乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條在無償獻血篩查中的應(yīng)用探討

馬曉軍 楊文勇 李治鵬 楊帆 蔡海艷

（廣元市中心血站 四川 廣元 628017）

膠體金免疫層析技術(shù)，其原理為將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，當(dāng)移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合，聚集在檢測帶上，形成可肉眼觀察到的顯色結(jié)果。該種檢測方法具有結(jié)果判定清晰快速、具有較好的特異度和靈敏度且操作簡便等特點[1]。為進一步保證臨床用血安全，降低血液HBV及TP陽性報廢率，我站于2017年2月開始采用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條（膠體金法），進行獻血前快速篩查。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

所有檢測標(biāo)本均來自廣元市2015年7月—2018年7月的84141例無償獻血者，獻血者年齡18至55歲，均體檢合格，ALT試紙條篩查ALT＜50U/L，硫酸銅比重法測量血紅蛋白，結(jié)果均符合要求。其中2015年7月—2017年1月獻血者樣本，為未開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合快速篩查項目前的樣本；2017年2月—2018年7月的獻血者樣本，為經(jīng)乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條快速篩查后HBsAg及TP陰性樣本。

1.2 儀器與試劑

儀器：低溫低速離心機、冰箱、冰柜、Hamilton STAR全自動加樣儀、FAME全自動酶免檢測儀。

試劑：獻血前篩查采用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試劑（廈門英科創(chuàng)新），進行HBsAg、抗-TP快速檢測，試劑批號：2016123354、2017043311、2017113338、2018023308。ELISA采用兩種不同廠家的酶免試劑進行HBsAg、抗-TP檢測，HBsAg 檢測試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒，批號：B20160823、B20170102（北京萬泰生物）6G0215、6M0223（法國伯樂）；TP檢測試劑：梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒，批號：N20170309、N20170309、N20161130（北京萬泰生物），2017020308、2017041108、2016092108（珠海麗珠）。

1.3 方法

1.3.1 快速篩查方法 對2017年2月—2018年7月無償獻血者樣本，采用乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條進行快速檢測。

1.3.2 ELISA檢測方法 對快速檢測合格且其他篩查結(jié)果均符合要求的無償獻血者樣本進行ELISA試驗。試驗嚴(yán)格按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》要求，同時采用2種不同廠家生產(chǎn)的ELISA試劑樣本進行HBsAg及TP抗體檢測，檢測過程按照SOP及試劑使用說明書進行。

1.3.3 統(tǒng)計分析開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條進行快速檢測前、后的血液HBV及TP陽性報廢率。

2.結(jié)果

2015年7月—2017年1月，未開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條快速篩查項目前，41674例無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本336例，占比0.81%，TP陽性樣本409例，占比0.98%。見表1。

表1 41674例標(biāo)本中HBV、TP陽性標(biāo)本比例

2017年2月—2018年7月，開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條快速篩查項目后，42467例初篩合格無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本317例，占比0.75%，TP陽性樣本200例，占比0.47%。見表2

表2 42467 例標(biāo)本中HBV、TP陽性標(biāo)本比例

3.討論

酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA）是指將抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)與酶的催化反應(yīng)相結(jié)合的檢測技術(shù)。其具有靈敏度高，特異性強，利于自動化操作等特點。ELISA檢測具有比膠體金法更高的靈敏度及特異度，但ELISA檢測需要借助特定的檢測設(shè)備，對環(huán)境、溫度等有較高的要求，且耗時較長[2]，因此采供血機構(gòu)對獻血者標(biāo)本的檢測一般為血液標(biāo)本采集結(jié)束后進行。膠體金法具有操作簡便、結(jié)果判定清晰快速等優(yōu)點，但相比于ELISA法，其靈敏度差，弱陽性多，容易出現(xiàn)漏檢；溶血及脂血的影響也會造成現(xiàn)假陰性[3]。

長久以來，減少對不合格血液采集所造成的資源浪費，降低成本，提升獻血服務(wù)效率及水平，進一步保障了臨床用血安全，一直是采供血機構(gòu)的關(guān)注熱點，因此對無償獻血者獻血前采用操作簡便、結(jié)果判定清晰快速的膠體金法進行快速篩查就顯得尤為重要。文獻表明，HBsAg、TP金標(biāo)試紙條技術(shù)在獻血前檢測中得到了廣泛應(yīng)用，有效降低了血液檢測不合格率[4-5]。

我站檢測結(jié)果，2015年7月—2017年1月，未開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條進行快速篩查前，41674例無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本336例，占比0.81%，TP陽性樣本409例，占比0.98%。2017年2月—2018年7月，開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條進行快速篩查后，42467例初篩合格無償獻血者樣本中共計檢出HBV陽性樣本317例，占比0.75%，TP陽性樣本200例，占比0.47%。對比可知，開展聯(lián)合快速篩查項目后，HBV及TP陽性率均低于項目開展前，其中TP陽性率降低最為明顯。

因我站開展乙型肝炎病毒表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條進行快速篩查前，對HBV采用了HBsAg單項目檢測試紙條進行快速篩查，所以HBV陽性率降低不多，但仍使HBV陽性率由0.81%降低到0.75%?？梢娨倚透窝撞《颈砻婵乖?梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條與HBsAg單項目試紙條相比，具有更高的靈敏度。其原因為乙型肝炎病毒表面抗原/ 梅毒聯(lián)合檢測試紙條采用膠體金，其分子量大、穩(wěn)定、顯色持久、遷移速度慢，具有更好的潛在穩(wěn)定性、精確性及可重復(fù)生產(chǎn)性等特點使得其適合于在快速檢測中的應(yīng)用[6]。

綜上所述，乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試紙條有一定的特異性及敏感性，能有效降低采供血機構(gòu)對不合格血液采集所造成的資源浪費，進一步保障了臨床用血安全，對于獻血前篩查具有重要意義。