不同受體羊同期發(fā)情及胚胎移植效果的研究

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(1.甘肅省畜牧獸醫(yī)研究所；甘肅 平?jīng)?74400；2. 甘肅省畜牧產(chǎn)業(yè)管理局；3.甘肅省華池縣畜牧獸醫(yī)局)

湖羊和小尾寒羊都是我國(guó)優(yōu)秀綿羊品種，成述儒(2009)等對(duì)湖羊和小尾寒羊系統(tǒng)發(fā)育研究，這兩個(gè)品種綿羊親緣關(guān)系近，可能起源于共同祖先。湖羊和小尾寒羊都具有性成熟早，多胎性好和非季節(jié)性發(fā)情等特點(diǎn)，這兩種羊分別被引入隴東地區(qū)進(jìn)行舍飼圈養(yǎng)，很快了適應(yīng)隴東氣候條件，并保持原有的高效繁育性能。綿羊同期發(fā)情技術(shù)是利用外源激素控制或者改變綿羊卵巢的活動(dòng)規(guī)律，使母羊卵巢處于相同的發(fā)育階段，在預(yù)定的時(shí)間內(nèi)集中發(fā)情排卵，從而用于人工授精配種或胚胎移植，有報(bào)道山羊和綿羊同期發(fā)情和胚胎移植受胎率與季節(jié)性和處理藥品影響比較大。本試驗(yàn)旨在研究隴東地區(qū)湖羊和小尾寒羊在繁殖季節(jié)秋季同期發(fā)情處理效果，并選擇同期發(fā)情整體度高和黃體質(zhì)量好的羊，作為胚胎移植的受體羊，研究其受胎率，以提高當(dāng)?shù)厝庋蚺咛ヒ浦布夹g(shù)水平，通過(guò)以點(diǎn)帶面的作用，加快隴東地區(qū)肉羊繁殖新技術(shù)的推廣，促進(jìn)隴東地區(qū)舍飼肉羊產(chǎn)業(yè)提質(zhì)增效示范作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)羊的時(shí)間、地點(diǎn)和天氣

本試驗(yàn)于2017年9月～2017年10月在慶陽(yáng)市華池縣綠野公司羊場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)期間天氣以晴朗為主，最低溫度1℃，最高溫度23℃，平均氣溫16℃，平均日照10.5 h/d。

1.2 試驗(yàn)羊的選擇及飼養(yǎng)管理

選擇舍飼養(yǎng)殖的湖羊和小尾寒羊，通過(guò)虎紅平板檢測(cè)無(wú)布氏桿菌傳染病，無(wú)繁殖性疾病，泌乳性好，經(jīng)產(chǎn)3～4胎次的母羊。湖羊和小尾寒羊各60只，進(jìn)行分組和隔離，試驗(yàn)羊粗飼料以玉米青貯30%，小麥秸稈和干苜蓿70%，每天采食2～3 kg，精料玉米、胡麻渣和麩皮為主，每天飼喂0.5～1 kg，羊圈懸掛礦物質(zhì)鹽磚，自由飲水，水中添加多維電解質(zhì)。

1.3 試驗(yàn)藥品

羊用孕酮海綿栓(CIDR，Zoetis Australia公司，新西蘭生產(chǎn))，內(nèi)含孕酮0.3 g/支；孕馬血清促性腺激素(PMSG，寧波市三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，規(guī)格1 000 IU/支；氯前列腺烯醇(PG，上海市計(jì)劃生育科學(xué)研究所)，規(guī)格0.2 mg/支。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)將60只湖羊隨機(jī)分2組，為A組和B組，每組30只，每組分3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)相隔1 d，60只小尾寒羊隨機(jī)分為2組，為C組和D組，每組分3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)相隔1 d。A組和C組同期發(fā)情采用“CIDR+PG+PMSG”處理方案I，B組和D組同期發(fā)情采用“CIDR+PG”處理方案II。

表1 湖羊和小尾寒羊同期發(fā)情處理方案

試驗(yàn)羊放栓前，用溫水清洗尾部，并擦拭干凈，將CIDR栓溫柔放置于試驗(yàn)羊陰道，用量為1枚/只，A組和C組試驗(yàn)羊頸部肌肉注射PMSG，量為250 IU/只，A組、B組、C組和D組試驗(yàn)羊PG用量用法相同，臀部肌肉注射，均為0.1 mg/只，同期發(fā)情方案見(jiàn)表1。

1.5 試情和發(fā)情鑒定

撤栓后12 h開(kāi)始試情，用性欲旺盛、無(wú)疾病并戴有試情布的公羊上午、下午各試情1次，間隔12 h，以母羊搖尾、外陰腫脹并接受爬跨視為發(fā)情。

1.6 黃體檢查及胚胎移植

受體羊根據(jù)同期發(fā)情狀況，受體羊和供體羊發(fā)情相差在12 h內(nèi)，對(duì)受體羊做腹腔手術(shù)檢查黃體，確定黃體數(shù)量和大小，受體羊2個(gè)卵巢中有一個(gè)大黃體(表面積在0.5×0.5 cm2以上)或者2個(gè)以上小黃體，均可作為胚胎移植合格受體羊。本試驗(yàn)胚胎來(lái)自黑頭薩?？斯w羊，供體羊與受體羊經(jīng)過(guò)同期發(fā)情處理，供體羊同時(shí)做超數(shù)排卵處理，通過(guò)沖胚，鏡檢優(yōu)質(zhì)胚胎，手術(shù)法移植給受體母羊[2]。對(duì)移植后35 d不返情的羊，再經(jīng)過(guò)B超妊娠診斷，確定有胎兒者為受孕羊。

1.7 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)同期發(fā)情率，黃體合格率，受胎率等用百分?jǐn)?shù)表示，差異顯著性采用SPSSl9.0中t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同品種受體羊同期發(fā)情效果

由表2可知，經(jīng)藥物和激素同期發(fā)情處理試驗(yàn)羊，湖羊組和小尾寒羊組的同期發(fā)情率分別為88.33%(52/60)和85%(50/60)，兩者差異不顯著(P>0.05)。而且湖羊同期發(fā)情主要集中在撤栓后13～60 h，期間發(fā)情率為83.33%，小尾寒羊同期發(fā)情主要集中在撤栓后0～48 h，期間發(fā)情率為81.67%。這可能是不同品種間遺傳因素和對(duì)激素敏感程度不同造成的結(jié)果。

表2 湖羊和小尾寒羊同期發(fā)情的效果

注:同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，相同表示差異不顯著(P>0.05)。

2.2 不同處理方案同期發(fā)情效果

應(yīng)用不同同期發(fā)情方案處理試驗(yàn)羊，由表3可知，同期發(fā)情方案I和方案II的發(fā)情率分別是90%(54)和80%(48)，兩者差異顯著(P<0.05)，方案I同期發(fā)情率顯著高于方案II的發(fā)情率10%，說(shuō)明不論受體羊是湖羊還是小尾寒羊，方案I的同期發(fā)情效果明顯。

表3 不同處理方案對(duì)兩種羊的同期發(fā)情效果

注:同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，相同表示差異不顯著(P>0.05)。

2.3 不同受體羊胚胎移植效果

根據(jù)受體羊和供體羊發(fā)情的同期性，供體羊在撤栓后13～36h之間集中發(fā)情，并做間隔12h的2次本交配種，對(duì)發(fā)情的102只受體羊采用手術(shù)法打開(kāi)腹腔，觀察黃體大小和質(zhì)量，并選擇合格黃體羊進(jìn)行鮮胚移植。由表4可知，其中發(fā)情的52只湖羊和50只小尾寒羊中，黃體合格羊分別為37只和32只，黃體合格率分別為71.17%(37/52)和64%(32/50)，兩者差異不顯著(P>0.05)，對(duì)黃體合格者，做單胚胎移植，妊娠數(shù)分為別25只和21只，受胎率分別為67.57%(25/37)和65.63%(21/32)，兩者差異不顯著(P>0.05)，37只受體湖羊組中有2只難產(chǎn)，小尾寒羊組全部順產(chǎn)，但兩者差異不顯著(P>0.05)。

表4 不同品種受體羊胚胎移植效果

注:同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)小寫(xiě)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，相同表示差異不顯著(P>0.05)。

3 討論

3.1 不同品種對(duì)同期發(fā)情和胚胎移植的影響

湖羊和小尾寒羊都是我國(guó)高繁殖率綿羊，一般作為商品肉羊的基礎(chǔ)繁殖母羊，普通綿羊發(fā)情是季節(jié)性明顯，一般集中在春秋兩季發(fā)情。湖羊和小尾寒羊引入隴東地區(qū)繼續(xù)保持了它們的多胎性和全年四季發(fā)情的優(yōu)良特點(diǎn)。本試驗(yàn)用不同方案處理對(duì)兩個(gè)種綿羊進(jìn)行同期發(fā)情，湖羊和小尾寒羊在撤栓后，湖羊有88.33%發(fā)情，集中在撤栓后13～36 h，小尾寒羊同期發(fā)情率低于湖羊發(fā)情率3.33%，而且集中在撤栓后0～48 h，而供體羊發(fā)情配種在撤栓后13～36 h，基本與湖羊集中發(fā)情時(shí)間段相吻合，結(jié)果是湖羊組胚胎移植受胎率高于小尾寒羊組，說(shuō)明供體羊和受體羊發(fā)情時(shí)間越接近，受胎率越高。另外，湖羊組整體發(fā)情率高于小尾寒羊組，可能與舍飼環(huán)境有關(guān)，湖羊從南方浙江到引進(jìn)北方隴東地區(qū)，一直舍飼養(yǎng)殖，該品種習(xí)慣于舍飼環(huán)境，而小尾寒羊養(yǎng)殖習(xí)慣用半舍飼半放牧，舍飼養(yǎng)殖下，需要充足的運(yùn)動(dòng)場(chǎng)，故兩種都在全舍飼養(yǎng)殖下，運(yùn)動(dòng)量不知可能是影響小尾寒羊同期發(fā)情率低的因素之一。

3.2 不同處理方案對(duì)同期發(fā)情的影響

Keith J Btteridge(2003)研究表明，同期發(fā)情技術(shù)是胚胎移植體系中重要環(huán)節(jié)，某一個(gè)品種家畜同期發(fā)情方法和途徑還不具體。本試驗(yàn)采用兩種同期發(fā)情方案處理胚胎移植受體羊，方案I中應(yīng)用“CIDR+PG+PMSG”，其同期發(fā)情率顯著高于方案II“CIDR+PG”，手術(shù)后對(duì)發(fā)情的受體羊黃體檢查，方案I組中黃體質(zhì)量和大小優(yōu)于方案II組。這與聶競(jìng)舟(2013)等人研究小尾寒羊同期發(fā)情結(jié)果一致，“CIDR+PG+PMSG”處理同期發(fā)情效果優(yōu)于“CIDR+PG”，這可能孕馬血清促性腺激素(PMSG)類(lèi)似促卵泡素(FSH)和促黃體素(LH)的雙重活性，但以FSH的作用為主，因此有著明顯的促卵泡發(fā)育的作用，同時(shí)有一定的促排卵和黃體形成的功能，故形成功能黃體效果好。因此，在舍飼肉羊胚胎移植受體羊同期發(fā)情處理中，應(yīng)用“CIDR+PG+PMSG”激素組合優(yōu)先采納。