豎毛、精神萎靡等癥狀為造模成功。假手術(shù)組:打開腹腔并尋找盲腸,分離其遠(yuǎn)端與大腸的系膜,不施盲腸結(jié)扎術(shù)即關(guān)閉腹腔。造模成功后隨機(jī)分為化纖膠囊組與模型組,每組各10只。

      1.4 干預(yù)方法 化纖膠囊干預(yù)組予化纖膠囊(用蒸餾水稀釋,質(zhì)量濃度為3.5 g/mL),劑量0.5 mL/100 g灌胃給藥,每日2次,間隔至少6 h,模型組與假手術(shù)組分別給予同劑量的0.9%氯化鈉注射液。干預(yù)時(shí)間為3 d。

      1.5 標(biāo)本采集及檢測(cè) 造模后待大鼠麻醉蘇醒后開始進(jìn)行觀察,記為實(shí)驗(yàn)第1天,試驗(yàn)周期為3 d,3 d后腹主動(dòng)脈采血由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科進(jìn)行檢測(cè),AT-Ⅲ、PAF應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)。檢測(cè)方法為在血中加入乙二胺四乙酸,在4℃的環(huán)境中用抗凝管以3000 r/min離心15 min后,在-80℃的冰箱內(nèi)保存上清液。采血1 h內(nèi)進(jìn)行化驗(yàn)。首先將抗凝管中的血液用離心機(jī)離心,然后應(yīng)用ELISA檢測(cè)進(jìn)行化驗(yàn),對(duì)各組大鼠的AT-Ⅲ、PAF進(jìn)行比較。

      1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以(±s)表示,符合正態(tài)分布的采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),不符合的用秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié) 果

      各組造模給藥3 d后AT-Ⅲ、PAF及凝血指標(biāo)比較 見表1??瞻捉M與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說明手術(shù)對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)沒有影響?;w膠囊組、模型組與空白組比較,活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、AT-Ⅲ、PAF、纖維蛋白原(FIB)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明模型組與化纖膠囊組的凝血功能均比空白組差。 化纖膠囊與模型組比較,APTT、PT、TT、AT-Ⅲ、PAF、FIB差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明化纖膠囊干預(yù)組對(duì)膿毒癥凝血功能障礙有明顯的治療作用。

      表1 各組大鼠造模給藥3 d后凝血象化驗(yàn)結(jié)果比較(±s)

      表1 各組大鼠造模給藥3 d后凝血象化驗(yàn)結(jié)果比較(±s)

      與模型組比較,*P<0.05;與空白組比較,△P<0.05

      組 別 n A P T T(s) P T(s) T T(s)F I B(g/L)A T-Ⅲ(%) P A F(μ g/L)空白組 1 0假手術(shù)組 1 0模型組 1 0 2 0.7 6±1.9 3 8.5 8±0.5 7 1 1.0 3±1.2 3 2 0.0 4±1.6 4 8.7 2±0.6 5 1 1.0 6±1.1 8 4 0.6 8±2.6 0△ 1 3.7 0±2.2 6△ 2 0.5 9±1.8 9△2.7 7±0.5 0 2.6 6±0.4 8 1.1 9±0.1 7△1 0 5.0 0±3.1 9 0.9 5±0.1 8 1 0 5.8 0+3.9 7 0.9 1+0.2 3 6 6.7 0+6.8 3△ 1.9 6+0.2 7△化纖膠囊組 1 0 3 1.9 1±4.2 6*△ 1 0.2 0±1.4 8*△ 1 8.0 2±2.7 9*△1.8 7±0.4 1*△8 8.7 0+8.3 6*△ 1.5 7+0.2 9*△

      3 討 論

      隨著醫(yī)療水平的提高許多疾病揭開了神秘的面紗,醫(yī)學(xué)難題正在被逐漸地破解,可是膿毒癥作為死亡率最高的疾病之一仍在危害人類的生命[5]。雖然膿毒癥的發(fā)病機(jī)理尚未被完全揭示,但可以確定的是膿毒癥發(fā)病與炎癥、免疫、凝血等病理生理改變有十分密切的關(guān)系[6]。目前對(duì)膿毒癥凝血功能異常的研究已受到國(guó)際上的重視,已經(jīng)成為攻克膿毒癥的主要研究方向[7-8]。膿毒癥導(dǎo)致的凝血功能異常是多方面原因引起的,既有凝血系統(tǒng)的異常,也有抗凝系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的異常,并且各因素之間相互促進(jìn)。

      近些年中西醫(yī)結(jié)合治療急危重病逐漸得到國(guó)內(nèi)外的認(rèn)可[9-11]。本文通信作者梁群教授從事急危重癥研究20多年,在運(yùn)用中藥治療膿毒癥方面提出自己的一些觀點(diǎn)[12]。關(guān)于膿毒癥梁教授認(rèn)為嚴(yán)重膿毒癥階段的中醫(yī)基本病機(jī)為“瘀血阻絡(luò)”,基本病因?yàn)橥飧辛拘?,膿毒癥的毒邪侵犯人體后激發(fā)人體正氣抗邪從而導(dǎo)致邪正紛爭(zhēng),虛實(shí)錯(cuò)雜,最終形成膿毒癥之復(fù)雜病機(jī)[13]。六淫之中屬寒邪致病最重,寒邪主收斂凝滯,寒邪侵襲人體,使得血凝脈瘀。膿毒癥往往伴隨發(fā)熱,熱邪煎熬血液使其變得黏稠,形成熱壅血瘀。內(nèi)熱熾盛、熱灼津液、灼傷血脈,致使血不能循經(jīng)運(yùn)行,溢出脈外成瘀血。疾病發(fā)生耗傷正氣,正氣虛損,不能固攝脈絡(luò)之血,血不循經(jīng)導(dǎo)致血溢脈外,出現(xiàn)離經(jīng)之血即為瘀,最終膿毒癥出現(xiàn)瘀血阻絡(luò)?;w膠囊是梁教授結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)和中醫(yī)學(xué)的基本理論針對(duì)膿毒癥正虛毒損、瘀滯絡(luò)脈的病因病機(jī),運(yùn)用活血、解毒、扶正的藥物可發(fā)揮其多靶點(diǎn)治療的特點(diǎn),彌補(bǔ)了膿毒癥在臨床治療上的不足[14-15]?;w膠囊中黃芪為君,益氣扶正要藥;臣以黨參、丹參、當(dāng)歸、川芎;佐以白術(shù)、茯苓、熟地黃;黨參與黃芪合用增加其益氣扶正之功,丹參、當(dāng)歸、川芎共奏活血解毒通經(jīng)之效。茯苓助白術(shù)利水,增加健脾益肺之功,熟地黃滋陰養(yǎng)血,加之甘草調(diào)和藥性,共同調(diào)節(jié)患者氣血與臟腑功能。

      AT-Ⅲ的變化影響著血液的凝固情況,AT-Ⅲ含量增加可以控制膿毒癥時(shí)血液高凝的情況。PAF的含量升高代表血液出現(xiàn)高凝狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)以“氣行則血行”的理論為指導(dǎo),應(yīng)用益氣中藥使血液得以按經(jīng)脈循行,加之活血化瘀解毒中藥改善血液高凝狀態(tài),維持血液循環(huán)穩(wěn)定使得凝血功能正常。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)益氣活血解毒方化纖膠囊使膿毒痛大鼠PAF含量降低、AT-Ⅲ升高,化纖膠囊組的 APTT,PT,TT,AT-Ⅲ,PAF,F(xiàn)IB 均優(yōu)于模型組,使凝血功能得到改善。應(yīng)用中藥制劑改善凝血安全有效,避免應(yīng)用常規(guī)西藥抗凝劑引起的副作用。本實(shí)驗(yàn)研究為中藥制劑治療膿毒癥凝血功能異常又提供了有力的依據(jù),為中醫(yī)藥治療急危重癥打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ),且為中藥治療膿毒癥的研究做出了貢獻(xiàn)。

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