精子DNA碎片率對輔助生殖結局的影響分析

漆艷萍 彭潔 戚青林

[摘要]目的 分析精子DNA碎片率對輔助生殖結局的影響。方法 選擇2015年6月～2017年6月在我院接受輔助生殖（體外受精-胚胎移植）治療的325例患者為研究對象，依據(jù)DNA碎片率（DFI）的不同分為A組（DFI≤17.6%）、B組（17.6%0.05）；②A、B、C三組受精率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），A、C兩組及B、C兩組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；A、B兩組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；③A、B、C三組生化妊娠率、臨床妊娠率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論 精子DNA碎片率對輔助生殖結局無顯著性影響，但一定程度上會對受精結局造成影響。

[關鍵詞]精子；DNA碎片率；輔助生殖結局

[中圖分類號] R714.8 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）11（b）-0101-03

[Abstract] Objective To analyze the effect of sperm DNA fragmentation index （DFI） on assisted reproductive outcomes. Methods A total of 325 patients who underwent adjuvant reproductive （fertilization-embryo transfer in vitro） treatment from June 2015 to June 2017 were enrolled in the study. They were divided into groups A （DFI≤17.6%）， B（（17.6%0.05）. The differences of fertilization rates among three groups were significant. To be specific， the cleavage rates and high quality embryo rates between group A and group C， and group B and group C （P<0.05）， while no much difference between group A and group B （P>0.05）. The biochemical pregnancy rate and clinical pregnancy rate of the three groups didn′t differ statistically （P>0.05）. Conclusion Sperm DFI has no significant effect on assisted reproductive outcomes， but it will affect the outcome of fertilization to some extent.

[Key words] Sperm； DNA fragmentation index； Assisted reproductive outcome

近年來，我國不孕不育的人數(shù)呈不斷增多的趨勢，不孕不育的影響因素有多種，如環(huán)境污染嚴重、生活習慣的改變以及精神壓力過大等，不孕不育不僅影響家庭和諧，還會給患者心理造成一定負擔，嚴重影響患者的身心健康[1]。臨床經(jīng)驗顯示，所有不孕不育患者中，至少有50%是由男方因素造成的，過去臨床常采用精液常規(guī)分析對男性生育能力進行判斷，但該方法無法取得理想的效果。隨著實驗室檢測技術的不斷發(fā)展，精子DNA檢測方法應用在臨床，并且成為臨床重點研究課題[2]。本研究重點對精子DNA碎片率對輔助生殖結局的影響效果進行分析，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2015年6月～2017年6月于我院接受輔助生殖（體外受精-胚胎移植）治療的325例患者作為研究對象，經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。納入標準：夫妻雙方染色體檢查結果正常，單純由女性輸卵管因素導致不育，且女性年齡在36周歲以下。排除重度少弱精子癥患者，中途退出本研究或放棄治療等[3]。依據(jù)DNA碎片率（DFI）的不同分為A組（DFI≤17.6%）、B組（17.6%0.05），具有可比性。

1.2檢測方法

①精液標本用生理鹽水調(diào)整濃度為500～1000萬/ml（密度為100×106左右，一般為90 μl生理鹽水+10 μl精液）。②溶液A溶解（90～100℃）5 min，放置在37℃恒溫箱5 min，加入30 μl精液混合。③20 μl瓊脂糖精液加入到玻片上，蓋上蓋玻片，放置在4℃冰箱5 min。④從冰箱中取出后，立即放入溶液B（母液1 ml加入9 ml蒸餾水混勻，重復使用。）中7 min，放入溶液C（一次性使用）10 ml中25 min，然后分別浸入蒸餾水中1 min、75%乙醇5～8 min、100%乙醇1 min，取出后自然晾干。⑤染色：加溶液D 10滴染色2 min，加溶液E 10滴染色10 min（期間充分混勻），自來水下沖洗5 s，自然晾干后400倍鏡下觀察500個精子涂片形態(tài)[4]。

1.3觀察指標及判定標準和計算方法

觀察指標：①精液常規(guī)參數(shù)，包含精子濃度、精子正常形態(tài)率、前向精子百分率、總活力[5]。②體外受精（IVF）受精結局，包含受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率；③妊娠結局，包含生化妊娠率、臨床妊娠率[6]。計算方法：①2PN受精率=2PN受精卵數(shù)/MII卵數(shù)×100%[7]。②2PN卵裂率=2PN卵裂數(shù)/2PN受精卵數(shù)×100%[8]。③優(yōu)質(zhì)胚胎率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/2PN受精卵數(shù)×100%[9]。判定標準：①生化妊娠：發(fā)生在妊娠5周內(nèi)的早期流產(chǎn)，血中可以檢測到HCG升高，>25 mIV/ml或尿妊娠試驗陽性，但超聲波檢查看不到孕囊，提示受精卵著床失敗[10]。②臨床妊娠：宮腔內(nèi)見妊娠囊則為臨床妊娠[11]。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1三組精液常規(guī)參數(shù)的比較

A、B、C組精子濃度、精子正常形態(tài)率、前向精子百分率、總活力比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

2.2三組IVF受精結局的比較

三組受精率比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；A與B組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；A與C組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；B與C組卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表2）。

2.3三組妊娠結局的比較

三組生化妊娠率、臨床妊娠率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表3）。

3討論

不孕不育治療的首要條件是對病因進行準確診斷，過去臨床主要采用常規(guī)檢查進行病因診斷，但接近一半比例的患者無法找到明確的病因，無法得到有效的治療[12]。隨著近些年醫(yī)療水平的進步，相關學者指出，精子DNA碎片率異常可能是造成不孕不育的原因之一，即使是常規(guī)檢查結果正常的患者，精液中也可能存在較高比例的DNA結構損傷的精子[13]。精子DNA碎片化的機制有多種，如精子異常凋亡、氧化應激及精子發(fā)生過程中的染色質(zhì)組裝異常等。精子異常凋亡是指生理、病理條件下發(fā)生的以細胞核為表現(xiàn)的細胞死亡，而精子暴露在過量的氧分子中，可能造成多聚不飽和脂肪酸的過氧化，導致精子細胞膜結構受損，并且精子核染色質(zhì)的組裝過程容易受到機體內(nèi)外環(huán)境有害因素干擾，導致精子遺傳物質(zhì)方面出現(xiàn)缺陷[14]。目前國外部分生殖中心已經(jīng)開展精子DNA碎片率的檢測，并應用在輔助生殖結局的預測，但國內(nèi)外學者關于精子DNA碎片率檢測得出的結論存在較大差異，關于精子DNA碎片率對輔助生殖結局的影響存在爭議[15]。本研究主要以我院接受輔助生殖（體外受精-胚胎移植）治療的325例患者為研究對象，回顧性比較分析DNA碎片率的不同對精液常規(guī)參數(shù)、IVF受精結局及妊娠結局的影響，本研究結果顯示，DNA碎片率的不同對精液常規(guī)參數(shù)（包含精子濃度、精子正常形態(tài)率、前向精子百分率、總活力）無顯著影響，DNA碎片率越高受精率越低，高DNA碎片率對卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率會造成一定程度影響。

綜上所述，對精子DNA碎片進行研究有重要意義，可為輔助生殖結局預測提供相應依據(jù)，對精子DNA碎片率高的患者早發(fā)現(xiàn)、早治療，可提高助孕的有效性。由于本實驗樣本有限，實驗結果需要大量樣本做進一步研究，本實驗結果僅供臨床作為參考。

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（收稿日期：2018-04-26 本文編輯：崔建中）