桑杜口服液增強豬藍耳疫苗免疫效果

陳曉蘭， 楊海峰， 張 龍

(江蘇農牧科技職業(yè)學院，江蘇泰州 225300)

豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的豬繁殖與呼吸障礙性疾病，又稱豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，簡稱PRRS)，該病以繁殖障礙、呼吸困難、耳朵藍紫色為主要癥狀，嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，在發(fā)病過程中還會并發(fā)其他傳染病[1]。該病的發(fā)生沒有明顯的季節(jié)性，通常經呼吸道傳播，患病豬和帶毒豬均可以向空氣中排毒，嚴重污染周圍的環(huán)境，若消毒措施做得不到位，病毒能在豬場內長期存在。氣候驟變或未經檢測直接引進豬種，是本病誘因[2]。

目前該病沒有特殊的治療方法，預防被認為是最為有效的手段。而藍耳疫苗在免疫過程中，經常會出現(xiàn)免疫失敗，疫苗免疫效果差是其中最為重要的原因。因此，本研究在藥理試驗基礎上，選擇桑杜口服液(MP-EUP oral solution)作為免疫增強劑，觀察其對豬藍耳疫苗免疫效果的影響。

1 材料與方法

1.1 藥物和疫苗

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome viru，簡稱PRRSV)活疫苗(R98株，批號為1201030)，購于江蘇南農高科技股份有限公司，根據(jù)使用說明在臨用前用40 mL滅菌生理鹽水進行稀釋。

復方桑杜口服液，是由桑葉多糖和杜仲水提物制成的口服液，總多糖含量為24 mg/mL，由江蘇農牧科技職業(yè)學院提供。取適量體積桑杜口服液，將其稀釋為2.4、1.6、0.8 mg/mL，待用。

1.2 試劑與儀器

PRRSV ELISA抗體檢測試劑盒，購自武漢科前生物股份有限公司；Porcine IgG ELISA KIT、Porcine IL-2 ELISA KIT、Porcine IFN-γ ELISA KIT均購自生工生物工程(上海)股份有限公司；高速冷凍離心機，購自上海安亭科學儀器廠；酶標儀-ELX800，購自美國伯騰儀器有限公司。

1.3 動物及免疫

100頭30日齡健康三元雜交仔豬(海安某養(yǎng)殖場)，飼喂豬全價飼料。隨機分為5組，每組20頭。分組與處理方法見表1。33日齡時各免疫組頸部肌注射稀釋好的PRRSV活疫苗(R98株)，1 mL/頭，各給藥組分別于免疫前3 d開始給藥，桑杜口服液高、中、低劑量組分別灌胃總多糖濃度為2.4、1.6、0.8 mg/mL的桑杜口服液稀釋溶液各5 mL。連續(xù)給藥 7 d，首免后30 d(即63日齡時)進行二免(二免方法同首免)，二免前3 d對3個給藥組同法給藥。

注：MP-EUPH表示桑杜口服液高劑量；MP-EUPM表示桑杜口服液中劑量；MP-EUPL表示桑杜口服液低劑量。下表同。

1.4 檢測指標

1.4.1 臨床體征觀察 每天觀察記錄各組豬的精神狀態(tài)、采食、飲水、糞便等變化情況。

1.4.2 血清抗體及相關細胞因子含量 豬首次免疫后7、14、21、28 d，每組隨機抽取4頭豬，進行前腔靜脈采血，5 mL/頭，制備血清。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，簡稱ELISA)測定血清中豬藍耳特異性抗體效價，并測定免疫后7、14、21 d各組血清中白介素2(IL-2)、γ-干擾素(IFN-γ)、免疫球蛋白G(IgG)等細胞因子的分泌量。

1.4.3 體質量 分別于30日齡和60日齡稱取各組豬體質量，并計算平均增質量率：增質量率=[(稱量體質量-首免前體質量)/首免前體質量]×100%。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，用SPSS 18.0軟件進行Duncan’s多重分析，比較血清抗體、相關細胞因子及體質量變化。

2 結果與分析

2.1 臨床體征變化

試驗期間，各組豬精神狀態(tài)良好，采食、飲水正常，糞便正常，未見死亡。

2.2 血清抗體效價的變化

由表2可知，在首免前，各組血清特異性抗體效價無顯著差異；在首免后7 d，各給藥組的血清抗體效價均顯著高于免疫對照組和空白對照組；在首免后14 d，中劑量組抗體效價顯著高于其他各組；在首免后21、28 d，高、中劑量組均顯著高于免疫對照組和空白對照組。

表2 中藥復方多糖對免疫豬藍耳疫苗豬血清抗體效價的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下表同。

2.3 血清IL-2濃度的變化

由表3可知，豬首次免疫豬藍耳疫苗后7 d，桑杜口服液中劑量組血清中的IL-2濃度顯著高于除高劑量組外的其他各組；在首免后14 d，中劑量組血清中IL-2濃度顯著高于其他各組；在首免后21 d，高、中劑量組血清中IL-2濃度顯著高于其他各組。

表3 血清中IL-2濃度的變化

2.4 血清IFN-γ濃度的變化

由表4可知，豬首次免疫豬藍耳疫苗后7、14 d，復方桑杜口服液高、中劑量組血清IFN-γ濃度顯著高于其他各組；在首免后21 d，中劑量組血清IFN-γ濃度顯著高于除高劑量組外的其他各組。

表4 血清中IFN-γ濃度的變化

2.5 血清IgG濃度的變化

由表5可知，豬首次免疫豬藍耳疫苗后7 d，各免疫組血清IgG濃度顯著高于空白對照組；在首免后14 d，桑杜口服液所有給藥組血清IgG濃度顯著高于免疫對照組和空白對照組；在首免后21 d，桑杜口服液組中劑量組血清IgG濃度顯著高于免疫對照組和空白對照組。

表5 血清中IgG濃度的變化

2.6 各組豬體質量的變化

由表6可知，各組仔豬30日齡時體質量相似，無顯著差異；60日齡時復方桑杜口服液中劑量組體質量和增質量率最大，增質量率顯著高于其他各組。

表6 各組體質量的變化

3 結論與討論

機體免疫力低下常常誘發(fā)動物疾病的發(fā)生[3]。中藥多糖有抗腫瘤、增強免疫[4]、降低血糖、抗癌[5]、抗衰老、抗輻射等多種作用[6]。因綠色、環(huán)保、低毒、低殘留等特點[7]，其增強免疫活性倍受重視[8]。因此，在藥理研究基礎上，開展桑杜口服液增強免疫的臨床效果研究。

PRRSV免疫豬后，在血清中會產生特異性PRRSV抗體，抗體效價越高，則產生的免疫保護力越強[9]。因此，本試驗選擇豬藍耳病血清特異性抗體作為疫苗免疫水平的指標。結果表明，在免疫后的所有時間點桑杜口服液中劑量組豬藍耳病血清特異性抗體效價顯著高于低劑量組、免疫對照和空白對照組，與高劑量組效價相似。表明豬在免疫前3 d口服桑杜口服液，連續(xù)給藥7 d，能顯著提高特異性抗體產生水平，增強體液免疫功能。

T細胞在免疫應答中發(fā)揮關鍵作用，其釋放的多種細胞因子也參與細胞免疫、體液免疫、炎癥反應、損傷修復等多項重要生理過程[10]。IL-2主要由Th1細胞分泌，為T細胞生長因子，是造成T細胞增殖的主要細胞因子，除刺激T細胞外，還能刺激NK細胞的生長，并增強NK細胞的殺傷能力，同時激發(fā)B細胞生長，促進抗體的產生[10]。IFN-γ是由Th1細胞分泌的，參與調節(jié)細胞免疫[11]，如可激活單核細胞或巨噬細胞，誘導及增加MHCⅠ類分子和MHCⅡ類分子的表達，促進T細胞的分化，增強抗原呈遞，從而促進機體特異性免疫[10，12]。因此，血清中IL-2和IFN-γ的濃度的大小可反映機體細胞免疫功能[13]。本試驗結果表明，桑杜口服液高、中劑量組在首免后大部分時間點血清中IL-2和IFN-γ含量均顯著高于低劑量組、免疫對照組和空白對照組。說明桑杜口服液在高、中劑量時能顯著提高豬體細胞免疫功能。

動物在受到抗原刺激后可產生免疫球蛋白，其中IgG作為一種免疫球蛋白有抗菌、抗病毒、中和毒素、調理、凝集和沉淀抗原等作用，在體液免疫中非常重要[14]。本試驗中桑杜口服液高、中劑量組在首免后14和21 d血清中IgG含量均顯著高于免疫對照組和空白對照組，表明桑杜口服液配合豬藍耳病疫苗一起使用可顯著提高血清IgG水平，增強機體的抗菌、抗病毒和抗毒素水平。

結果顯示，60日齡時復方桑杜口服液中劑量組體質量和增質量率最大，表明中劑量組不僅能提高疫苗的免疫水平，還具有顯著的增質量效果?？梢缘贸鼋Y論：豬在接種豬藍耳病疫苗的同時以8 mg/頭劑量灌胃桑杜口服液，可顯著提高豬藍耳病特異性抗體產生水平，可增強IL-2、IFN-γ介導的細胞免疫功能和IgG介導的體液免疫功能。